HPLC法測(cè)定三白灌腸液中升麻素苷及5-O-甲基維斯阿米醇苷含量

李慶杰，王蓮萍 ，李國(guó)峰

1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林長(zhǎng)春 130021；2.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，吉林長(zhǎng)春 130118

“三白灌腸液”是該院肛腸科開(kāi)發(fā)的用于治療腸炎的院內(nèi)制劑，臨床應(yīng)用多年，療效顯著，為進(jìn)一步造福廣大病患，該院決定對(duì)該院內(nèi)制劑進(jìn)行新藥臨床前研究，在新藥研制過(guò)程中，我們對(duì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行建立，制定了防風(fēng)中升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷含量測(cè)定方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津20AT型液相（日本島津），超聲波清洗機(jī)（昆山市超聲波儀器有限公司）。

1.2 試藥

乙腈為色譜純（美國(guó)Fisher公司），升麻素苷對(duì)照品（111522-201209）、5-O-甲 基 維 斯 阿 米 醇 苷 對(duì) 照 品（111523-201208），均購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所。三白灌腸液由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)研究中心提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 升麻苷與5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量測(cè)定[1-10]

2.1.1 色譜條件 迪馬C18色譜柱，規(guī)格4.6×250 mm；波長(zhǎng)270 nm；流動(dòng)相：乙腈 -0.1%磷酸溶液（22:78)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為 254 nm；流速：1 mL/min；柱溫：室溫。

表1 回收率試驗(yàn)

2.1 .2溶液的制備

2.1.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精稱升麻苷與5-O-甲基維斯阿米醇苷，用甲醇制成每1 mL分別含升麻苷15μg，含5-O-甲基維斯阿米醇苷30μg的溶液。

2.1.2.2 供試品溶液的制備 精密吸取2 mL本品到10 mL量瓶，甲醇定溶，搖勻，濾過(guò)后作為供試品溶液。

2.1.2.3 陰性樣品溶液的制備 依據(jù)已確定的制劑成型工藝操作，得到防風(fēng)陰性樣，并取防風(fēng)陰性樣，按供試品溶液制備方法制備得到防風(fēng)陰性樣品溶液。

2.1.3 專屬性實(shí)驗(yàn) 取上述樣品各10μL分別進(jìn)行分析，結(jié)果陰性無(wú)干擾，表明分離條件良好。見(jiàn)圖1、2、3。

圖1 對(duì)照品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

圖3 陰性對(duì)照色譜圖

2.1.4 線性關(guān)系的考察 精密吸取供試品混合液3μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL、25 μL，分別注入液相色譜儀，以峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，升麻素苷回歸方程為y=2000000x-25526，r=0.999；5-O-甲基維斯阿米醇苷回歸方程為y=3000000x-53934，r=0.999。 結(jié)果表明升麻素苷在 0.045～0.375μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，5-O-甲基維斯阿米醇苷在0.09～0.75μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

取對(duì)照品液 3 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL、25 μL，進(jìn)樣分析，記錄峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，升麻素苷回歸方程為y=2000000x-25526，r=0.999；5-O-甲基維斯阿米醇苷回歸方程為 y=3000000x-53934，r=0.999。升麻素苷在0.045～0.375 μg、5-O-甲基維斯阿米醇苷在 0.09～0.75 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.5 精密度試驗(yàn) 取制得供試品溶液，連續(xù)進(jìn)行6次，用峰面積計(jì)算，升麻素苷RSD為0.67%，5-O-甲基維斯阿米醇苷RSD為0.88%，表明該方法具有良好的精密度。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取制得供試品溶液，分別在第0、2、4、8、12、24 h 進(jìn)樣分析，用峰面積計(jì)算，升麻素苷 RSD為2.23%，5-O-甲基維斯阿米醇苷RSD為2.27%，供試品溶液在24 h內(nèi)較穩(wěn)定。

2.1.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取一批樣品，平行制備6份樣品溶液，進(jìn)樣分析測(cè)定，分別以升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷含量計(jì)算，RSD分別為1.63%和1.68%，表明該方法具有良好的重現(xiàn)性。

2.1.8 回收率試驗(yàn) 精密吸取本品6份，每份1 mL(其中升麻素苷與5-O-甲基維斯阿米醇苷含量按6次測(cè)定平均值計(jì)算，分別為 0.0741 mg/mL和0.114 mg/mL），置10 mL容量瓶中，精密加入濃度為0.15 mg/mL的升麻素苷0.5 mL，濃度為0.3 mg/mL的5-O-甲基維斯阿米醇苷0.5 mL，按2.1、2.2項(xiàng)下方法操作，得供試品溶液，測(cè)定，經(jīng)計(jì)算，升麻素苷回收率為99.87%，RSD為1.38%；5-O-甲基維斯阿米醇苷回收率為99.01%，RSD為0.96%，回收率良好。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 樣品含量測(cè)定

取3批中試樣品，按2.1、2.2項(xiàng)下方法操作,測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定(mg/mL)

3 討論

在建立升麻素苷及5-O-甲基維斯阿米醇苷含量測(cè)定時(shí)，起初我們采用藥典方法，但樣品分離條件不夠理想，陰性有干擾，將色譜條件優(yōu)化至現(xiàn)有條件后，達(dá)到滿意的分離效果。

[1]中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社.2015：149.

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