健康體檢者循環單核細胞亞群與性別及年齡的關系

李彭軍，韓慧文，葛 蘭，孫海英，盧芮伊，周 欣，李玉明

論著

健康體檢者循環單核細胞亞群與性別及年齡的關系

李彭軍1，韓慧文1，葛 蘭2，孫海英2，盧芮伊2，周 欣2，李玉明2

目的觀察成年健康人循環單核細胞各亞群細胞的數量和比例，探討成年國人外周血單核細胞各亞群與性別和年齡的關系。方法連續納入2012-05在武警后勤學院附屬醫院健康體檢中心進行常規體檢的175名成年人，采集外周靜脈血后以枸櫞酸鈉抗凝，進行CD14/CD16/CD86三色流式細胞術分析，探討單核細胞各亞群數量和比例的年齡和性別分布特點。結果45人因檢出糖尿病、高血壓病等相關臨床疾病或可疑疾病而未納入統計。130位成年人中，男性與女性健康體檢者比較，外周血經典型單核細胞(CD14++CD16-)計數與比例差異無統計學意義(P=0.091,P=0.701)，中間型單核細胞(CD14++CD16+，P=0.082，P=0.474)、非經典型單核細胞(CD14+CD16++，P=0.085，P=0.756)差異均無統計學意義。CD14++CD16-型、CD14+CD16++型單核細胞計數與比例統計在不同年齡段人群中差異無統計學意義。CD14++CD16+單核細胞計數隨著受試者年齡的增加而增加[青年組單核細胞計數為11(6.5, 13.5),中年組為9.5(7.0, 18.0)，老年組為9(7.0, 17.5),P=0.012], 同時CD14++CD16+型單核細胞比例也有增高趨勢，差異無統計學意義。結論本研究首次證實國人循環單核細胞亞群存在年齡分布的差異，尤其是CD14++CD16+型單核細胞亞群隨年齡增加而增多，對國人單核細胞亞群相關研究具有參考價值。

單核細胞亞群；性別；年齡；健康成年人

單核細胞作為連接固有免疫和獲得性免疫的重要細胞類型，是多種炎性反應性疾病的主要參與者，也是組織內巨噬細胞和樹突狀細胞的重要來源。隨著對單核細胞結構和功能研究的深入，研究人員發現，根據單核細胞形態的差異及細胞表面特異性抗原表達的差異可以將單核細胞進一步分群。目前根據人外周血單核細胞上LPS受體-CD14和FcγⅢ受體-CD16的表達情況可以將單核細胞劃分為3個亞群[1]：經典型單核細胞(CD14++CD16-)、中間型單核細胞(CD14++CD16+)、非經典型單核細胞(CD14+CD16++)。正是由于單核細胞的這種異質性，才使得單核細胞在不同病理生理狀態下表現出不同的功能。大量臨床研究提示單核細胞亞群組成結構的變化常常與疾病的發生和進展高度相關。但目前尚缺乏健康國人單核細胞亞群比例和數量的資料，因此本研究旨在觀察健康體檢者外周血中各單核細胞亞群的數量和比例在性別和年齡上的分布差異，為單核細胞亞群的相關研究提供依據。

1 對象與方法

1.1 對象 連續入選2012-05在武警后勤學院附屬醫院體檢中心體檢的表觀健康人群175位。在比較單核細胞亞群的年齡差異時，將30歲及以下的受試者編入青年組，30歲以上至49歲的受試者編入中年組，50歲及以上的受試者編入老年組。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集與處理 采用課題組建立的方法進行單核細胞亞群流式細胞術分析[2]。健康體檢受試者采取坐位，上臂自然放置采血臺上。使用5 ml一次性無菌注射器采集肘靜脈外周全血2 ml，與抗凝劑混勻。各取6 μl抗CD14-FITC、抗CD16-PE和抗CD86-PE-Cy5與12 μl染色緩沖液混合，加入30 μl抗凝全血混合均勻，避光孵育15 min后，加入600 μl紅細胞裂解液孵育10 min，加入30 μl熒光微球輕微震蕩后立即上機檢測。

1.2.2 儀器和試劑 采用Cytomics FC 500流式細胞儀(Beckman Coulter，USA)。抗CD14-FITC、抗CD16-PE和抗CD86-PE-Cy5均購自美國Biolegend公司。白細胞絕對計數使用的Flow-countTM熒光微球購自美國Beckman Coulter公司。

1.2.3 流式細胞術檢測白細胞與血小板聚集體 使用FSC/SSC(即前向散射光 forward scatter，FSC和側向散射光 side scatter，SSC)二維點圖(dot plot)顯示外周血各型白細胞分布情況，根據粒細胞和淋巴細胞大小以及細胞內顆粒復雜程度分別將兩種細胞圈出。以CD86-PE-Cy5-Log為橫坐標，SSC-Log為縱坐標，建立CD86-PE-Cy5和SSC散點圖。根據圖中細胞表達CD86的不同熒光強度和細胞內顆粒復雜程度將外周血單核細胞劃出。再根據單核細胞上LPS受體-CD14和FcγⅢ受體-CD16的表達將單核細胞分為3個亞群：CD14++CD16-、CD14++CD16+、CD14+CD16++(圖1)。利用熒光微球對各亞群細胞數量進行絕對計數。

圖1 流式細胞儀散點圖闡述單核細胞及單核細胞亞群的設門策略

2 結 果

2.1 一般特征 45位受試者因檢出糖尿病、高血壓病等臨床疾病/可疑疾病而被排除。剩余130位健康受試者平均年齡42.42歲，其中男75位，女55位。男女受試者心率、體重指數(body mass index, BMI)、白細胞(white blood cell, WBC)、單核細胞(monocyte, MON)、血糖(glucose, Glu)和三酰甘油(triglyceride, TG)差異均無統計學意義(表1)。

2.2 性別差異 健康受試者男性與女性相比，外周血單核細胞各亞群，包括經典型、中間型和非經典型，其細胞計數和百分比差異均無統計學意義(P<0.05，表2)。

2.3 單核細胞各亞群計數和比例與年齡的關系 不同年齡組之間比較，各亞群細胞百分比差異均無統計學意義。中老年組與青年組比較，CD14++

CD16+亞群細胞計數差異有統計學意義(P=0.012)，而CD14++CD16-、CD14+CD16++亞群細胞計數在3個年齡組之間差異無統計學意義(表3)。

表1 130位健康受試者基本資料

表2 健康受試者男性、女性外周血單核細胞各亞群計數和百分比情況 ；中位數(四分位數間距)]

表3 健康受試者不同年齡組外周血單核細胞各亞群計數和百分比情況 ；中位數(四分位數間距)]

3 討 論

本研究證實，隨著年齡的增長單核細胞亞群的構成將發生動態性變化，其中，CD14++CD16-與CD14+CD16++單核細胞亞群的變化并不明顯, 但CD14++CD16+單核細胞亞群數量及比例隨著年齡的增加而升高。同時，本結果也顯示單核細胞各亞群數量及比例在健康男性和女性中無統計學差異。

目前，學術界廣泛認同的單核細胞亞群的分群方法是根據單核細胞表面LPS受體CD14和Fcγ-Ⅲ受體CD16的表達情況來劃分的[1]。不同亞群的單核細胞，其生理特性有很大差異。CD14++CD16-單核細胞產生廣泛細胞因子如：粒細胞集落刺激因子，白細胞介素10，趨化因子配體2，白介素6等，并可調節T細胞的生成，從而具有組織修復和免疫調節功能； CD14++CD16+單核細胞可以產生大量的ROS和炎性因子，具有抗原呈遞能力，此外該群細胞因表達Tie-2和血管內皮生長因子而產生促血管生成的作用；CD14+CD16++單核細胞高表達促炎因子，如腫瘤壞死因子α和白細胞介素1β，這些因子使該亞群細胞具有促炎作用[3，4]。單核細胞亞群參與動脈粥樣硬化的發展過程[5，6]，ST段抬高心肌梗死和心力衰竭患者，CD14++CD16+單核細胞亞群明顯升高，尤其是合并腎臟疾病的患者[7-9]。Seidler等[10]研究表明，CD14+CD16+單核細胞亞群數量以及該群細胞對循環單核細胞池的作用隨著年齡的增加而升高。本實驗結果中CD14++CD16+單核細胞亞群數量及比例與年齡均呈正相關，而CD14+CD16++單核細胞亞群數量隨著年齡的增長而降低，可能由于Seidler研究把單核細胞劃分為兩群即CD14++CD16-和CD14+CD16+單核細胞亞群，本研究根據CD16的表達水平把CD16陽性單核細胞進一步劃分為CD14++CD16+和CD14+CD16++單核細胞亞群，結果顯示隨著年齡的增加單核細胞數量主要為CD16弱表達的CD14++CD16+單核細胞亞群。

早期研究發現，單核細胞亞群在男性與女性人群中無明顯差異[10]。最新動物實驗再次證實，外周血單核細胞變化與性別無顯著相關[11]。本研究結果顯示，單核細胞總數及各亞群的細胞數量及比例在健康男性與女性人群中均無明顯差異，與早期研究報道相一致。但Heimbeck等[12]研究報道CD14+CD16++單核細胞亞群在健康女性人群中所占比例較男性低，本實驗中雖然單核細胞總數及各亞群細胞數量無性別差異，但存在一些具有臨界統計學意義的分布特點，如女性單核細胞總數及各亞群細胞數量均低于男性，因此，健康人群中單核細胞各亞群與性別的關系需在更大樣本中得到證實。

隨著對單核細胞亞群功能研究的深入，單核細胞亞群可能對臨床實踐中判斷病情進展及預測預后具有潛在應用價值。因此，本研究揭示的國人成年健康體檢者外周血中各單核細胞亞群的細胞數量和比例的年齡和性別分布特點，對我國健康人群單核細胞亞群的比例和數量正常參考值范圍確定和后續人群有關研究具有借鑒價值。

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(2013-05-13收稿 2013-07-20修回)

(責任編輯 郭 青)

AgeandgenderdistributionofcirculatingmonocytesubsetsinhealthyChineseadults

LI Pengjun1, HAN Huiwen1, GE Lan2, SUN Haiying2, LU Ruiyi2, ZHOU Xin2, and LI Yuming2.
1. Medical Examination Center, 2. Institute of Cardiovascular Disease and Heart Center, Affiliated Hospital, Logistics University of the Chinese People’s Armed Police Forces, Tianjin 300162，China

ObjectiveTo determine the age and gender distribution of circulating monocyte subsets in Chinese healthy adults.MethodsConsecutively enrolled 175 adults who underwent routine medical examination in this hospital in May 2012. Sodium citrate anticoagulated blood was collected from all subjects to examine monocyte subsets by flow cytometry.Results45 patients were ruled out because of potential health issues. The counts and percentages of classic CD14++CD16-monocytes (P=0.091 andP=0.701, respectively), intermediate CD14++CD16+monocytes (P=0.082 andP=0.474, respectively), non-classic CD14+CD16++monocytes (P=0.085 andP=0.756, respectively) had no significant differences between men and women. There was no obvious age-dependent changes in the counts and percentages of classic and non-classic monocytes. The counts of intermediate monocytes increased with age [The counts of cells in the youth groups were 11 (6.5, 13.5); in the middle-aged group was 9.5 (7.0,18.0); in the elderly-aged group was 9(7.0,17.5),P=0.012] and the percentages of intermediate monocytes had borderline statistical difference among different age tertiles.ConclusionsThis study demonstrates the age and gender distributions of monocyte subset in healthy Chinese adults, which may provide a basis for future human monocyte targeted researches.

monocyte subsets; age; gender; healthy adults

國家自然科學基金(81070121)，天津市自然科學基金(09ZCZDSF04200 11JCYBJC12000)

李彭軍，本科學歷，主治醫師，E-mail: pjli.cardiolab@gmail.com

300162天津，武警后勤學院附屬醫院：1.健康體檢中心，2.心臟中心

李玉明，E-mail:cardiolab@gmail.com

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