三顆針有效成分鹽酸小檗堿精制工藝的優化

朱蘭寸，李俊平，聶立勇，王林玲，何雪君，廖伊茜，馬廷升

（懷化醫學高等?？茖W校藥學系，湖南 懷化 418000）

三顆針為小檗科植物三棵針 Berberis pruinosa Fr．的干燥根莖，因其莖常生三叉狀針刺而得名，含小檗堿、小檗紅堿、小檗胺、藥根堿等化學成分，具有抗菌、降壓和抗癌等多種生理活性，其主要成分小檗堿具有清熱燥濕、瀉火解毒作用，用于治療細菌性痢疾、胃腸炎、副傷寒、支氣管肺炎等，療效確切[1]。在藥物生產中，原料藥鹽酸小檗堿的純度是關鍵，是藥物制劑的質量保證。目前相關報道多為三棵針有效成分小檗堿提取、分離條件的優化，得到小檗堿粗品[2-4]，但尚未見有關小檗堿粗品精制為鹽酸小檗堿工藝優化的報道。筆者應用 L9（34）正交試驗設計優化三棵針提取的小檗堿粗品精制為鹽酸小檗堿的工藝條件，以提高產品的收率?，F報道如下。

1 儀器與試藥

PHS-25型數字酸度計（上海偉業儀器廠）；UV-754型分光光度計（上海分析儀器公司）；FA1004B型電子分析天平（上海平軒科學儀器有限公司）。三顆針（購自湖南懷化大藥房，經懷化醫學高等專科學校楊宏健教授鑒定為正品三顆針的干燥根）；粗制小檗堿（按酸水提取法自制，經薄層色譜定性符合規定）；鹽酸小檗堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號713-9204）；其他所用試劑均為市售分析純。

2 方法與結果

2．1 制備工藝

將粗制小檗堿（勿需干燥）置燒杯中，加入約50倍純化水，水浴上回流煮沸30 min，迅速抽濾，不溶物可加純化水30～40 mL再煮1次，濾過，合并濾液，加濃鹽酸調pH為1～2，放冷，即可析出鹽酸小檗堿精制品，減壓過濾，并用少量70%乙醇洗滌結晶，于80℃以下干燥，稱重，計算提取率。

2．2 正交試驗設計

采用 L9（34）正交表進行試驗設計，以純化水用量（因素A）、回流時間（因素 B）、溶液 pH（因素 C）、乙醇體積分數（因素 D）作為考察因素，分別設計3個水平，見表1；以鹽酸小檗堿提取率為評價指標，以鹽酸小檗堿含量為參考，正交試驗結果見表2，方差分析結果見表3。由表2可知，影響三顆針鹽酸小檗堿精制提取率的因素順序為C＞B＞D＞A，即主要因素為溶液pH，其次為回流時間、乙醇體積分數、純化水用量。試驗號A2B3C1D2為最佳工藝條件，即純化水用量為50倍樣品、回流時間為30 min、溶液pH為1～2、乙醇體積分數為70%。由方差分析可知，以提取率為考察指標，4個因素中溶液pH對其有顯著影響（P＜0．05），是關鍵因素。故方差分析與直觀分析結果一致。

表1 正交試驗因素水平表

表2 正交設計表及結果

表3 提取率方差分析表

2．3 鹽酸小檗堿含量測定[5-6]

2．3．1 標準曲線制備

精密稱取鹽酸小檗對照品5 mg，置50 mL容量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度。精密量取對照品溶液 1．0，2．0，3．0，4．0，5．0 mL，分別置50 mL容量瓶中，加乙醇定容，搖勻，以乙醇為空白對照，在348 nm波長處測定吸光度。以質量濃度（C）對吸收度（A）進行線性回歸，得回歸方程 A＝0．051 82 C ＋0．008 15，r＝0．999 6(n ＝5)。結果表明，鹽酸小檗堿質量濃度在 2．0 ～10．0 μg／mL 范圍內與吸收度呈良好線性關系。

2．3．2 樣品含量測定

精密稱取鹽酸小檗堿精制品50 mg，置100 mL容量瓶中，加乙醇定容，精密量取1．0 mL，置50 mL容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取1 mL，加入已處理好的中性氧化鋁柱上，照2010年版《中國藥典（二部）》中方法，用35 mL乙醇分次洗脫，至洗脫液無色，加乙醇稀釋至50 mL，搖勻。在348 nm波長處測定吸光度。按回歸方程計算，含量測定結果見表2。結果表明：按精制工藝所得到的鹽酸小檗堿含量相差不大，按試驗號A2B3C1D2最佳工藝條件，鹽酸小檗堿含量為97．6%，符合中國藥典標準規定（≥97．0% ）。

2．4 工藝驗證試驗

稱取一定量粗制小檗堿 5份，每份 2．0 g，按 L9（34）試驗篩選的最佳工藝條件制備鹽酸小檗堿精制品，提取率平均值為75．7% ， RSD 為 2．65% （n＝5），鹽 酸 小 檗 堿 含 量 平 均 值 為97．5% ，RSD 為 1．72%（n＝5）。結果表明，正交試驗篩選的制備工藝條件(A2B3D1D2)是可靠的。

3 討論

三棵針等原料中除主要含小檗堿外，尚含一定量的小檗胺、藥根堿等多種成分，除小檗堿、小檗胺含量多且有一定藥用價值外，其他成分含量均少，因此無分離必要。精制鹽酸小檗堿過程中，煮沸后的溶液應趁熱迅速抽濾，以免溶液冷卻而析出鹽酸小檗堿結晶，造成提取率降低。

小檗堿為黃色針狀晶體，表現為季銨型、醇型、醛型3種互變異構體，其中以季銨堿型最穩定[2]，小檗堿能緩慢溶解于冷水或冷乙醇，在熱水或熱乙醇中溶解度比較大，難溶于丙醇、氯仿或苯。本試驗中采取純化水為溶劑，回流溶解，達到綠色環保目的。

小檗堿可從三顆針、黃連、黃柏等植物中提取，由于黃連生長緩慢、價格較高，黃柏來源也較少，現我國主要應用三顆針作為提取原料。目前鹽酸小檗堿需求量日益增加，近年來對小檗堿提取工藝的研究較多。本試驗主要從鹽酸小檗堿精制環節進行工藝優化，以提高產率、提高效益。

[1]江蘇新醫院．中藥大辭典(上冊)[M]．上海：上?？茖W技術出版社，1977：66．

[2]程詠梅，陳仁華．小檗堿提取工藝的研究[J]．時珍國醫國藥，2007，18（6）：1 445-1 447．

[3]楊宏健，肖美風，袁 麗．正交實驗優選三顆針中小檗堿的提取工藝[J]．中國藥師，2005，8（8）：673-675．

[4]廖志新，董建生．青海產三顆針中鹽酸小檗堿的最佳提取工藝研究[J]．天然產物研究與開發，1998，10（2）：62-65．

[5]汪海霞，李政偉，朱玉章．紫外分光光度法測定鹽酸小檗堿的含量[J]．河南中醫藥學刊，2002，17（5）：22-23．

[6]李 洪．兩種鹽酸小檗堿含量測定方法比較[J]．中國藥業，2005，14（11）：35．