哈蟆油基原物種DNA分子鑒定研究

高曉晨，劉 冬，白俊武，于江波，趙娜娜，宗 穎，崔麗娜，張 輝*，孫佳明*

(1.長春中醫藥大學，長春 130117;2.吉林敖東延邊藥業股份有限公司，吉林 敦化 133700)

哈蟆油(Ranaeoviductus)為我國常用中藥材，具有補腎益精，養陰潤肺的作用。據《中國藥典》2010年版1部記載其來源為蛙科動物中國林蛙(RanatemporariachensinensisDavid)雌蛙的輸卵管，經采制干燥而得[1]。中國林蛙是中國東北長白山特有的珍稀野生動物。分布于遼寧、吉林、黑龍江、內蒙古、甘肅、河北、山東、山西、陜西、河南、青海、四川等地[2]。黑龍江林蛙，主要分布于黑龍江、吉林、遼寧等省[2]。目前，哈蟆油基原物種的鑒定方法主要為依據理化性狀、顯微特征等傳統鑒別方法[3]。但這些方法主要以形態學為基礎，不僅受到遺傳因素的影響，而且與中國林蛙的生長環境、生長發育階段有密切的關系。在鑒別過程中穩定性較差，影響鑒定結果[4]。可見，傳統的形態學及理化性質鑒定難度大，現需要一種準確有效的方法來鑒定。 DNA條形碼(DNA Barcoding)是利用基因組中一段公認標準短序列來進行物種鑒定的分子診斷新技術[5]，由加拿大動物學家Hebert等[6]首次提出。近年來該技術在物種鑒定方面有廣泛的應用和迅速的發展，并且DNA條形碼技術簡便高效,不受樣品的形態性狀以及研究者的專業水平限制，可有效的鑒定中藥材[7]。本研究對哈蟆油基原物種進行COI序列研究，分析其藥材的物種變異,建立哈蟆油基原物種DNA分子鑒定方法,為其鑒定提供有效的手段。

1 材料與方法

1.1 材料 共收集樣本12份，經長春中醫藥大學張輝教授鑒定為中國林蛙和黑龍江林蛙。……