高效液相色譜法測定連花清瘟膠囊中連翹酯苷A的含量

蘇平菊 陳紅燕 安青松 王娟敏

高效液相色譜法測定連花清瘟膠囊中連翹酯苷A的含量

蘇平菊 陳紅燕 安青松 王娟敏

目的 建立采用高效液相色譜法測定連花清瘟膠囊中連翹酯苷A含量的方法。方法 采用C18 色譜柱 , 乙腈 -0.1% 磷酸溶液為流動相梯度洗脫 , 檢測波長 228 nm。結果 連翹酯苷 A 在 18.6～186 ng 濃度范圍內呈良好的線性關系。連翹酯苷 A 平均回收率為 99.16%(n=6), RSD=1.58%。結論 該法操作簡便準確、專屬性強 , 可作為連花清瘟膠囊的質量控制方法。

高效液相色譜法 ；連花清瘟膠囊醇提浸膏 ；連翹酯苷A ；含量測定

連花清瘟膠囊由金銀花、連翹、石膏等 13 味藥組成［1］。清瘟解毒 , 宣肺泄熱。本品種收載于《中國藥典》(2010 年版第二增補本 ), 連翹酯苷 A 為處方中連翹的主要成分之一 ,因此采用高效液相色譜法對本品連翹酯苷A的含量測定進行了研究［2］。

1 儀器與試藥

1. 1 儀器 高效液相色譜儀 (Waters 2695)。

1. 2 試藥 連翹酯苷 A 對照品 (購自中國藥品生物制品檢定所 ), 乙腈為色譜純 , 其它試驗所用試劑均為分析純。

2 方法與結果

2. 1 色譜條件 色譜柱 ：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料 ；流動相乙腈 -0.1%磷酸梯度洗脫 ；流速 0.4 ml/min；檢測波長 228 nm；理論塔板數按連翹酯苷 A峰計算應不低于 3000。

2. 2 供試品溶液制備 取供試品 (批號 120406), 約 0.5 g, 精密稱定 , 置具塞錐形瓶中 , 精密加入甲醇 25 ml, 密塞 , 稱重 ,超聲外理 30 min, 取出 , 放冷 , 再稱定重量 , 用甲醇補足減失的重量 , 搖勻 , 濾過 , 即得。

2. 3 對 照 品 溶 液 的 制 備 精 密 稱 取 連 翹 酯 苷 A對 照 品23.25 mg, 置 25 ml量瓶中 , 加甲醇溶解 , 并定容至刻度 , 搖勻 ,即得。再精密吸取上述對照品溶液 2 ml, 置 25 ml量瓶中 , 加甲醇稀釋至刻度 , 搖勻 , 即得。濃度 ：74.4 μg/ml。

2. 4 陰性試驗 按處方比例稱取除連翹外的其它方中藥材 ,按制備工藝制得陰性樣品 , 按供試品溶液的方法進行處理 ,得陰性供試品溶液。分別吸取陰性供試品溶液、對照品溶液及供試品溶液 , 按照選定測定條件進行檢測 , 結果表明 ：在連翹酯苷 A相應的保留時間 , 陰性樣品無相應波峰出現。

2. 5 線性范圍考察 精密吸取濃度為 186 μg/ml的對照品溶 液 0.1、0.2、0.4、0.5、0.8、1.0 μl注 入 液 相 色 譜 儀 , 測定峰面積見表1。以峰面積積分值為縱坐標 , 進樣量為橫坐標 , 繪制標準曲線。結果表明 ：連翹酯苷 A濃度在 18.6~186 ng范圍內呈良好線性關系 , 回歸方程為 ：Y=2301.7X-257.33, r=0.9997。見表1。

表1 線性考察結果

2. 6 進樣精密度考察 吸取對照品溶液 , 連續進樣 5次 ,連翹酯苷 A對照品 5次測定的 RSD為 0.25%, 說明儀器性能良好。

2 .7 供試品溶液穩定性考察 精密吸取供試品溶液 , 每隔一定時間進樣 , 考察了 16 h 內的穩定性 , 結果見表2。

表2 穩定性實驗結果

從以上結果可見 , 供試品峰面積 RSD 值 0.39%,表明在測定的 16 h 內 , 供試品穩定。

2. 8 重復性試驗 取同一批供試品 (批號 120406), 按高、中、低劑量取樣 , 每個劑量取 3 份 , 按供試品含量測定項下方法 ,進行提取 , 制備 , 測定結果 , 連翹酯苷 A的平均含量 2.3660 mg/g, RSD 為 0.995%。表明方法重現性良好。

2. 9 回收率試驗 采用加樣回收試驗 , 取同一批供試品 (批號 120406)6 份 , 加入連翹酯苷 A 對照品溶液 , 按供試品含量測定項下方法 , 進行提取 , 制備 , 測定 , 計算回收率。連翹酯苷 A 的平均回收率為 99.16%(n=6), RSD 為 1.56%, 結果見表3。

表3 回收率試驗結果

2. 10 樣品含量測定 按上述方法測定 3 批樣品含量 , 結果

見表4。

表4 樣品含量測定結果

3 討論

本實驗對含量測定中供試品溶液的制備方法進行了研究。

3. 1 提取溶媒選擇實驗結果表明 , 50%甲醇、75%甲醇和甲醇對連翹酯苷 A的提取含量影響不大 , 但 50%甲醇過濾較困難 , 以甲醇為提取溶媒時雜質峰較 75% 甲醇小 , 為更好地保護色譜柱 , 因此選擇甲醇為提取溶媒。

3. 2 超聲提取時間考察實驗結果表明 , 超聲提取 15、30和45 min對連翹酯苷 A的含量影響不大 , 但為保證充分提取 ,選定超聲提取時間為 30 min。

［1］國家藥典委員會 . 中國藥典 (一部 ). 北京 :中國醫藥科技出版社 , 2010:159-160.

［2］國家藥典委員會 . 中國藥典 (第二增補本 ).北京 :中國醫藥科技出版社 , 2013:35-36.

2014-04-14］

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