益氣解毒方對體外培養小鼠肝癌H22細胞生長的抑制作用

王 微,馬立斌,尚云龍,董燕飛,李洪禹,葛學萍,孟令玉,韓澤華,王冰梅*

(1.長春中醫藥大學基礎醫學院生理教研室，長春 130117；2.長春中醫藥大學臨床醫學院，長春 130117；3.長春中醫藥大學藥學院，長春 130117)

本實驗通過制備益氣解毒中藥復方含藥血清，研究其體外抗小鼠肝癌H22細胞生長的作用。

1 實驗材料

小鼠肝癌H-22細胞株,購自吉林省腫瘤研究所。SD大鼠，由吉林大學實驗動物中心提供。益氣解毒方由我校附屬醫院臨床驗方加減而成：黃芪、當歸、丹參、鱉甲、菊花、半枝蓮等，經過水煎醇沉處理，制成濃度1.25 g生藥/mL的藥液備用。化療陽性藥：5-氟尿嘧啶(5-FU)由上海旭東海普藥業有限公司生產。標準胎牛血清(Fetal Serum Bovine，FBS)，Hyclone公司產品；RPMI-1640完全培養基干粉：美國Gibco公司產品；3-(4，5-二甲基噻唑-2)-(2，5)-二苯基四氮唑溴鹽(噻唑藍,MTT):美國Sigma公司產品；二甲基亞砜(Dimethyl Sulfoxide DMSO)：Amresco公司產品；臺盼藍，青霉素，鏈霉素。其他常規化學試劑均為進口或國產分析純產品。二氧化碳培養箱，Heraeus Hera Cell-150型，德國；研究用倒置顯微鏡，OLIMPUS IX-70，日本；全自動酶標儀，Bio-Rad680型，美國；超凈工作臺，蘇州凈化設備廠；低速離心機，上海飛鴿。

2 實驗方法

2.1 細胞培養 小鼠肝癌H22細胞以臺盼藍計數法顯微鏡下計數，加入含10%FBS的RPMI-1640培養液，調整細胞數為5×105/mL接種于培養瓶中。置二氧化碳培養箱內(5%CO2，37 ℃)中靜置培養，待培養液變為橙色時更換培養基，以1 000 r/min速度離心5 min，棄上清，再以RPMI-1640培養液重懸細胞，繼續培養。待細胞生長至數量較多時，離心后，分瓶培養，傳代。

2.2 大鼠含藥血清的制備 取健康大鼠10只，雌雄不限，體質量180～220 g。每天禁食10～12 h后，按“人和動物間按體表面積折算的等效劑量比值表”[1]，人與大鼠的等效劑量比值56.0換算，每日應以1.25 g生藥/mL的濃度按10 mL/kg體質量的劑量灌胃給予中藥提取液益氣解毒方。……