正交試驗法優化陳皮中橙皮苷的提取工藝研究

徐寧寧

(徐州生物工程職業技術學院生物工程系，江蘇 徐州 221000)

陳皮由蕓香科植物柑橘的成熟果皮干燥后制得，具有理氣健脾，燥濕化痰的功效，臨床上主要用于治療消化系統及呼吸系統疾病。主要成分包括黃酮、肌醇、維生素、揮發油、檸檬烯、對羥福林，胡蘿卜素、果膠、N-甲基酪胺等，其中陳皮黃酮的主要成分有:橙皮甙、新橙皮苷、柚皮甙元、川陳皮素、紅橘素。

橙皮苷在陳皮中的含量約為3%，臨床上用其維持血管正常滲透壓，降低血管脆性，抑制口腔癌、大腸癌等的癌變以及抗病毒作用。橙皮苷提取工藝的研究，對開發和利用柑桔皮、增加經濟效益具有重要的意義。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

陳皮，無水乙醇，橙皮苷對照品。

1.2 儀器與設備

紫外可見分光光度計:T6;R系列旋轉蒸發儀:上海申生科技有限公司;多用真空泵:SHZ-DⅢ循環水式，鞏義市予華儀器有限責任公司;FA-220413電子天平;其他試劑均為分析純。

1.3 工藝流程

1.4 陳皮藥材的不同提取方法的比較

1.4.1 提取方法

⑴水蒸氣蒸餾提取法。稱取陳皮粗粉20g，加入250mL水，照蒸餾法提取并收集餾液，然后將提取液濾過后進行濃縮，混合到含揮發油的蒸餾液中，調至20mL，待用。

⑵乙醇回流提取法。取陳皮粉末20g，加8倍量乙醇加熱回流提取2次，每次1h，濾液濃縮調節至20mL，待用。

⑶乙醇滲漉法。稱取陳皮藥材20.0g，將其粉碎使成粗粉，用60%的乙醇作溶劑，浸漬24小時后，緩緩進行滲漉，速度保持每分鐘3-5mL，收集漉液200mL，濃縮并調節至20mL，靜置，取上清液即得。

1.4.2 檢測波長的選擇

取適量的橙皮苷對照品，加入少量的甲醇進行溶解，稀釋制成濃度為0.1mg/mL，在200-400 nm波長范圍內測定吸收光譜，橙皮苷在甲醇中的最大吸收波長為283 nm。分析掃描結果可得出，橙皮苷的最大吸收波長為283nm。因此將HPLC的檢測波長設定為283nm。

1.4.3 色譜條件

色譜柱:使用C18-ODS反向柱，填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠。

流動相:乙腈-水-36%的冰乙酸溶液(19:81:0.8);流速為0.8-1.2 mL/min;

檢測波長:UV283 nm;峰分離符合規定，無拖尾，保留時間適中，理論塔板數達2500以上，符合定量要求。

1.4.4 對照品溶液的制備

精密稱定適量的橙皮苷對照品，加入甲醇，使其濃度為0.1mg/mL，即得。

1.4.5 供試品溶液的制備

表1 不同的提取方法的橙皮苷的量

分別量取以上制得的濃縮液1mL，各加入20mL甲醇后超聲處理20min，收集濾液，即為供試品溶液。經過水蒸氣蒸餾法與乙醇回流法和滲漉法提取的陳皮提取液中橙皮苷的含量見表1。

由試驗結果可知，水蒸氣蒸餾法提取的橙皮苷遠少于乙醇回流提取和乙醇滲漉提取法所得，又因為處方中的香櫞和紫蘇葉與陳皮同時提取，綜合考慮，故選取乙醇滲漉提取法作為陳皮的提取工藝。乙醇的相關影響因素將在工藝條件優化中研究確定。

2 陳皮的提取工藝的研究

乙醇提取工藝中，乙醇的濃度、用量、提取的時間和次數對提取效果的影響較大，為提高藥材的提取收率，本次實驗以橙皮苷的量、干浸膏的量為指標，采用正交試驗法對其進行研究，根據實踐經驗，其中將溶劑的濃度、溶劑的用量、提取的時間、提取的次數作為因素，故以b(3 4)進行設計，結果以橙皮苷的量、干浸膏的量為依據進行了考察。

2.1 橙皮苷標準曲線的繪制

準確稱取橙皮苷標準品0.0500g，于100mL容量瓶中，用堿性乙醇溶液配制成0.5mg/mL的母液。從中各取出0.25mL、0.50mL、0.75mL、1.00mL、1.25mL、1.50mL、1.75mL、2.00mL、2.25mL、2.50mL、2.75mL的母液，分別移入50mL的容量瓶中，用堿性乙醇溶液將其稀釋至刻度，搖勻。用紫外-可見分光光度計在283.0nm波長下測定標準溶液的吸光度，以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程Y=0.1571X+0.0015，相關系數R2=0.9992，表明在0.25～2.75mL的濃度范圍內，線性關系良好。

2.2 最大吸收波長的確定及對提取物的檢驗

取一定體積的上述標準溶液(質量濃度0.004mg/mL)稀釋至10mL。用空白液對照進行紫外光譜分析，測定出其最大吸收波長。另取上述的陳皮提取液進行實驗，做空白對照然后再進行紫外光譜分析，通過對比可得出，兩者的最大吸收波長基本一致，由此可以確定出所提的物質為橙皮苷。

2.3 提取液中橙皮苷含量的測定

將以上測得的吸光度A的值代入下式，計算出橙皮苷的提取率/%:

2.4 陳皮提取工藝設計方案如下

精密稱取陳皮藥材50.0g，按照表2進行提取，過濾、定容、備用。

表2 正交實驗設計表

3 結果與討論

3.1 結果與分析

表3 提取工藝正交實驗表

表4 干浸膏方差分析表

表5 橙皮苷提取率方差分析表

3.2 討論

上表顯示，在溶劑的濃度、溶劑的用量、提取時間、提取次數四個影響因素中，溶劑的濃度是主要影響因素，以干浸膏的用量作為依據時，最佳工藝為A2B2C3D2;以橙皮苷的提取率作為依據時，最佳工藝為A2B2C2D3。極差排列順序為:RA＞Rc＞RB＞RD，方差分析顯示乙醇的濃度，能顯著影響橙皮苷的產率，其余的因素對橙皮苷影響不大，因此最佳陳皮提取工藝為:15倍量75%的乙醇滲漉提取2次，每次2h。

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