Ang—1和Tie2在高血壓患者內(nèi)皮祖細(xì)胞中表達(dá)水平及臨床意義研究

馮曉等

[摘要] 目的 探討Ang-1及其受體Tie2在高血壓患者循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞中的表達(dá)水平并評價其臨床意義。 方法 選擇杭州師范大學(xué)附屬醫(yī)院2012年1月～2013年6月高血壓Ⅰ、Ⅱ級和Ⅲ級患者各15例；正常體檢人群30名為對照組。RT-PCR法檢測各組外周血中內(nèi)皮祖細(xì)胞內(nèi)Ang-1、Tie2 mRNA表達(dá)水平；Western-blot法測定Tie2酪氨酸磷酸化水平。結(jié)論 患者循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞內(nèi)Ang-1和Tie2表達(dá)隨高血壓分級的增加逐漸下調(diào)，治療后水平升高，可能與高血壓病血管內(nèi)皮細(xì)胞修復(fù)的調(diào)控機制密切相關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 高血壓；內(nèi)皮祖細(xì)胞；Ang-1；Tie2

[中圖分類號] R544.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2014）04（b）-0004-04

[Abstract] Objective To discuss the expression of Ang-1 and Tie2 of peripheral endothelial progenitor cells in patients with hypertension， as well as its clinical significance. Methods 15 patients with gradeⅠ， Ⅱ and grade Ⅲ hypertension respectively were studied in the Affiliated Hospital of Hangzhou Normal University from January 2012 to June 2013. 30 healthy subjects were recruited as normal controls. Expression of Ang-1 and Tie2 mRNA of the peripheral blood endothelial progenitor cells were measured by RT-PCR， Tie2 tyrosine phosphorylation level was measured by Western-blot. Results mRNA levels of Ang-1 and Tie2 of endothelial progenitor cells in patients with grade Ⅲ hypertension were lower than those of the patients with grade Ⅱ， Ⅰ hypertension and control group （P < 0.05）， the levels of those in patients with grade Ⅱ hypertension were lower than those of grade Ⅰ hypertension and the control group （P < 0.05）. Tie2 tyrosine phosphorylation level of endothelial progenitor cells in patients with grade Ⅲ hypertension was lower than that of patients with grade Ⅱ， gradeⅠ hypertension and control group （P < 0.05）， and that of grade Ⅱ hypertension patients was lower than patients with grade Ⅰ hypertension and the control group （P < 0.05）. After routine treatment， the expression of Ang-1 and Tie2 mRNA or Tie2 phosphorylation level were higher than those of before treatment （P < 0.05）. Conclusion Ang-1 and Tie2 expression of circulating endothelial progenitor cells in patients with hypertension reduced with the increasing of hypertension grade， but after treatment these levels elevated， may have participated in the regulation of vascular endothelial cells in patients with hypertension.

[Key words] High blood pressure； Endothelial progenitor cells； Ang-1； Tie2

高血壓的嚴(yán)重程度與血管內(nèi)皮細(xì)胞的損害程度呈正相關(guān)，作為前體細(xì)胞，內(nèi)皮祖細(xì)胞具有較強的增殖、分化潛能，參與損傷內(nèi)皮細(xì)胞的修復(fù)、維持血管穩(wěn)定，因此對于防止動脈粥樣硬化及再狹窄具有重要意義[1-2]。血管生成素-1（Ang-1）及其酪氨酸激酶受體Tie2是血管生成的重要調(diào)節(jié)因子，廣泛表達(dá)于內(nèi)皮祖細(xì)胞上，對于調(diào)控內(nèi)皮祖細(xì)胞的功能具有重要意義[3-4]。本研究通過不同分級的原發(fā)性高血壓患者內(nèi)皮祖細(xì)胞Ang-1/Tie2的表達(dá)變化，探討Ang-1/Tie2信號通路在修復(fù)與逆轉(zhuǎn)疾病發(fā)展中的重要價值。

1 資料與方法

1.2.2 治療方法

針對Ⅱ級和Ⅲ級高血壓患者采取常規(guī)降壓方案，主要包括β受體阻斷劑、鈣離子拮抗劑、阿司匹林以及他汀類藥物，連續(xù)使用4周，所有患者治療后血壓均達(dá)到130/80 mm Hg以下。

1.2.3 Ang-1和Tie2水平測定

所有研究對象入選前1周內(nèi)未服用任何降壓藥和抗氧化劑，清晨分別抽取空腹外周血20 mL置入無菌肝素抗凝管內(nèi)，加入Ficoll液4℃離心分離單個核細(xì)胞層并采用差速貼壁法純化內(nèi)皮祖細(xì)胞。

1.2.3.2 采用Western-blot法測定Tie2酪氨酸磷酸化水平 分別提取各組內(nèi)皮祖細(xì)胞總蛋白后取20 μg，行聚丙烯酰胺凝膠電泳，4℃轉(zhuǎn)膜12 h，蛋白封閉，加入抗Tie2酪氨酸磷酸化一抗、二抗，顯影、壓片。膠片經(jīng)圖像分析系統(tǒng)測得Tie2磷酸化/β-actin光密度比值反映體內(nèi)活化Tie2受體表達(dá)水平。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2.1 各組內(nèi)皮祖細(xì)胞Ang-1、Tie2 mRNA表達(dá)和Tie2酪氨酸磷酸化水平比較

3 討論

原發(fā)性高血壓形成的高血流應(yīng)切力可直接損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞。血壓越高，損傷越大，越難以修復(fù)，進而發(fā)展為動脈粥樣硬化、冠心病等嚴(yán)重合并癥[5-7]。內(nèi)皮祖細(xì)胞是具有增殖分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞的一類前體細(xì)胞，與新生血管生成、內(nèi)皮細(xì)胞修復(fù)有關(guān)[8]。然而越來越多的研究發(fā)現(xiàn)[9-11]，高血壓患者循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量減低、功能障礙，內(nèi)皮細(xì)胞得不到修復(fù)與更新，病情無法逆轉(zhuǎn)。如何解釋這一現(xiàn)象對于疾病的控制至關(guān)重要。

Tie2是一類酶聯(lián)受體，廣泛表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞及內(nèi)皮祖細(xì)胞上，Ang-1、Ang-2是其主要配體，Ang-1能保持血管內(nèi)皮的穩(wěn)定性，促使血管成熟；Ang-2是Ang-1內(nèi)源性拮抗劑，破壞血管的穩(wěn)態(tài)。Ang-1與Tie2受體結(jié)合后酪氨酸殘基被磷酸化進而發(fā)揮細(xì)胞的生物學(xué)功能[12-14]。內(nèi)皮祖細(xì)胞修復(fù)內(nèi)皮細(xì)胞的過程，很可能依賴Ang-1/Tie2信號通路精密調(diào)控，通路表達(dá)失衡可直接影響內(nèi)皮祖細(xì)胞的動員和遷移，加速血管內(nèi)皮的損傷及炎癥過程[15-16]。內(nèi)皮祖細(xì)胞上Ang-1/Tie2通路表達(dá)與高血壓之間的關(guān)系目前國內(nèi)鮮有研究。

本次實驗結(jié)果顯示，隨著患者高血壓分級的增高，內(nèi)皮祖細(xì)胞Ang-1和Tie2 mRNA水平逐級降低，且具有生物活性的磷酸化Tie2水平也平行下調(diào)，表明信號通路的活性降低，血管內(nèi)皮細(xì)胞的修復(fù)能力減弱，從而解釋了內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量下降及功能喪失的原因。同時也觀察到，經(jīng)過降壓治療后，Ang-1和Tie2的表達(dá)明顯改善，說明高血壓的因素去除之后，內(nèi)皮細(xì)胞的修復(fù)活動增強，再次證實了內(nèi)皮祖細(xì)胞依賴Ang-1/Tie2系統(tǒng)調(diào)控的推斷。

此外，本研究也發(fā)現(xiàn)，高血壓Ⅰ級患者的Ang-1和Tie2水平較之對照組并無明顯差異，推測此階段的內(nèi)皮祖細(xì)胞仍具有較強的代償能力，機體處于平衡狀態(tài)，血壓控制之后，發(fā)生心血管意外的概率明顯低于其他兩組。因此，內(nèi)皮祖細(xì)胞Ang-1和Tie2表達(dá)也可作為預(yù)測血管功能和心血管危險度的指標(biāo)之一[17-20]。

綜上所述，內(nèi)皮祖細(xì)胞Ang-1/Tie2的表達(dá)可能與高血壓病血管損傷有密切關(guān)系，可通過Ang-1/Tie2表達(dá)的水平對患者的血管損傷程度和治療效果進行判斷，進而在臨床上發(fā)揮重要作用。

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（收稿日期：2013-11-09 本文編輯：程 銘）

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（收稿日期：2013-11-09 本文編輯：程 銘）

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（收稿日期：2013-11-09 本文編輯：程 銘）