細胞免疫在三陰性乳腺癌治療中的臨床研究

王 征，翟曉建，葉新平，李 琰，郭 滿，李偉漢，張 浩

（1.河南省南陽市中心醫院乳腺外科 473000；2.廣西醫科大學第一附屬醫院普外科，南寧 530000；3.南陽醫學高等專科學校普外科，河南南陽 473061）

三陰性乳腺癌（triple－negative breast cancer，TNBC）發病較低，占乳腺癌患者總數的12%～17%［1］。但其有惡性程度高、預后差等特點［2－4］，治療以細胞毒性藥物化療為輔助治療，但效果不佳。由于受體缺乏，內分泌治療及針對人類表皮生長因子受體2（HER－2）過表達的靶向治療也無效［5］。所以大家都在嘗試新的治療方法。細胞因子激活殺菌細胞（CIK）細胞療法成為抗腫瘤過繼性細胞免疫治療的首選方案。本研究嘗試應用CIK聯合化療治療TNBC，評估以CIK為基礎免疫治療TNBC的有效性和安全性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究選取2007年1月至2013年1月就診于南陽市中心醫院乳腺外科、廣西醫科大學第一附屬醫院普外科、南陽醫學高等專科學校普外科住院的TNBC患者420例，分成兩組，分別為CIK免疫細胞治療加TA方案化療的CIK聯合化療組和單純TA方案化療的對照組，詳細了解入組患者病史，進行全面的體格檢查并行卡氏功能狀態評分（KPs），KPs評分標準：KPs≥60分；預計生存期大于6個月。排除心、肝、腎功能不全；并發其他惡性腫瘤；有精神或心理疾病不能配合治療及療效評估者。入組患者治療前簽署知情同意書。兩組患者年齡、腫瘤分期、淋巴結轉移情況之間無明顯差異。

1.2 方法 CIK細胞制備及回輸，先用Ficoll－泛影酸鈉（Ficoll－Hypaque）密度梯離心將患者外周血的單核細胞分離，重懸于10%胎牛血清（FBS）的RPMI 1640培養液中，以2×106mL－1鋪滿培養瓶后，按1000U／mL濃度加入γ－干擾素，在37℃、5%CO2培養箱中孵育；第2天加CD3單抗和IL－2繼續培養；培養10～14d后收集CIK細胞。經檢驗合格后，制成100 mL CIK細胞懸液，靜脈回輸患者。CIK細胞回輸前2d進行細菌學檢測，回輸前1h進行細菌內毒素檢測；對輸入的CIK細胞用流式細胞儀（美國BD公司的FACS CaIiur）對CD3、CD4、CD8、NKT等標記細胞進行測定和分析。

1.3 統計學處理 采用SPSS17.0軟件進行數據分析，兩兩比較采用t檢驗，率的比較采用χ2檢驗，生存時間比較應用Log－rank檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 安全性評價結果 按照WHO標準評估每次治療周期中對兩組患者化療的不良反應強度，回輸后臨床觀測到無明顯的不良反應。兩組均有白細胞、血小板減少，肝功能損害，胃腸道反應、發熱等常見不良反應，在治療過程中未完成CIK治療2例，化療后不能耐受反應退出4例，但均無死亡事件發生，在輸注CIK細胞過程中有2例出現發熱反應，但未超過38.5℃，觀察后退熱。兩組的不良反應接近，見表1。

2.2 細胞免疫功能 分析兩組治療前后T細胞免疫功能檢測結果，CIK治療后CD3＋、CD8＋、NKT細胞比例升高，與對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 化療聯合CIK組和單純化療組患者外周血T細胞亞群的變化（）

表2 化療聯合CIK組和單純化療組患者外周血T細胞亞群的變化（）

＊：P＜0.05，與同組治療前比較；Δ：P＜0.05，與對照組治療后比較。

NKT CIK組別 CD3＋ CD4＋ CD8＋聯合治療組治療前 62.25±12.28 35.38±9.13 28.21±7.45 5.51±4.18治療后 81.14±13.38＊ 34.21±10.18 36.44±12.53Δ＊ 17.14±3.44Δ＊對照組治療前 71.43±13.42 35.71±11.62 30.82±6.51 4.63±5.27治療后 68.19±11.17 31.81±10.25 28.13±10.63 2.17±3.23

2.3 生存質量評價 兩組患者應用歐洲癌癥研究與治療組織生存質量核心量表（TORTC）評估治療后的生存質量。兩組患者軀體功能、角色功能、認知功能、情緒功能、社會功能、整體生活質量比較，研究組比對照組評分高，差異有統計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 兩組患者EORTC QLQ－C30各項評分比較（）

表3 兩組患者EORTC QLQ－C30各項評分比較（）

項目 研究組 對照組P軀體功能 80.0±6.7 65.0±7.2 ＜0.05角色功能 67.0±8.2 50.6±7.0 ＜0.05認知功能 81.5±4.5 67.1±10.1 ＜0.01情緒功能 63.4±8.7 54.1±6.2 ＜0.05社會功能 65.4±9.4 50.3±8.7 ＜0.05整體生活質量 60.2±8.1 46.7±7.2 ＜0.01

圖1 兩組間生存曲線的比較

2.4 化療加CIK組與單純化療組患者治療后的生存時間評價 通過電話隨訪、門診復診及書信隨訪等形式，隨訪6～48個月，其中，失訪13例，在治療過程中未完成CIK治療2例，化療后不能耐受反應退出4例。應用Log－rank檢驗比較兩組生存時間，得出χ2＝5.982，P＝0.021，提示化療聯合CIK治療提高患者的生存時間，見圖1。

3 討 論

乳腺癌的發生、發展中存在免疫逃避、免疫抑制的機制。CIK是過繼性免疫治療中的一種常見的、有效的手段。安全性高，在心包內灌注也有較高的安全性［6］。在本研究中發現CIK聯合化療與單純化療的不良反應相近，僅在單純輸注CIK免疫細胞過程中出現中度發熱，但無惡性不良反應發生。CIK細胞在外周血中的含量極少（約為1%～5%），只有擴增后才能應用于臨床腫瘤的治療。臨床中使用的CIK細胞是通過將采集的患者外周血單個核細胞在體外與抗CD3微粒體抗體（McAb）、IL－2及干擾素－γ（IFN－γ）等細胞因子共同培養，然后獲得一種異質細胞群。該細胞群兼具T淋巴細胞強大的抗瘤活性及NK細胞的非主要組織相容性復合體限制性殺傷腫瘤細胞的特點［7］。CIK細胞對不同腫瘤細胞株有很強的殺傷作用［8］。CIK細胞與淋巴因子激活的殺傷細胞（lymphokine activated killer cells，LAK）［9］、腫瘤浸潤淋巴細胞（tumor infiltration lymphocyte，TIL）和 CD3單抗激活的殺傷細胞（anti－CD3 antibody induced activated killer，CD3AK）等過繼性免疫治療手段相比，具有細胞擴增快、殺瘤活性強、殺瘤譜廣泛、對多重耐藥腫瘤細胞療效佳、不良反應小等優勢，已成為過繼性細胞免疫抗腫瘤治療的首選方案。CIK細胞治療能夠降低腫瘤患者外周血TRAG比例，提高CD3＋、CD4＋細胞比例及CD4＋／CD8＋細胞比值，從而減輕或消除腫瘤患者的免疫抑制狀態［10］。本研究中檢測T治療后細胞亞群相對計數發現，CIK聯合化療治療后患者CD3＋、CD8＋、NKT細胞百分比較治療前明顯提高，與單純化療組相比，CD3＋、CD8＋、NKT細胞百分比也升高，單純化療組患者T細胞亞群比例降低，說明患者接受CIK治療后免疫細胞增加，免疫功能增強，減輕了化療引起的免疫抑制作用，說明CIK治療有助患者T細胞功能的恢復，達到抗腫瘤目的。在生存質量評價中，EORTC QLQ－C30各項評分均有提高，提示腫瘤患者整體生活質量改善。生存時間上，本研究中患者的生存時間與對照組比較差異有統計學意義，生存時間高于對照組，說明在預后方面有較好的效果。總之，CIK細胞免疫治療作為輔助治療有較好的有效性及安全性，為TNBC的治療提供了一種新的選擇。

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