Real-time PCR分析錳對(duì)甘草β-AS基因表達(dá)的影響

馬生軍，王文全，朱金芳，侯俊玲

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院,北京 100102；2.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與藥學(xué)學(xué)院，烏魯木齊 830052；3.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所,北京 100193；4.中藥材規(guī)范化生產(chǎn)教育部工程研究中心,北京 100102)

錳(Mn)是植物生長(zhǎng)發(fā)育必需的微量元素之一，作為多種酶的活化劑和重要的氧化還原劑的研究還較薄弱，在已篩選的數(shù)量有限的編碼酶基因中，部分生物學(xué)功能已得到確認(rèn)[1]。近年來(lái)，利用T-DNA插入突變和酵母菌功能互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)在植物中鑒定了多種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因，這些轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白部分參與錳的跨膜運(yùn)輸[2]。進(jìn)一步分析表明，轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在細(xì)胞水平上參與錳向細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)和向不同細(xì)胞器(葉綠體和線(xiàn)粒體等)的釋放，以及活性離子在內(nèi)膜區(qū)域(液泡、高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等)的屏蔽作用，而在整個(gè)植株水平上參與植物對(duì)錳的吸收、長(zhǎng)距離運(yùn)輸和在地上部的累積過(guò)程[3]。熒光實(shí)時(shí)定量PCR(Real-time quantitative PCR，Real-time PCR)技術(shù)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新的核酸微量技術(shù)，它實(shí)現(xiàn)了RT-PCR反應(yīng)從定性到定量的飛躍。利用Real-time PCR手段分析不同濃度錳處理下甘草β-香樹(shù)脂醇合成酶(β-amyrin synthase,β-AS)基因的表達(dá)豐度，對(duì)于明確該基因的表達(dá)受錳調(diào)控的影響具有重要意義。

甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)是中藥中常用的大宗藥材之一，具有補(bǔ)脾益氣，祛痰止咳，調(diào)和諸藥等功效，其主要次生代謝產(chǎn)物甘草酸是經(jīng)過(guò)多個(gè)生物合成步驟才得以形成的，而每個(gè)步驟均受到酶的調(diào)控[4-5]。β-AS基因是甘草酸生物合成途徑中的重要基因,與甘草酸生物合成具有密切關(guān)系[6]。……