血清免疫固定電泳常見問題的分析

王艷生 姚宏靜 王立成 林筠 黃琪 朱國慶

血清免疫固定電泳常見問題的分析

王艷生 姚宏靜 王立成 林筠 黃琪 朱國慶

免疫固定電泳最長用于M蛋白相關(guān)疾病的鑒定。通過對(duì)日常工作中遇到的血清免疫固定電泳常見問題進(jìn)行了認(rèn)真的分析, 針對(duì)相應(yīng)問題提出了解決辦法, 以便提高血清免疫固定電泳的檢測(cè)水平。

免疫固定電泳；M蛋白；β巰基乙醇

M蛋白是漿細(xì)胞或B淋巴細(xì)胞單克隆惡性增殖分泌的大量結(jié)構(gòu)均一的, 無抗體活性和無免疫活性免疫球蛋白或其肽鏈亞單位, 臨床上稱之為單克隆免疫球蛋白(monoclonal proteins, M蛋白)［1］。免疫固定電泳技術(shù)是結(jié)合區(qū)帶電泳的分離作用和單克隆抗體的特異性及高敏感性來檢測(cè)樣本中的單克隆免疫球蛋白［2］。此技術(shù)在惡性單克隆免疫球蛋白血癥的診斷、分型、療效隨訪和意義未名單克隆免疫球蛋白血癥轉(zhuǎn)化的病程監(jiān)測(cè)都有重要意義。

1 血清免疫固定電泳常見問題

①抗原抗體比例不合適 免疫增殖性疾病中會(huì)出現(xiàn)某種或幾種免疫球蛋白異常增高, 高濃的球蛋白使血清免疫固定電泳某個(gè)球蛋白區(qū)出現(xiàn)有著色較深的濃密條帶或出現(xiàn)邊緣著色而中心區(qū)域蛋白不著色的“口型”。著色較深的濃密條帶的出現(xiàn)會(huì)使判讀很困難, 是否有單克隆條帶隱匿在其中不容易判讀；還是此樣本為一個(gè)多克隆免疫球蛋白病無法區(qū)分。“口型”容易出現(xiàn)假陰性的結(jié)果。② IgM型聚合度高, 非特異性沉淀影響判讀, 在β或γ區(qū)可見致密而均質(zhì)條帶。第一種情況凝膠的點(diǎn)樣處和整個(gè)泳道出現(xiàn)沉淀。另一種情況是出現(xiàn)兩條單克隆帶。③IgA型譜帶寬而彌散, IgA型較其他類型的單克隆比較譜帶寬而彌散不易判讀。④血清免疫固定只有重鏈單克隆成分, 初診時(shí)血清免疫固定只有重鏈單克隆成分勿輕易診斷為重鏈病。⑤血清免疫固定只有輕鏈單克隆成分。⑥血清免疫固定電泳陰性的漿細(xì)胞病, 臨床上典型的漿細(xì)胞病特征及病理損傷, 但血清免疫固定電泳為陰性。⑦血清免疫固定的血清蛋白電泳條帶假的狹區(qū)帶易與M蛋白混淆。以上討論了對(duì)血清免疫固定電泳技術(shù)在日常工作中常見問題, 現(xiàn)就其問題逐一分析和解決。

2 分析與討論

①高濃度的球蛋白需要考慮提高抗體濃度或降低抗原的濃度, 一般采用生理鹽水降低抗原濃度的方法［3］。掌握正確的適合自己實(shí)驗(yàn)室試劑盒的稀釋比例, 最好先進(jìn)行免疫球蛋白及輕鏈的定量。因免疫固定電泳的檢測(cè)靈敏度可達(dá)0.25 g/L,恰當(dāng)?shù)南♂尡壤谀z片上會(huì)呈現(xiàn)清晰且濃而狹窄界限明顯的沉淀線即單克隆免疫球蛋白。②由于大量IgM多以19 S五聚體形式存在, 造成凝膠的點(diǎn)樣處和整個(gè)泳道出現(xiàn)沉淀的情況。19 S五聚體伴隨7 S單體亞單位會(huì)造成兩條單克隆帶［4］。這兩種情況經(jīng)β巰基乙醇處理會(huì)使大分子聚合蛋白解聚和適當(dāng)?shù)南♂屇艿玫嚼硐氲膯慰寺l帶。β巰基乙醇使用濃度為100 μl標(biāo)本中加入10 μl10%的β巰基乙醇。另需注意β巰基乙醇毒性分級(jí)為高毒且具有特殊臭味, 高濃度吸入本品有致人死亡危險(xiǎn), 有條件的話可在通風(fēng)櫥中戴手套操作。③由于IgA分子的多態(tài)性形成的二聚體和三聚體導(dǎo)致蛋白質(zhì)的不同遷移率［5］。使IgA型單克隆免疫球蛋白病呈現(xiàn)多條帶的現(xiàn)象。在不能清晰判讀的情況下可以用經(jīng)β巰基乙醇處理使大分子聚合蛋白解聚和適當(dāng)?shù)南♂尩慕饩鄯椒?。④有些M蛋白的四級(jí)結(jié)構(gòu)會(huì)阻礙輕鏈抗原決定簇與其相應(yīng)的輕鏈抗血清的結(jié)合, 此時(shí)可經(jīng)β巰基乙醇處理使大分子聚合蛋白解聚和適當(dāng)?shù)南♂尩慕饩鄯椒? 再做實(shí)驗(yàn)?zāi)艿玫秸_的結(jié)果。⑤若與三種重鏈α, γ, μ不發(fā)生反應(yīng)而與κ或λ輕鏈反應(yīng),則需進(jìn)一步作游離輕鏈的補(bǔ)充檢測(cè)。若呈陰性結(jié)果, 則需再做抗IgD和抗IgE檢測(cè)。⑥第一種為不分泌型多發(fā)性骨髓瘤；第二種為輕鏈型多發(fā)性骨髓瘤, 由于輕鏈的分子量較小易迅速自腎排除故有時(shí)血清中反而呈現(xiàn)陰性。這種情況可用本-周蛋白的檢測(cè)或尿固定電泳來檢測(cè)輕鏈的單克隆成分的有無。⑦溶血標(biāo)本在β位會(huì)形成血紅蛋白區(qū)帶；陳舊血清在近原位由于IgG的聚合形成的窄區(qū)帶；血漿標(biāo)本在r位會(huì)形成纖維蛋白原帶［6］。以上3種情況可通過樣本的質(zhì)量前控制,用新鮮血清標(biāo)本可以避免此類情況的發(fā)生。

［1］ 侯建.M蛋白的鑒定及結(jié)果分析.中華血液學(xué)雜志, 2002, 23 (10):559-560.

［2］ 陳世倫, 于力, 邱錄貴.多發(fā)性骨髓瘤診療常規(guī).北京:人民衛(wèi)生出版社, 2012:29-34.

［3］ 從玉隆.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué).北京:人民衛(wèi)生出版社, 2009:684-689.

［4］ 朱鑒清.電泳技術(shù)臨床應(yīng)用.遼寧:遼寧科學(xué)技術(shù)出版社, 2006:82-91.

［5］ 張亨.巰基乙醇的性質(zhì)、生產(chǎn)及應(yīng)用.杭州化工, 2003, 33(3): 22.

［6］ 朱國慶, 姚宏靜.免疫固定電泳技術(shù)的應(yīng)用體會(huì).實(shí)用醫(yī)技雜志, 2007, 14(35):4858-4859.

2014-04-28］

300020 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液病醫(yī)院檢測(cè)中心