珍珠母超微粉蛋白及寡肽對小鼠鎮(zhèn)靜安眠作用比較

劉 侗,康馨元,任伯穎,張紅印,杜 鶴,杜 航,宋 利,張 輝,孫佳明

(長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春 130117)

珍珠母Margaritiferaconcha為蚌科動物三角帆蚌Hyriopsiscumingii(Lea)、褶紋冠蚌Cristariaplicata(Leach)或珍珠貝科動物馬氏珍珠貝Pteriamartensii(Dunker)的貝殼[1]。珍珠母是臨床上治療失眠的常用中藥,具有平肝潛陽、安神定驚、清肝明目的功效。為了進一步明確鎮(zhèn)靜安眠作用物質(zhì)基礎(chǔ)，本課題組應(yīng)用超濾技術(shù)將珍珠母超微粉總蛋白粗分離為分子量小于1 KDa的寡肽、≤10 KDa多肽、>10 KDa的蛋白，利用PCPA腹腔注射造失眠模型，考察5 min內(nèi)小鼠自主活動的次數(shù)，及其血中ATCH的含量變化，從而比較珍珠母不同分子量蛋白、多肽和寡肽對小鼠鎮(zhèn)靜安眠的作用，并初步研究其作用機制。

1 材料

1.1 藥物和試劑 珍珠母超微粉總蛋白(本課題組自制)；對氯苯丙氨酸(PCPA)，購自Sigma公司。小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒。

1.2 實驗動物 昆明種小鼠，雄性60只，體質(zhì)量18～20 g。長春中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。

1.3 儀器設(shè)備 METTLER TOLEDO電子天平(MAX=210 g，d=0.001 g)SARTORIUS AG；CR20B2型冷凍高速離心機(日本日立)；GVDV300三頻恒溫超聲波清洗器(江蘇昆山超美)；Millipore超濾儀(美國Millipore公司)。

2 實驗方法

2.1 樣品制備 應(yīng)用超濾技術(shù)將珍珠母超微粉總蛋白粗分離為分子量小于1 KDa的寡肽、≤10 KDa的多肽、>10 KDa的蛋白。

2.2 實驗分組 將60只雄性小鼠隨機分6組，每組10只,分別為空白組、模型組、陽性組、寡肽組、多肽組、蛋白組。

2.3 建立模型 PCPA小鼠失眠模型的建立，按小鼠30 mg/100 g 用量腹腔注射PCPA，空白組腹腔注射相同體積的生理鹽水。腹腔注射30 h后，大鼠出現(xiàn)晝夜節(jié)律消失，模型成功[2]。

2.4 給藥劑量 樣品按生藥量218.75 g/kg給藥，A組、B組給同體積生理鹽水，陽性組為安定劑量(按0.04 mg/20 g)，1次/d，連續(xù)給藥7 d。