針對HSV-2 LAT ORF的siRNA在病毒潛伏激活中的作用

孫朝暉，楊慧蘭，危敏，林武榮，冼江

針對HSV-2 LAT ORF的siRNA在病毒潛伏激活中的作用

孫朝暉，楊慧蘭，危敏，林武榮，冼江

目的觀察皰疹病毒2型潛伏相關轉錄子開放閱讀框架(HSV-2 LAT ORF)在病毒潛伏感染激活中的作用。方法體外建立HSV-2潛伏感染及復發的神經細胞模型，對病毒在細胞中的潛伏和激發進行PCR驗證及測序；設計針對LAT ORF的siRNA，激活誘導后轉染SH-SY5Y細胞，檢測轉染前后LAT ORF的表達改變；制備HSV-2基因表達譜芯片，利用芯片分析抑制LAT ORF后病毒基因表達的改變。結果在人神經母細胞瘤細胞株SH-SY5Y上成功建立了HSV-2潛伏感染及激活的細胞模型，LAT、gG基因PCR擴增及電泳結果證實了病毒在細胞中的潛伏及激活；LAT ORF-siRNA轉染細胞24、36、48h后，LAT ORF mRNA的表達水平分別降低了39%、51%和60%。基因芯片分析干擾后病毒基因表達，共有28個基因出現差異表達，其中24個基因下調，4個基因上調。結論LAT ORF在HSV-2潛伏感染激活中發揮了重要作用，為下一步分析LAT在病毒潛伏激活中的調控機制奠定了基礎。

皰疹病毒2型；病毒潛伏期；RNA干擾；寡核苷酸序列分析

皰疹病毒2型(HSV-2)是人類病毒性疾病的常見病原體之一，其潛伏感染及激發是生殖器皰疹易復發、難根治的主要原因。潛伏相關轉錄子(LAT)編碼蛋白在HSV感染的復發中起重要作用，是研究HSV感染復發過程中信號轉導途徑及特異性基因治療的理想靶標。本研究建立穩定的HSV-2潛伏感染及激活細胞模型，并針對HSV-2 LAT 開放閱讀框架(ORF)區設計siRNA進行RNA干擾，觀察HSV-2 LAT ORF表達被抑制后病毒基因組表達的變化，探尋LAT ORF介導病毒潛伏激活的途徑。……