高效液相色譜法在甘草鋅口腔復(fù)合膜劑測(cè)定中的應(yīng)用效果

應(yīng)寶洪+張慶鴻

[摘要] 目的 利用高效液相色譜法對(duì)甘草鋅口腔復(fù)合膜劑中的氨來(lái)呫諾與甘草酸的含量進(jìn)行測(cè)定，以提高口腔質(zhì)控的水平。方法 利用標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備方法稱(chēng)取適量的氨來(lái)呫諾和甘草酸單銨鹽的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行處理，對(duì)其峰面積進(jìn)行測(cè)定，最后利用回歸方程計(jì)算其各自的濃度。結(jié)果 經(jīng)測(cè)定與計(jì)算，氨來(lái)呫諾的精密度RSD約為0.51%；甘草鋅的精密度RSD約為0.58%，金屬鋅的含量約為0.66%，甘草酸的平均回收率約為98.82%。 結(jié)論 氨來(lái)呫諾可以有效地減輕患者的疼痛感，而甘草鋅則具有鋅與甘草酸的藥理作用，在臨床中具有推廣價(jià)值。

[關(guān)鍵詞] 高效液相色譜法；甘草鋅；口腔復(fù)合膜；氨來(lái)呫諾；甘草酸；口腔潰瘍

[中圖分類(lèi)號(hào)] R927 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2014）17-0131-03

Analysis on application effect of HPLC in licozinc oral composite membrane measurement

YING Baohong1 ZHANG Qinghong2

1.Department of Stomatology，Quzhou City People's Hospital in Zhejiang Province， Quzhou 324004，China；2.Department of Stomatology，Dental Hospital Affiliated to Medical College of Zhejiang University， Hangzhou 310000，China

[Abstract] Objective To measure the content of amlexanox and glycyrrhizic acid in licozinc oral composite film by high performance liquid chromatography， aim to improve the level of oral quality control. Methods The right amount of amlexanox and monoammonium glycyrrhizinate was taken by the preparation of standard curve method， then the peak area was determined， finally， the concentration was calculated by the regression equation. Results After the determination and calculation， amLexanox of precision of RSD was about 0.51%； licozinc of precision of RSD was about 0.58%， the zinc metal was about 0.66%， the average recovery rate of glycyrrhizic acid was about 98.82%. Conclusion Ammonia can effectively relieve the pain of patients， while licorice zinc has zinc and glycyrrhizic acid pharmacological effects， has the value of popularization in clinical practice.

[Key words] HPLC； Licozinc； Oral composite membrane； Amlexanox； Glycyrrhizic acid； Oral ulcer

在日常生活中，口腔潰瘍困擾著許多人，病發(fā)時(shí)會(huì)使人產(chǎn)生強(qiáng)烈的灼痛感，而且經(jīng)常反復(fù)發(fā)作，所以給口腔潰瘍患者造成了很大的痛苦[1]。如何提高口腔質(zhì)控水平，已成為當(dāng)前口腔潰瘍治療領(lǐng)域的一項(xiàng)重要課題。2013年11月，衢州市人民醫(yī)院利用高效液相色譜法對(duì)甘草鋅口腔復(fù)合膜中的氨來(lái)呫諾與甘草酸含量進(jìn)行了測(cè)定，目的是探究高效液相色譜法在口腔用藥方面的檢測(cè)效果，這對(duì)于提升口腔質(zhì)控水平有一定的實(shí)踐意義，具體測(cè)定情況報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1藥品與儀器

本次實(shí)驗(yàn)的時(shí)間為2013年11月，所選藥品為山東中科泰斗化學(xué)有限公司生產(chǎn)的批號(hào)為060624的氨來(lái)呫諾、中國(guó)生物制品鑒定所生產(chǎn)的批號(hào)為110731-200511的甘草酸單銨鹽、山西臨汾珠寶制藥有限公司生產(chǎn)的批號(hào)為061203的甘草鋅；天津凱通化學(xué)試劑三廠生產(chǎn)的乙酸銨（分析純）；天津市化學(xué)一廠生產(chǎn)的批號(hào)為90085的乙酸二鈉（分析純）、天津北方天意化學(xué)試劑廠生產(chǎn)的甲醇（分析純）、天津康科德科技有限公司生產(chǎn)的甲醇（色譜純）、天津化學(xué)試劑一廠生產(chǎn)的濃度為36%的乙酸與天津精細(xì)化工開(kāi)發(fā)中心生產(chǎn)的正丁醇、氯化鋅、氯化鈉和濃度為10%的HCI及自制重蒸水和亞鐵氰化鉀試液。

本次試驗(yàn)的儀器主要有孔徑為0.8μm、Ф為25的微孔濾膜；型號(hào)為BP210S的電子分析天平；由昆山超聲儀器有限公司生產(chǎn)的KQ-10B型號(hào)的超聲波清洗儀器；美國(guó)熱電公司生產(chǎn)的型號(hào)為SP8810的高效液相色譜儀和型號(hào)為spectra100的檢測(cè)器；天津中環(huán)實(shí)驗(yàn)鍋爐公司生產(chǎn)的高溫爐；Anastar色譜的工作站；坩堝鉗；坩堝和酸式滴定管。

1.2測(cè)定方法

1.2.1制備標(biāo)準(zhǔn)曲線 稱(chēng)取實(shí)驗(yàn)所需的氨來(lái)呫諾樣品量，保證其精密性，然后將其放入容量為50 mL的容量瓶中，并用流動(dòng)相溶液將其稀釋、溶解直至刻度，之后將其搖勻再制取實(shí)驗(yàn)所需的母液，保證其濃度為50 μg/mL，然后再分別吸取1.2、1.0、0.8、0.6、0.4、0.2 mL母液，放入10 mL的容量瓶里，再對(duì)其進(jìn)行稀釋直至要求刻度，最后搖勻得到梯度濃度分別為6.0、5.0、4.0、3.0、2.0、1.0 μg/mL的液體。最后測(cè)定所得的不同濃度的液體的峰面積，并利用回歸方程式來(lái)計(jì)算推測(cè)濃度與峰面積的關(guān)系。在計(jì)算時(shí)，相關(guān)系數(shù)r為0.9999，用X表示氨來(lái)呫諾的濃度，用Y表示峰面積，那么Y=69288X+6527.7。endprint

稱(chēng)取實(shí)驗(yàn)所需甘草酸單銨鹽樣品量，保證其精密性，然后將其放入容量為50 mL的容量瓶中，并用流動(dòng)相溶液將其稀釋、溶解直至刻度位置，之后搖勻制取實(shí)驗(yàn)所需母液，保證濃度為180 μg/mL[2]。然后再分別吸取2.0、1.8、1.6、1.4、1.2、1.0 mL母液，放入10 mL容量瓶里，再對(duì)其進(jìn)行稀釋直至要求刻度，最后搖勻得到梯度濃度分別為10.0、9.0、8.0、7.0、6.0、5.0 μg/mL的液體。最后測(cè)定所得的不同濃度的液體的峰面積，并利用回歸方程式來(lái)計(jì)算推測(cè)濃度與峰面積的關(guān)系。在計(jì)算時(shí)，相關(guān)系數(shù)r為0.9999，用X表示甘草酸單銨鹽的濃度，用Y表示峰面積，那么Y=6329.8X+3426。

1.2.2色譜的具體情況 色譜的具體情況為：流動(dòng)相為-0.2 mol/L的醋酸銨溶液和比例為67∶33∶1的冰醋酸甲醇；色譜柱為5μm，Ф為4.6mm×200mm的Kromasil-C18色譜柱；流速為0.8 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm；柱溫為正常室溫；進(jìn)樣量則為20μL。

1.2.3制備試驗(yàn)所需的樣品溶液 取10片4cm×2cm的藥膜，并將其剪碎，然后利用精密的方法對(duì)其稱(chēng)取1片藥劑的量，放到容量為250 mL的量瓶里，再用事先準(zhǔn)備好的流動(dòng)相溶液將其稀釋、過(guò)濾。最后稀釋到之前的5倍直至指定的刻度。陰性樣品溶液的制取方法與之相同。

1.2.4測(cè)定樣品的RSD值 準(zhǔn)備4cm×2cm的藥膜，氨來(lái)呫諾與甘草鋅的復(fù)合膜3批，并將其剪碎放到容量為250mL的量瓶中，用流動(dòng)相進(jìn)行稀釋直到指定刻度的位置，并將其搖勻，然后繼續(xù)稀釋至5倍獲得測(cè)試溶液[3]。對(duì)制得的溶液進(jìn)行取樣，每樣3份，并分別進(jìn)樣20μL，計(jì)算三次測(cè)試的平均值，最后再計(jì)算3批的RSD結(jié)果。

1.2.5測(cè)定回收率 將適量的甘草酸單銨鹽放入準(zhǔn)備好的陰性樣品溶液中，制成與樣品溶液濃度相當(dāng)?shù)姆謩e為120%、100%、80%的甘草酸單銨鹽溶液，并將其稀釋至5倍，再放入20μL的樣品進(jìn)行測(cè)定。最后統(tǒng)計(jì)其回收率，計(jì)算平均值與RSD數(shù)值[4]。同樣按照該法制備120%、100%和80%濃度的氨來(lái)呫諾溶液，再進(jìn)行相同的稀釋與測(cè)定，求其RSD值與回收率。

1.2.6測(cè)定重現(xiàn)性 取6份甘草鋅膜劑的樣品來(lái)制備試驗(yàn)所需的溶液，并和之前一樣進(jìn)樣20μL，然后計(jì)算其甘草酸的面積積分?jǐn)?shù)值，之后要對(duì)其RSD的數(shù)值進(jìn)行計(jì)算[5]。按照同樣的方法測(cè)定氨來(lái)呫諾的相應(yīng)數(shù)據(jù)，測(cè)定其重現(xiàn)性。

1.2.7測(cè)定穩(wěn)定性 把制備好的甘草酸單銨鹽溶液分別靜置8h、6h、4h、2h、1h、0h，然后再進(jìn)樣20μL，根據(jù)溶液的具體情況來(lái)測(cè)定其RSD的值與峰面積，并且用相同的辦法對(duì)氨來(lái)呫諾的制取溶液進(jìn)行測(cè)定，最終測(cè)算出其穩(wěn)定性的大小[6]。

1.2.8測(cè)定精密度 吸取濃度為7μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)的曲線溶液甘草鋅，并分別將其進(jìn)樣20μL，并且重復(fù)該動(dòng)作6次，對(duì)其峰面積與RSD進(jìn)行測(cè)定與計(jì)算[7]。然后按照相同的方法對(duì)氨來(lái)呫諾的相關(guān)數(shù)值進(jìn)行計(jì)算，測(cè)定其精密度。

1.2.9測(cè)定甘草鋅中鋅的含量 取3片4cm×2cm的甘草鋅藥膜，并分別對(duì)其進(jìn)行精密稱(chēng)量，記錄其質(zhì)量大小，然后放在準(zhǔn)備好的坩堝鉗里，并放在高溫爐里加熱1h，在加熱期間要保持其溫度維持在700℃。當(dāng)藥膜完全灰化以后再冷卻移至燒杯，加入2mL的濃度為10%的HCl溶解產(chǎn)生的殘?jiān)偌尤脒m量的鉻黑劑、10mL氯化銨和25mL水，再利用EDTA對(duì)其進(jìn)行滴定，當(dāng)溶液的顏色從紫紅色轉(zhuǎn)變?yōu)榧兯{(lán)色時(shí)即為制取成功[8]。

2結(jié)果

經(jīng)過(guò)測(cè)定與計(jì)算，氨來(lái)呫諾的重現(xiàn)性RSD約為0.22%，穩(wěn)定性RSD約為1.12%，精密度RSD約為0.51%，平均回收率約為99.62%；甘草鋅的重現(xiàn)性RSD約為0.82%，穩(wěn)定性RSD約為1.01%，精密度RSD約為0.58%。甘草酸的平均回收率約為98.82%。金屬鋅的含量約為0.66%。氨來(lái)呫諾與甘草酸的樣品含量測(cè)定結(jié)果具體見(jiàn)表1。

表1 氨來(lái)呫諾與甘草酸樣品含量的測(cè)定結(jié)果

3討論

隨著人們生活節(jié)奏的加快和飲食習(xí)慣的改變，口腔潰瘍的發(fā)病率出現(xiàn)逐年升高的趨勢(shì)，現(xiàn)在已經(jīng)高達(dá)20%[9，10]。目前，比較通用的治療口腔潰瘍的藥物有普通膜劑、含漱液、含片、涂劑和散劑等普通制劑。但是，對(duì)于人體口腔這個(gè)比較特殊的生理環(huán)境來(lái)說(shuō)，絕大多數(shù)的制劑都無(wú)法長(zhǎng)時(shí)間停留，無(wú)法滿足人體口腔的特點(diǎn)需求就無(wú)法在口腔的病變部位保持適量的藥物，所以治療效果總是差強(qiáng)人意。但是，隨著藥物水平的不斷發(fā)展，復(fù)合膜劑的出現(xiàn)在一定程度上彌補(bǔ)了這些傳統(tǒng)藥物的缺陷，它在含藥的膜上再覆蓋了一層膜，這樣就可以和含藥膜組合成雙層的復(fù)合膜，作為親水層的含藥層，向內(nèi)貼在患處，這樣可以保證膜劑更好地完成單向釋藥的過(guò)程，保證口腔潰瘍的病變部位接受到足夠的藥量[11]。

氨來(lái)呫諾（Amlexanox）是食品和藥物管理局批準(zhǔn)的用于治療口腔潰瘍的一種藥物。根據(jù)臨床試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)可知，約5%的氨來(lái)呫諾在治療輕微性復(fù)發(fā)性口腔類(lèi)潰瘍時(shí)非常安全，具有可行性，可以有效地減輕患者的疼痛感，并且可以提高患者口腔潰瘍部位創(chuàng)面的愈合程度。而甘草鋅則是將豆科類(lèi)植物甘草（Glycyrrhi-zauralensis Fisch）的干燥根進(jìn)行分離得到的[10-12]。它是鋅與甘草酸的結(jié)合物，因此，具有鋅與甘草酸這兩種藥物的藥理作用。首先，鋅可以提高口腔創(chuàng)傷組織自身的再生能力，提高黏膜的再生能力；其次，甘草酸可以抗炎、抗?jié)儭⒔舛尽⒖共《竞湍I上腺皮質(zhì)激素等，從而加速患者口腔潰瘍部位的愈合[13，14]。為了使這兩種藥物的質(zhì)量得到恰當(dāng)?shù)目刂疲緦?shí)驗(yàn)將氨來(lái)呫諾、甘草酸與金屬鋅作為指標(biāo)，利用高效液相色譜法對(duì)氨來(lái)呫諾與甘草酸進(jìn)行測(cè)定，并且利用配位滴定法對(duì)金屬鋅的含量進(jìn)行測(cè)定。

經(jīng)過(guò)試驗(yàn)，本文對(duì)氨來(lái)呫諾與甘草酸樣品中的含量做了具體的測(cè)定，為高效液相色譜法在甘草鋅口腔復(fù)合膜的質(zhì)控中提供了相應(yīng)的依據(jù)。由此可知，甘草酸口腔復(fù)合膜對(duì)于口腔潰瘍等特殊的口腔病變部位的治療具有很好的療效，可以補(bǔ)給患者口腔病變部位足夠的治療藥物，幫助患者早日康復(fù)，比傳統(tǒng)的普通膜劑、含漱液、含片、涂劑和散劑等普通制劑效果更好，而且，從本次試驗(yàn)兩種藥劑的制備、精密度、平均回收率、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性以及鋅含量等的測(cè)定結(jié)果可知，該口腔復(fù)合膜具有穩(wěn)定性好、利用率高、密度精確等優(yōu)點(diǎn)[15-17]。因此，這種復(fù)合膜藥劑更易于被廣大患者接受，具有很廣闊的市場(chǎng)發(fā)展空間。需要注意的是，在進(jìn)行制備與測(cè)定的過(guò)程中必須注意其準(zhǔn)確性，只有這樣才能保證測(cè)定結(jié)果的科學(xué)性。endprint

綜上，高效液相色譜法在測(cè)定復(fù)方甘草鋅口腔復(fù)合膜中的氨來(lái)呫諾與甘草酸含量的方法與配位滴定方法測(cè)定甘草鋅中鋅含量的方法具有很多優(yōu)點(diǎn)，操作方便，而且測(cè)定結(jié)果也十分準(zhǔn)確。因此，本文的試驗(yàn)方法在臨床中具有很大的推廣價(jià)值。

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（收稿日期：2013-11-06）endprint

綜上，高效液相色譜法在測(cè)定復(fù)方甘草鋅口腔復(fù)合膜中的氨來(lái)呫諾與甘草酸含量的方法與配位滴定方法測(cè)定甘草鋅中鋅含量的方法具有很多優(yōu)點(diǎn)，操作方便，而且測(cè)定結(jié)果也十分準(zhǔn)確。因此，本文的試驗(yàn)方法在臨床中具有很大的推廣價(jià)值。

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綜上，高效液相色譜法在測(cè)定復(fù)方甘草鋅口腔復(fù)合膜中的氨來(lái)呫諾與甘草酸含量的方法與配位滴定方法測(cè)定甘草鋅中鋅含量的方法具有很多優(yōu)點(diǎn)，操作方便，而且測(cè)定結(jié)果也十分準(zhǔn)確。因此，本文的試驗(yàn)方法在臨床中具有很大的推廣價(jià)值。

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