EB病毒感染與兒童原發性腎病綜合征關系的研究

李素娥 唐駿 吳樂天

EB病毒屬皰疹病毒群的一種雙鏈DNA病毒,它可引起多種器官的損害，腎損害是其中一種常見的類型，過去有很多研究表明，EB病毒可以引起腎小球腎炎、腎損害等[1-2]。但筆者發現EB病毒感染與兒童原發性腎病綜合征(PNS)關系的研究報告并不多見，故探討了兩者的關系，現報告如下。

對象與方法

一、研究對象

2010年1月至2014年1月在本院兒科住院的66例PNS患兒為研究對象，全部病例均符合第6版人民衛生出版社出版的《兒科學》中PNS的診斷標準，均為首次發病的未經治療初診者，并排除近親三代內曾患有類似疾病的病例。66例中男49例、女17例，年齡11個月～13歲9個月、中位年齡6歲4個月,病程2周～2年7個月、中位病程1個月1周，按PNS類型再將66例PNS患兒分為單純型及腎炎型進行分析，66例均無呼吸、消化或心血管系統感染性疾病。由于醫學倫理及知情同意原因，本研究選取了同期住院的68例非腎臟病患兒作為對照組，其中男45例、女23例，年齡8個月～12歲5個月、中位年齡6歲2個月，急性上呼吸道感染29例、肺炎21例、腹瀉病18例，68例既往均無腎臟疾病史及其他重要臟器疾病史。兩組在年齡、性別方面比較差異無統計學意義。本研究經醫院論理委員會批準，兩組患兒家長均知情同意。

二、方 法

1.標本收集

血液標本的收集及檢驗：采用腎上腺皮質激素(激素)治療前，用抗凝采血管收集PNS組和對照組外周靜脈血5 ml，取1 ml稀釋并加入淋巴細胞分離液，收集中間單個核細胞層，加入DNA提取液提取細胞DNA，其余血液行抗EB病毒殼抗原抗體VCA-IgM、VCA-IgG以及異形淋巴細胞檢測。

腎組織標本的收集及檢驗：激素治療前，對PNS患兒行腎活組織病理學檢查(活檢)，對照組因考慮醫學倫理原因未行腎活檢，用磷酸鹽緩沖液(PBS)漂洗腎組織3次，用10%福爾馬林固定，石蠟包埋,從石蠟包埋組織塊切取約5～7 μm的薄片,用二甲苯脫蠟, 無水乙醇漂洗,晾干沉淀，加入組織裂解液50 μl和蛋白酶K 2 μl，置55℃30 min，100℃煮沸10 min，14 000 r/min離心l0 min，取上清液作PCR反應模板[3]。

2.反轉錄PCR檢測EBVDNA的表達

使用日本Takara公司設計并合成的引物，上游引物：5’-GTTCGCGTTGCTAGGCCACC-3’;下游引物：5’-AGGACCACTTATACCAGGG-3’，長度為109 bp。并根據反應試劑盒說明書對血液細胞提取液及腎組織提取的上清液建立PCR反應體系，反應條件為94℃、5 min，94℃、50 s,55℃、50 s，72℃、45 s，33個循環。用1%瓊脂糖電泳鑒定目的條帶。

三、統計學處理

采用SPSS 18軟件處理數據,率的比較采用χ2檢驗，以P<0.05為比較差異有統計學意義。

結 果

一、PNS組與對照組各項指標檢測結果比較

PNS組提示近期感染的血VCA-IgM及提示既往感染的VCA-IgG的陽性率均高于對照組(P均<0.05)，見表1。

表1 PNS組與對照組各項指標檢測結果比較 例(%)

二、單純型與腎炎型PNS各項指標檢測結果比較

按PNS類型將PNS患兒分為單純型及腎炎型進行分析，腎炎型PNS患兒中VCA-IgM及VCA-IgG陽性率較單純型更高，而且其血液及腎臟表達EBV DNA的陽性率也較單純型高(P均<0.05)，見表2。兩種類型PNS及對照組血和(或)腎EBV DNA反轉錄PCR檢測結果見圖1。

圖1 單純型與腎炎型PNS以及對照組血和(或)腎EBV DNA反轉錄PCR檢測結果

表2 單純型與腎炎型PNS各項指標檢測結果比較 例(%)

討 論

EB病毒屬于γ皰疹病毒家族，為線性雙鏈DNA病毒，是一種非常常見的感染病毒，人群中感染率高達90%，學齡兒童感染后可無癥狀或出現發熱、咽峽炎、肝脾及淋巴結腫大、外周血淋巴細胞增加并出現異型淋巴細胞等[4-5]。EB病毒可引起多種疾病，累及全身各個器官和系統病變[6]。EB病毒在感染機體時，機體通過自身免疫抑制EB病毒的增值，從而抑制其致病性，但其具有嗜B淋巴細胞性，可終生潛伏在機體的B淋巴細胞中，使其不能完全被機體清除，達到免疫逃逸的目的，當在某些致病因素作用下或在適當的條件下，其可大量增值并引發相關疾病。在一些免疫系統疾病如SLE、原發性干燥綜合征等的研究中發現，EB病毒感染可引起免疫系統功能的紊亂。

本研究顯示EB病毒與單純性及腎炎性PNS均有關聯(為了盡量避免對照組出現假陽性，本研究除了檢測VCA-IgM、VCA-IgG，也檢測了血EBV DNA及異形淋巴細胞)。單純性PNS發病機制尚未明確，其腎組織中雖然未見有免疫球蛋白和補體沉積，但出現T細胞功能的紊亂，因此可能與細胞免疫功能有關。EB病毒在侵犯B淋巴細胞后,使B淋巴細胞發生抗原性改變,并進一步引起T淋巴細胞的防御性反應,形成細胞毒效應，導致受感染機體細胞的溶解和死亡[7]。因此我們認為，EB病毒可能通過擾亂細胞免疫功能引起單純性PNS。通過免疫熒光檢查可發現腎炎型PNS患者腎小球基底膜有IgG和C3沉積，提示該病與免疫復合物損害有關。Joh(1998年)與Andersson(2000年)等對間質性腎炎的病理切片進行研究發現，腎小球上可見有免疫復合物介導的損傷。因此，我們考慮EB病毒引起的免疫復合物可造成腎小球基底膜的損害，從而引起腎炎性PNS。

EB病毒是一種常見的感染性病毒，人群中感染率不低，本文通過相關的臨床資料以及實驗方法，發現EB病毒與兒童PNS可能存在一定關聯，因此在臨床上，對PNS的患兒還應注意行EBV的相關檢查及抗病毒治療。

[1] 閆秀娟.傳染性單核細胞增多癥不同臨床表現30例臨床分析.中國實用醫藥,2012，7:106-107.

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[6] 陳紅英，劉春艷，鄒艷，等.小兒傳染性單核細胞增多癥218例臨床特點分析.中國小兒血液與腫瘤雜志,2013,18:81-83.

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