HPLC測定二甲雙胍格列美脲膠囊中的格列美脲含量

譚漢添 詹利之

HPLC測定二甲雙胍格列美脲膠囊中的格列美脲含量

譚漢添 詹利之

目的采用 HPLC方法測定二甲雙胍格列美脲膠囊中格列美脲的含量。方法色譜柱采用 Diamonsil C18( 200 mm × 4.6 mm, 5 μm) , 流動相為 0.05 mol/L甲酸銨緩沖液(pH 4) - 乙腈( 體積比為41∶63) , 檢測波長為228 nm, 流速10 ml/min。結果格列美脲的平均回收率為99.4% ( RSD = 1.0% , n =9) , 線性范圍為 0.1～0.6 mg/L(r=0.9991, n=6)。結論采用 HPLC方法測定二甲雙胍格列美脲膠囊中格列美脲的含量, 方法簡便、擁有較高準確性、專屬性, 且在測定過程中測量結果并不會受到鹽酸二甲雙胍的干擾, 效果較好, 可以應用到對該類復方制劑的質量控制過程中。

格列美脲含量；二甲雙胍；高效液相色譜法

作為第3 代磺脲類口服降糖藥, 針對呈漸進性發展的2型糖尿病的特點, 起效迅速、長效、高效、用量小、低血糖發生率低等是格列美脲所特有的優點。為了可以有效控制患者血糖, 臨床上往往采用不同作用機制的藥物聯合療法對患者進行針對治療［1］。二甲雙胍格列美脲膠囊往往會含有較高含量的鹽酸二甲雙胍, 而格列美脲含量則較小的特點, 作者使用HPLC 法對膠囊中格列美脲含量進行準確的測量。該方法靈敏、準確且不復雜, 可以有效避免鹽酸二甲雙胍對格列美脲測定的干擾?，F將報告總結如下。

1 儀器與材料

SPD-20A 紫外可見光檢測器、LC-20A 高效液相色譜儀、LCsolution 色譜工作站( 日本 Shimadzu公司) 。無水磷酸氫二鈉( 分析純, 天津瑞金特化學品有限公司) , 磷酸(分析純,沈陽經濟技術開發區試劑廠), 十二烷基硫酸鈉(分析純, 天津博迪化工股份有限公司), 重蒸水(實驗室自制) , 二甲雙胍格列美脲膠囊( 實驗室自制, 每片標示量格列美脲 2.0 mg, 鹽酸二甲雙胍 500 mg), 格列美脲對照品( 批號 100674-201102,中國藥品生物制品檢定所) 、鹽酸二甲雙胍對照品( 批號100664-200602, 中國藥品生物制品檢定所) , 乙腈( 色譜純,天津康科德科技有限公司) 。

2 方法與結果

2. 1色譜條件和系統適用性試驗 色譜柱： Diamonsil C18(200 mm ×4.6 mm, 5 μm), 流動相為0.05 mol/L甲酸銨緩沖液( pH 4)-乙腈(41：63), 檢測波長228 nm, 保持25℃柱溫, 進樣量25 μl。鹽酸二甲雙胍與格列美脲的分離度為 6.2, 保證兩者達到完全分離。

2. 2溶液的配制 取標示量鹽酸二甲雙胍500 mg、格列美脲2 mg的二甲雙胍格列美脲膠囊10粒, 取出內容物并研細,精密稱定［2］。按照50∶50的體積比加乙腈-水共 90 ml, 置于 100 ml 量瓶中, 首先利用頻率 59 kHz, 功率250 W的超聲處理40 min 然后后冷卻至室溫, 若未至刻度線則繼續加乙腈-水(體積比50∶50) 稀釋至刻度, 并搖勻, 濾過。精密量取續濾液1 ml, 置于50 ml量瓶中, 然后用體積比30：70的乙腈-水溶液稀釋至刻度, 搖勻, 作為供試溶液。

2. 3線性關系考察 精密稱取格列美脲10 mg , 置于100 ml量瓶中, 加適量甲醇, 溶解使用超聲處理, 待冷卻至室溫后加甲醇定容。精密量取 0.5、1.5、2.5、3.5、5. 0、10.0 ml, 分別置 50 ml 量瓶中, 用流動相定容。記錄峰面積時分別精密量取 50 μl 上述系列溶液進樣。以峰面積對濃度 ( μg/ml) 進行線性回歸, 得回歸方程為: Y=161.32X -3.25(r=0.9999), 結果表明: 1.121～ 21.245 μg/ml格列美脲與峰面積的線性關系良好。

分別精密量取混合儲備液0.5、1.0、1.5、2. 0、2.5、3.0 ml,置 10 ml 量瓶中, 用體積比 30∶70的乙腈-水溶液稀釋至刻度, 搖勻, 配制成含格列美脲質量濃度為 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mg/L及鹽酸二甲雙胍質量濃度為 25.0、50.0、75.0、100.0、125.0、150.0 mg/L的系列標準溶液。按“2.1”條色譜條件測定, 記錄色譜圖。以樣品質量濃度(ρ) 為橫坐標,以峰面積(A) 為縱坐標, 計算格列美脲和鹽酸二甲雙胍的線性回歸方程分別為 A =59.41ρ+ 0.5941(r=0.9993, n=6) 和A = 84.75ρ- 61.23(r=0.9997, n=6)。結果表明, 格列美脲和鹽酸二甲雙胍質量濃度分別在 0.1～0.5 mg/L和 25.0 ～155.0 mg/L內與峰面積呈良好的線性關系［3］。

2. 5回收率試驗 在分別取鹽酸二甲雙胍和格列美脲對照品適量后, 按處方比例加入空白輔料, 按照質量分數分別為80%、100%、120% 及供試品處方量中主藥成分含量配制成供試溶液, 每個質量濃度配制 3 份, 結果均符合測定要求,結果見表 1。

表1 回收率試驗結果(mg, n =9)

3 討論

方制劑。鹽酸二甲雙胍可以降低血糖主要是通過降低肝糖輸出, 同時增加外周胰島素敏感性導致的［4］; 格列美脲則是通過增加體內胰島素水平和敏感性進而降低血糖。兩藥可以聯合應用于單純飲食和鍛煉不能控制血糖的2 型糖尿病患者。

曾選擇甲醇和乙腈作為提取溶劑, 結果發現: 對甲醇、甲酸銨、乙酸銨緩沖液和乙腈進行流動相組成及比例考察時,發現作為流動相, 甲酸銨緩沖液 -乙腈測定得到的格列美脲色譜峰的峰形最好, 同時鹽酸二甲雙胍對格列美脲干擾較小。并且乙腈在流動相中的比例, 會影響格列美脲的出峰時間。當甲酸銨緩沖液 - 乙腈體積比例為 41:63時, 格列美脲在 8 min 出峰, 可以最大限度的分離鹽酸二甲雙胍與格列美脲［5］。用甲醇提取兩組分的色譜峰響應值都較高, 同時在測定格列美脲含量的過程中可以通過調節流動相的組成使鹽酸二甲雙胍不干擾測定。選定適當的色譜條件, 可以將鹽酸二甲雙胍和格列美脲較好地分離并且出現較為滿意的峰形。HPLC方法可以有效、簡便的測定二甲雙胍格列美脲膠囊中格列美脲的含量。

［1］ 劉偉, 嚴潔.地特胰島素聯合格列美脲治療老年 2 型糖尿病療效觀察.現代中西醫結合雜志, 2012, 21(10):1065-1066.

［2］ 王秀榮. 瑞格列奈聯合甘精胰島素治療老年 2 型糖尿病及其安全性分析.南方醫科大學學報, 2010, 30(7):1707-1708.

［3］ 童向前.地特胰島素聯合格列美脲片治療老年 2 型糖尿病的有效性及安全性.中外醫療-藥物與臨床, 2012, 10(26):99-100.

［4］ 曲 穎, 張純利, 胡文娟, 等.西格列汀、羅格列酮分別聯合二甲雙胍治療老年 2 型糖尿病的療效觀察.現代生物醫學進展, 2013, 13(21):4077-4080.

［5］ 劉慶豐, 李中東, 施孝金, 等.二甲雙胍格列本脲片中兩種成分的離子對HPLC法測定.藥學服務與研究 , 2009, 09(01)：44-47.

510000 廣州中醫藥大學第一附屬醫院(譚漢添)；廣州中醫藥大學青蒿研究中心(詹利之)