新疆傳統(tǒng)發(fā)酵駝乳中分離出的一株乳酸菌的分子生物學(xué)鑒定

拉提帕·艾爾肯, 唐 雪, 新華·那比

(1新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室, 烏魯木齊 830011; 2中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與農(nóng)業(yè)區(qū)劃研究所，中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心， 北京 100081)

駝乳作為營養(yǎng)性食品，在世界上許多國家被推崇,它富含大量的諸如溶菌酶、乳鐵蛋白和免疫球蛋白等抗微生物因子，可強化人體的免疫系統(tǒng)。發(fā)酵駝乳中含有較高含量的蛋白質(zhì)、氨基酸、不飽和脂肪酸和微量元素，而且蘊涵著大量的微生物，其中最主要的是益生菌為乳酸菌[1]。駝乳和發(fā)酵駝乳都具有較高的營養(yǎng)和食用價值。新疆傳統(tǒng)發(fā)酵駝乳的原料是新鮮駝乳，是具有濃厚民族特色的、利用新疆傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)制成的一種營養(yǎng)價值較高的保健飲料。民間用于輔助治療胃腸道潰瘍、結(jié)核、糖尿病患者[2]。本實驗采用分子生物學(xué)鑒定方法，利用乳酸菌的遺傳物質(zhì)采用DNA 提取、PCR 擴增、產(chǎn)物測序和數(shù)據(jù)分析對分離出的一株乳酸菌進行系統(tǒng)發(fā)育分析并對其進行分類和鑒定。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

發(fā)酵駝乳10號乳酸菌菌株從新疆阿勒泰哈薩克族牧民發(fā)酵駝乳中分離篩選得到。 細菌DNA提取試劑盒[天根生化科技(北京)有限公司]，PCR 反應(yīng)體系(Fermentas 公司)，引物[英濰捷基(上海)貿(mào)易有限公司]合成。16S rDNA 測序選用通用引物27F (5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)和1492R(5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′)，rpoA引物選擇rpoA-21F(5′-ATGATYGARTTTGAAAAAACC-3′)和rpoA-22R(5′-ACYTTVATCATNTCWGVYTC-3′)，pheS引物選擇pheS-21F(5′-CAYCCNGCHCGYGAYATGC-3′)和pheS-23R(5′-GGRTGTACCATVCCNGCHCC-3′)。革蘭氏染色液(上海科興生物科技有限公司),TPY液體培養(yǎng)基，MRS 液體培養(yǎng)基(杭州百思生物科技有限公司),S021乳酸菌生化鑒定套裝(北京路橋技術(shù)有限責(zé)任公司) 。……