虎耳草灌注劑的質量控制方法

鄭 巖 王紅霞 陳隨清

（河南中醫學院藥學院生藥學科，鄭州450008）

虎耳草灌注劑的質量控制方法

鄭 巖 王紅霞 陳隨清*

（河南中醫學院藥學院生藥學科，鄭州450008）

目的建立虎耳草灌注劑的質量控制方法。方法色譜柱為hxpersil ODS（250mm×4.0mm、5μm），流動相為甲醇-水（20∶80），流速為1.0ml／min，檢測波長275nm，柱溫30℃。結果巖白菜素的進樣量在0.0202～0.202μg之間與峰面積呈良好線性關系（R2=0.9998），平均回收率為102.45%，RSD=2.66%。結論本方法靈敏、準確、重現性好，可用于虎耳草灌注劑的質量控制。

虎耳草灌注劑；巖白菜素；HPLC；質量控制

虎耳草，為虎耳草科虎耳草屬植物虎耳草（Sawifraga stolonifera Curt.）的干燥全草，能祛風清熱，涼血解毒，用于治療急性中耳炎、風熱咳嗽、風疹瘙癢、濕疹等［1］。是常用的民族藥，收載于《貴州省中藥材、民族藥質量標準》2003年版［2］。為貴州省著名制劑“咳速停膠囊”、“膽炎康膠囊”和“咳平膠囊”的主要原料藥［3］。虎耳草的主要成分有巖白菜素、槲皮素、槲皮苷、原兒茶酸、沒食子酸等［4］。其中，巖白菜素具有鎮咳祛痰作用，可用于治療慢性支氣管炎。藥理研究表明虎耳草有抑菌、抗炎和鎮咳等作用［5］。本文擬以巖白菜素為指標，建立虎耳草灌注劑的HPLC質量控制方法，以保證虎耳草灌注劑的質量，為虎耳草進一步的藥理、藥效及臨床研究科學依據。

1 儀器與試藥

1.1 實驗儀器高效液相色譜儀（LC-20AT，日本島津公司），紫外檢測器（SPD-20A，日本島津公司），色譜工作站（CBM-102，日本島津公司）；循環水式多用真空泵（SHZ-95B，鞏義市予華儀器有限責任公司）；分析天平（BS2242S，北京賽多利斯儀器系統有限公司）；十萬分之一天平（梅特勒，Mettler Toledo AB 135-S）；自動雙重純水蒸餾器（SZ-93，上海亞榮生化儀器廠）；溶劑過濾器（HL，天津市恒奧科技發展有限公司）；數控超聲波清洗器（KQ-500DV，昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試劑甲醇（為色譜純，天津四友精細化學品有限公司，20110909）；提取用甲醇為分析純（北京化工廠，20110518）；雙蒸水為自制。

1.3 對照品巖白菜素為中國生物制品檢定所提供，批號（742-2000111），經HPLC檢測，含量＞99%。

1.4 樣品所用虎耳草灌注劑樣品為河南中醫學院三附院自制。

2 方法與結果

2.1 色譜條件色譜柱：phenomenex hydro ODS C18（250mm×4.6mm，4μm）色譜柱，流動相：甲醇-水（20∶80），流速：1.0ml／min，檢測波長：275nm，進樣量：10μl，柱溫：30℃。

2.2 對照品溶液制備精密稱取巖白菜素對照品，置于容量瓶中，加甲醇溶液并稀釋至刻度，搖勻，得濃度為0.0101mg／ml的對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備精密量取1ml虎耳草灌注劑，50%甲醇定容至50ml，用0.45μm濾膜濾過，作為供試品，備用。

2.4 陰性對照溶液的制備按處方比例配成不含虎耳草的陰性對照樣品，按2.3項下供試品溶液制備方法，制成陰性對照溶液，分別精密吸取陰性對照溶液、供試品溶液及對照品溶液各10μl，按上述色譜條件進樣測定，結果表明，陰性對照溶液色譜圖中與對照品相同保留時間處無吸收峰干擾。對照品、供試品及陰性對照對照溶液色譜圖見圖1-3。

圖1 巖白菜素標準品HPLC圖

圖2 供試品溶液HPLC圖

圖3 陰性對照溶液HPLC圖

2.5 方法學考察

2.5.1 線性關系的考察取巖白菜素對照品溶液，濃度為0.0101mg／ml，進樣量為2、4、6、10、14、20μl。以巖白菜素的峰面積（×10E5）為縱坐標，進樣量（μg）為橫坐標進行線性回歸，回歸方程為：x=14.72w+ 0.0106，R2=0.9998，表明巖白菜素的進樣量在0.0202～0.202μg之間與峰面積呈良好線性關系。

2.5.2 穩定性試驗精密吸取同一供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24、48小時進樣測定巖白菜素峰面積，計算RSD=1.63%。結果表明，供試液在本實驗條件下48小時內穩定性較好，結果見表1。

表1 虎耳草灌注劑穩定性試驗結果

2.5.3 精密度試驗精密吸取同一供試品溶液，重復進樣5次，分別測定巖白菜素峰面積，計算RSD=0.55%，表明此方法精密度良好。結果見表2。

表2 虎耳草灌注劑精密度實驗結果

2.5.4 重現性試驗按供試品溶液制備方法平行制備5份供試品溶液，分別測定巖白菜素平均峰面積，計算RSD=1.66%，表明此方法重現性良好。結果見表3。

表3 虎耳草灌注劑重現性實驗結果

2.5.5 加樣回收率試驗取六份已知巖白菜素含量的虎耳草灌注劑各0.5ml，精密稱定后，分別精密加入每1ml含巖白菜素0.295mg的標準品溶液0.5ml，其余按照2.3項下供試品溶液的制備方法制備，進樣測定，結果見表4。

表4 虎耳草灌注劑中巖白菜素加樣回收率實驗結果（%）

表5 虎耳草灌注劑含量測定結果

3 討論

測定結果表明，本實驗建立的HPLC法測定虎耳草灌注劑中巖白菜素含量的方法準確、靈敏、重現性好，可作為控制虎耳草灌注劑質量的有效方法，并為今后虎耳草的藥理、藥效及臨床研究研究提供科學依據。

［1］江蘇新醫學院.中藥大辭典［M］.上海：上海科學技術出版社，1997：1335.

［2］貴州省藥品監督管理局.貴州省中藥材、民族藥質量標準［S］.貴陽：貴州科技出版社，2003：235.

［3］徐昌艷，張麗艷，李燕，等.黔產苗藥虎耳草的HPLC指紋圖譜研究［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18（15）：73-76.

［4］羅厚蔚，吳葆金，陳節庵，等.虎耳草有效成分的研究［J］.中國藥科大學學報，1988，19（1）：1.

［5］李亨東，李英倫，范巧佳，等.四川寶興虎耳草活性部位篩選［J］.中草藥，2009，40：187-189.

Qu alit y Co n t r ol Me t h o d f o r Saxif r a g a Pe r f usio n Ag e nt

Zheng Yan W ang Hongxia Chen Suiqing

?

(Henan University of Traditional Chinese M edicine，Zhengzhou，Henan Province，450008，China)

ObjectiveTo establish a qualitx control method for the Sawifraga perfusion agent.MethodsThe analxsis vas performed on phenomenon hxdro C18column（250mm×4.6mm，4μm），the mobile phase vas MeOH-H2O（20∶80）vith a flov rate at 1.0ml／min，and detection vavelength at 275nm under column temperature 30℃.ResultsThere vas a good linear relationship vhen the sample size of bergenin vas at a range of 0.0202μg～0.404μg（R2=0.9998），the recoverx vas 102.45%，with RSD at 2.66%.ConclusionThis method vas simple，ewact，and reproducible to be used for the qualitx control of the Sawifraga perfusion agent.

Sawifraga perfusion agent；Bergenin；HPLC；Qualitx control

10.3969／j.issn.1672-2779.2014.02.102

：1672-2779（2014）-02-0150-02

??張文娟 本文校對：李雪菊

2013-10-19）

*通訊作者