測定宮頸癌不同分期及正常宮頸組織MiR—140水平的臨床意義分析

吳燕華　胡崢　鄒文　齊國華

【摘要】 目的：檢測不同組織的MiR基因水平，探討宮頸癌與該基因的關系。方法：收集2012年1月-2013年6月期間來本院及中南大學湘雅二醫院治療的宮頸疾病患者的臨床資料，共62例，包括32例良性患者（良性組）和30例惡性患者（觀察組），另選擇同期來兩院行健康體檢者30例（對照組），測定其MiR-140水平。結果：觀察組MiR-140 OD值為（0.82±0.30），高于對照組的（0.53±0.11）和良性組的（0.61±0.15），比較差異均有統計學意義（P<0.05）；Ⅳ期、Ⅲ期MiR-140 OD值分別為（0.92±0.21）和（0.85±0.23），均明顯高于Ⅰ期和Ⅱ期，比較差異均有統計學意義（P<0.05）。結論：宮頸癌患者體內MiR-140水平高表達，且病情越重越明顯。

【關鍵詞】 MiR-140； 宮頸癌； 疾病分期

宮頸癌是婦科惡性腫瘤較為常見的一種，近年來其發病有年輕化的趨勢。其中鱗狀上皮癌較為多見。據估計，40%的患者可能在確診后9個月內病死，針對持續性或復發性宮頸癌，患者病死率幾乎高達80%[1-2]。而能否準確進行臨床分期，關系到治療方案的制定及預后的預判，目前臨床分期主要通過專科檢查來確定，本研究通過檢測不同組織的MiR基因水平，探討宮頸癌與該基因的關系，通過干擾該基因，從而達到治療宮勁癌的目的，現在將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2012年1月-2013年6月期間本院及中南大學湘雅二醫院收治的經手術并病理證實的宮頸疾病患者的臨床資料，共62例，其中良性為32例（良性組），惡性腫瘤為30例（觀察組）；其中鱗癌25例，腺癌4例，腺鱗癌1例；年齡34～71歲，平均（48.0±10.4）歲；患者主要體征為陰道排液、不規則或接觸性出血。另選擇同期來兩院行健康體檢者30例（對照組）。三組患者的年齡等一般資料比較差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性。所有研究對象均知情同意。

1.2 試劑與儀器 由日本TOYOBO公司提供的RT-PCR試劑盒；由美國Invitrogen公司提供的Trizol；紫外分光光度計。0.5 mol/LEDTA緩沖液（pH 8.0）、PBS緩沖液（pH 7.2～7.4）。RNA酶抑制劑、反轉錄反應液、反轉錄酶、PCR反應液、Taq DNA聚合酶。

1.3 檢測方法 取宮頸癌組織，良性組織，正常組織的新鮮標本，無菌條件下放入50 mL的無菌管中，立即置于液氮罐中。所有患者均經病理學檢驗的證實。用Trizol試劑提取各組細胞總RNA，紫外分光光度計檢測mRNA純度并計算其濃度，RT-PCR條件為：37 ℃ 60 min，95 ℃ 10 min，cDNA產物置于-20 ℃保存。根據Genebank序列，設計上述壞死相關因子和對照β-actin的引物序列并合成。cDNA在引物指導下擴增PCR產物。獲得的產物經凝膠電泳后，在凝膠成像系統上分析相關因子mRNA的豐度。

1.4 宮頸癌的臨床分期 0期：原位癌（不列入浸潤癌治療效果統計中）；Ⅰ期：癌局限于宮頸（癌擴展到宮體，在分期中不予考慮）；Ⅱ期：癌灶超越宮頸，陰道浸潤未達下1/3，宮旁浸潤未達盆壁；Ⅲ期：癌灶超越宮頸，陰道浸潤已達下1/3，宮旁浸潤已達盆壁，有腎盂積水或腎無功能者均列入Ⅲ期，但非癌所致的腎盂積水及腎功能者除外；Ⅳ期：癌播散超出真骨盆，或癌浸潤膀骯黏膜及直腸黏膜[3-5]。

1.5 統計學處理 采用SPSS 13.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗，計數資料采用 字2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組MiR-140結果比較 本文結果顯示，觀察組MiR-140 OD值為（0.82±0.30），高于對照組的（0.53±0.11）和良性組的（0.61±0.15），比較差異均統計學意義（P<0.05）。良性組和對照組比較差異無統計學意義（P>0.05）。

2.2 不同分期MiR-140結果比較 本文結果顯示，TNM分期中Ⅳ期（n=7）、Ⅲ期（n=13）MiR-140 OD值分別為（0.92±0.21）和（0.85±0.23），均高于Ⅰ期（n=4）（0.60±0.12）和Ⅱ期（n=6）（0.69±0.08），比較差異均有統計學意義（P<0.05）。

3 討論

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一，適宜的腫瘤標志物的選擇對于宮頸癌的輔助診斷、療效判斷等意義重大。MiR-140是micRNAs家族成員之一，可表達于軟骨中，并調節其發育。MiR-140的特異性表達及改變可能是致病的主要原因。有學者研究表明，在利用敲除目標基因miR-140制備大鼠疾病模型的過程中，miR-140的缺失和年齡相關，可能原因是miR-140參與了調節軟骨發育的過程，導致蛋白多糖丟失及關節軟骨的纖維化并伴有加重跡象[6-10]。臨床中對于MiR指標在宮頸癌患者中的變化研究并不少見，但是對于MiR-140在宮頸癌患者局部組中的表達研究卻極為少見，因此對其進行研究的空間較大。有研究認為，MiR-140對于惡性腫瘤細胞的增殖及分裂，并對細胞的癌變有一定的影響作用，因此對其在良惡性宮頸疾病患者組織中的表達差異也有一定的檢測價值。

本研究結果顯示，觀察組MiR-140 OD值為（0.82±0.30），高于對照組的（0.53±0.11）和良性組的（0.61±0.15），比較差異均有統計學意義（P<0.05）。良性組和對照組比較差異無統計學意義（P>0.05）。提示MiR-140可在腫瘤患者中高表達。本研究采用的分期為FIGO分期標準，結果顯示，Ⅳ期、Ⅲ期MiR-140 OD值分別為（0.92±0.21）和（0.85±0.23），均高于Ⅰ期和Ⅱ期，比較差異有統計學意義（P<0.05）。提示，病情越重，MiR-140 OD值越高。endprint

綜上所述，宮頸癌患者體內MiR-140水平高表達，且病情越重越明顯。

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（收稿日期：2014-01-20） （本文編輯：黃新珍）endprint