門冬氨酸鳥氨酸注射液的處方與工藝優(yōu)化研究

王璐璐 陳少華 相 莉 鄭穩(wěn)生*

（中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所藥物傳輸技術(shù)及新型制劑北京市重點(diǎn)試驗(yàn)室，北京 100050）

門冬氨酸鳥氨酸注射液的處方與工藝優(yōu)化研究

王璐璐 陳少華 相 莉 鄭穩(wěn)生*

（中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所藥物傳輸技術(shù)及新型制劑北京市重點(diǎn)試驗(yàn)室，北京 100050）

目的研究門冬氨酸鳥氨酸注射液的處方及制備工藝。方法通過(guò)考察門冬氨酸鳥氨酸注射液的性狀、色澤、pH、含量及有關(guān)物質(zhì)，得到優(yōu)選處方。結(jié)果本品最適pH值為 6.0～7.0，以 115 ℃熱壓蒸汽滅菌30 min作為本品的滅菌方法。本品在室溫避光放置12個(gè)月，各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)均在合格范圍內(nèi)。結(jié)論本品處方設(shè)計(jì)合理，工藝可行，質(zhì)量穩(wěn)定。

門冬氨酸鳥氨酸注射液；制備工藝；穩(wěn)定性

門冬氨酸鳥氨酸（Ornithine Aspartate，OA）最先于20世紀(jì)70年代在德國(guó)用于臨床，1991年收載德國(guó)藥典，并被美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于治療肝性腦病。由于OA能參與尿素代謝而降低血氨，在糾正肝性腦病和亞臨床型肝性腦病的臨床應(yīng)用中已得到認(rèn)可[1-3]。隨著應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)的積累，發(fā)現(xiàn)門冬氨酸鳥氨酸在促進(jìn)肝細(xì)胞修復(fù)，減輕肝細(xì)胞損害等方面有一定作用，已在肝臟的圍手術(shù)期和放、化療中作為護(hù)肝輔助治療，具有很好的安全性[4]。OA主要成分及其化學(xué)名稱為（S）-2，5-二氨基戊酸（s）-2-氨基丁二酸鹽，其結(jié)構(gòu)中有酰胺基團(tuán)，因此對(duì)光、氧、堿及酸均不穩(wěn)定。本文對(duì)OA注射液的處方及制備工藝進(jìn)行研究，并且通過(guò)穩(wěn)性試驗(yàn)確定制劑的有效期，為工業(yè)化生產(chǎn)提供基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

HP8453紫外分光光度計(jì)（美國(guó)惠普公司）；HPLC儀（美國(guó)Waters公司），泵：515、紫外檢測(cè)器2487、自動(dòng)進(jìn)樣器717plus Autosampler。OA注射液（中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所，批號(hào)：130101、130102、130103，規(guī)格為 10 mL：5 g）；OA原料（中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所，批 號(hào) ：201201。

2 方法與結(jié)果

2.1 OA注射液的制備：在避光條件下，于燒杯中加入煮沸冷卻至50 ℃的注射用水800 mL，氯化鈉6.0 g，亞硫酸氫鈉0.8 g，OA 5.0 g，溶解后用0.5 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為6.0～7.0，加注射用水至1 L，混勻，再加入0.1%活性炭（w/v），攪拌煮沸 30 min，趁熱濾過(guò)脫炭，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，濾液灌裝于10 mL安瓿中，通氮熔封。置流通蒸汽115 ℃滅菌30 min。

2.2 OA注射液含量及有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定[5]

2.2.1 色譜條件：Kromasil 100-5NH2柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈（50∶50）；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量 20 μL。

2.2.2 注射液中的OA含量：精密量取OA注射液0.2 mL(相當(dāng)于OA 100 mg)，置100 mL棕色量瓶中，加流動(dòng)相溶解并定容，作為供試品溶液。另取濃度為1 mg/mL的對(duì)照品溶液（精密稱取OA 25 mg置25 mL棕色量瓶中，加流動(dòng)相溶解并定容）。按外標(biāo)法計(jì)算供試品中OA的含量。

2.2.3 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定：精密量取本品2.0 mL，置100 mL容量瓶中，用流動(dòng)相定量稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；精密量取1 mL，置100 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為1%自身對(duì)照溶液。另取雜質(zhì)對(duì)照，精密稱定，用流動(dòng)相分別定量OA稀釋成一定濃度作為雜質(zhì)對(duì)照液，記錄峰面積，計(jì)算結(jié)果。

2.3 處方篩選及工藝優(yōu)化

2.3.1 pH值的選擇：照“2.1”項(xiàng)下方法配制OA注射液，分別用鹽酸溶液或氫氧化鈉溶液調(diào) pH 值為5.0、5.3、5.6、6.0、6.3、6.7、7.0、7.3、7.7、8.0，灌入10 mL安瓿瓶中，熔封，經(jīng) 115 ℃熱壓蒸汽滅菌30 min后，冷卻，觀察樣品色澤，測(cè)定其含量、有關(guān)物質(zhì)。結(jié)果表明，OA在pH6.0～7.0范圍的水溶液中有良好的穩(wěn)定性，結(jié)果見表1。

表1 pH值對(duì)樣品的影響

2.3.2 抗氧劑對(duì)OA注射液穩(wěn)定性影響：在處方中分別加入不同濃度的抗氧劑，照“2.1”項(xiàng)下方法配制OA注射液，考察其色澤、含量及有關(guān)物質(zhì)的變化，結(jié)果表明，抗氧劑在0.1%范圍內(nèi)，OA注射液穩(wěn)定性良好，結(jié)果見表2。

表2 抗氧劑對(duì)OA注射液穩(wěn)定性影響

2.3.3 活性炭對(duì)主藥的吸附考察：照“2.1”項(xiàng)下方法配制OA注射液，按溶液量分別加入0%、0.1%、0.2%、0.3% 的針用活性炭，攪拌煮沸30 min，趁熱濾過(guò)脫炭，觀察樣品色澤，測(cè)定其含量、有關(guān)物質(zhì)。由結(jié)果可見，活性炭對(duì)OA有吸附，活性炭加入量為0.3%時(shí)，主藥含量下降顯著，經(jīng)0.1%、0.2%、0.3%活性炭處理的藥液熱原檢查均符合標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，選擇溶液量的0.1%的針用活性炭處理藥液。見表3。

表3 活性炭對(duì)樣品的影響

2.3.4 滅菌條件考察：照“2.1”項(xiàng)下方法配制OA注射液，灌裝于10 mL安瓿瓶中，進(jìn)行高溫滅菌考察。結(jié)果顯示，3種滅菌條件下的無(wú)菌檢查均符合要求，且均不影響產(chǎn)品的性狀、pH值及含量，考慮生產(chǎn)成本，選擇 115 ℃ 熱壓蒸汽滅菌30 min作為本品的滅菌方法。見表4。

表4 滅菌溫度、滅菌時(shí)間對(duì)樣品的影響

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.4.1 影響因素試驗(yàn)：取按照“2.1”項(xiàng)下方法配制的 OA 樣品，分別于光照[（4500±500）lx]及高溫（60 ℃）條件下放置10 d，檢測(cè)樣品pH、色澤、含量、有關(guān)物質(zhì)及澄明度變化，結(jié)果見表5。OA注射液經(jīng)強(qiáng)光照射10 d后有關(guān)物質(zhì)增多，其他條件下pH、色澤、含量、澄明度均無(wú)明顯變化。提示本品對(duì)光較敏感，在制備和貯存過(guò)程中均須避光。

2.4.2 凍融試驗(yàn)：新藥研究單位在設(shè)計(jì)藥品的穩(wěn)定性考察實(shí)驗(yàn)方案時(shí)，往往注意通過(guò)一系列的影響因素實(shí)驗(yàn)來(lái)選定藥品的包裝與儲(chǔ)存條件，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)條件下的長(zhǎng)期留樣實(shí)驗(yàn)來(lái)確定產(chǎn)品的有效期[6]。但經(jīng)常會(huì)忽略一些特殊的藥品在運(yùn)輸或使用過(guò)程中因?yàn)闇囟鹊淖兓赡芙o產(chǎn)品的質(zhì)量所造成的不利影響。

美國(guó)FDA1998年6月發(fā)表的穩(wěn)定性指導(dǎo)原則草案對(duì)此問(wèn)題提出了一個(gè)解決的辦法，即對(duì)于易發(fā)生物相分離、黏度減小、沉淀或聚集的藥品需通過(guò)熱循環(huán)實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證其運(yùn)輸或使用過(guò)程中的穩(wěn)定性。作為影響因素實(shí)驗(yàn)的一部分，應(yīng)模擬藥品在運(yùn)輸與使用過(guò)程中可能碰到的溫度條件下循環(huán)考察上市包裝的藥品的穩(wěn)定性[7]。具體方法如下：對(duì)于可能暴露于冰點(diǎn)以下的藥品，熱循環(huán)實(shí)驗(yàn)應(yīng)包括三次循環(huán)，每次循環(huán)應(yīng)在-10～-20 ℃兩天，然后在40 ℃加速條件下考察2 d。觀察pH、色澤、含量、有關(guān)物質(zhì)及澄明度變化，結(jié)果見表6。

表6 低溫凍融試驗(yàn) （n=3）

2.4.3 長(zhǎng)期試驗(yàn)：檢測(cè)OA注射液長(zhǎng)期試驗(yàn)[（25±2） ℃，避光]的穩(wěn)定性（表7）。結(jié)果顯示，OA注射液室溫長(zhǎng)期放置18個(gè)月，各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)均在暫定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的合格范圍內(nèi)，故有效期暫定為1.5年。

表7 OA注射液長(zhǎng)期試驗(yàn)穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（n=3）

3 結(jié) 論

考察了OA注射液的處方和制備工藝，并對(duì)其質(zhì)量影響因素及長(zhǎng)期穩(wěn)定性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明所研制的OA注射液處方合理，工藝可行，質(zhì)量穩(wěn)定。本品對(duì)光敏感，須避光保存，通過(guò)對(duì)處方中pH值的考察，發(fā)現(xiàn)門冬氨酸鳥氨酸注射液pH值在6.0～7.0時(shí)均較穩(wěn)定，因此將本品的pH值控制范圍確定為6.0～7.0。本產(chǎn)品生產(chǎn)采用水浴式滅菌柜，F(xiàn)0值約為12，滅菌效力有充分的保證[8,9]。

[1] 趙麗,門冬氨酸鳥氨酸注射液抗肝性腦病的療效觀察[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥,2011,18(24):82-83.

[2] 劉海,郭致平.門冬氨酸鳥氨酸注射液治療肝性腦病的30例療效分析[J].中國(guó)社區(qū)醫(yī)師(醫(yī)學(xué)專業(yè)半月刊), 2008,20(1):36.

[3] 江必武,王平.門冬氨酸鳥氨酸注射液與綜合療法治療失代償期肝硬化35例[J].中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志,2005,15(5):46-47.

[4] 王一寧,金薇,高洪艷.門冬氨酸鳥氨酸治療慢性乙型肝炎的臨床研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育,2010,8(1):106.

[5] 蔣音,陳良,巫善明.門冬氨酸鳥氨酸的藥理作用與臨床應(yīng)用[J].世界感染雜志,2007,7(5):415-418.

[6] 繆寧梅,馬婕.高效液相色譜法測(cè)定門冬氨酸鳥氨酸注射液的含量[J].中國(guó)生化藥物雜志,2007,28(1):52-53.

[7] 王榮梅.高效液相色譜法測(cè)定鹽酸精氨酸注射液的含量[J].中國(guó)生化藥物雜志,2003,24(6):296-297.

[8] 高春,戴紅.門冬氨酸鉀鎂葡萄糖注射液中￡一門冬氨酸的HPLC測(cè)定[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志,2003,34(5):241-245.

[9] 黃晨,著林俏,蘇素紅,等.注射用門冬氨酸鳥氨酸與果糖注射液配伍的穩(wěn)定性考察[J].海峽藥學(xué), 2009,21(5):69.

Prescription and Optimization of ornithine aspartate injection

WANG Lu-lu, CHEN Shao-hua, XIANG Li, ZHENG Wen-sheng
(Institute of Materia Medica Chinese Academy of Medical Sciences, Key laboratory of Drug Delivery?Technology and Novel Formulations, Beijing 100050, China)

ObjectiveTo develop an injection formulation for ornitbinaspaetant injection.MethodsThe appearance, color, pH, drug content and related substances of the injection were used as indicators for screening the formulation.ResultsThe optimum pH for the injection formulation was 6.0-7.0 according to the stability. Pressing steam sterilization was performed at 115 for 30 minutes. The prepared product was stable when stored at room temperature in light-resistant container for 12 months.ConclusionThe developed injection formulation was stable and suitable for industrial production.

Ornitbinaspaetant injection; Formulation; Stability

R917

B

1671-8194（2014）36-0051-02

*通訊作者