不同時期慢性HBV感染者血清IFN-λs水平的變化

杜以真 王曉花 張孝國 張縱 闞曉 徐皖蘇

HBV屬于嗜肝病毒家族，其全球感染超過3.5億人，HBV慢性感染是肝硬化及肝細胞癌(肝癌)的主要原因[1]。HBV在肝細胞中復制，但并不引起細胞病變，肝臟損害是免疫介導所致。IFN-α/-β和(或) IFN-γ誘導的細胞內抗病毒反應在HBV感染的發病機制中起關鍵作用，并且IFN-λs在宿主對HBV免疫反應中的作用也逐漸被揭示。IFN-λs是最近被鑒定的一個IFN新家族——Ⅲ型IFN，包括IFN-λ1、2、3(即 IL-29、IL-28A和IL-28B)。目前關于慢性HBV感染患者血清IFN-λs水平的研究較少。為了解IFN-λs與慢性HBV感染轉歸的相互關系，我們對不同時期慢性HBV感染者，包括HBV攜帶者、慢性乙型病毒性肝炎(慢乙肝)患者、乙肝肝硬化患者和肝癌患者血清中IFN-λs水平進行了檢測。

對象與方法

一、研究對象

2010年7月至10月在我院就診的120例慢性HBV感染者，HBsAg均陽性，其中HBV攜帶者、慢乙肝患者、乙肝肝硬化患者、HBV相關肝癌患者各30例，診斷均符合2000年(西安)中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學會聯合修訂的《病毒性肝炎的診斷標準》。HBV攜帶組男20例，女10例，年齡(21.3±14.6歲)。慢乙肝組患者中，男21例，女9例，年齡(31.3 ± 14.6)歲，輕度8例，中度19例，重度3例，HBeAg均陽性。乙肝肝硬化組男22例，女8例，年齡(52.6 ± 14.1)歲，肝功能Child-Pugh B級17例，C 級13例，HBeAg陽性21例，陰性9例。HBV相關肝癌組男24例，女6例，年齡(56.5 ± 7.2歲)，HBeAg陽性8例，陰性22例。同時選取20名進行健康體檢的健康人作為健康對照組，其中男14例，女6例，年齡(34.0±13.5歲)，HBsAg、HBeAg均陰性。所有入組者均排除丙型病毒性肝炎病毒和HIV感染，酒精性肝病，自身免疫性肝病，藥物肝損害。慢性HBV感染患者和健康人肝功能、血清HBV DNA的水平見表1。

表1 慢性HBV感染患者和健康人肝功能、血清HBV DNA的水平

二、方 法

清晨采集入組者空腹肘靜脈血3 ml，于當日分離血清，-70℃凍存待檢。采用雙抗體夾心ELISA法進行檢測，分別使用美國ADL公司生產的鼠抗人IL-29、鼠抗人IL-28A、鼠抗人IL-28B ELISA試劑盒。在這個測定中，標準品與待檢測的相關樣本和生物素化的干擾素- λs在已包被的干擾素- λs獨特表位特異性的微孔中共同孵育。孵育后，洗滌在孔內加入辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素。洗滌后，在孔內加入TMB基質液，顏色的變化與結合的干擾素- λs水平成比例，終止液將從藍色變為黃色，顯色的強度可被450 nm的波長測定。測定的吸光強度與干擾素- λs水平成正比。將每組IFN- λs標準品吸光強度與相對水平吸光度繪制成標準曲線，通過標準曲線，計算待測樣本的IFN- λs水平。

三、統計學處理

結 果

一、慢性HBV感染患者和健康人血清IFN-λ1(IL- 29)水平比較

慢乙肝、乙肝肝硬化、肝癌患者的血清IFN-λ1(IL-29)水平均明顯低于健康對照組(P均<0.01)；慢乙肝、乙肝肝硬化、HBV相關肝癌患者血清IFN-λ1(IL-29)水平明顯低于HBV攜帶者(P均<0.01)；HBV攜帶者血清IL-29水平與健康對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)，慢乙肝、乙肝肝硬化患者與HBV相關肝癌患者比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

二、慢性HBV感染患者和健康人血清IFN-λ2(IL-28A)水平比較

5組研究對象血清IFN-λ2(IL-28A)水平比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表3。

表2 慢性HBV感染患者和健康人血清IFN-λ1(IL- 29)水平比較

表3 慢性HBV感染患者和健康人血清IFN-λ2(IL-28A)水平比較

三、慢性HBV感染患者和健康人血清IFN-λ3(IL-28B)水平比較

HBV相關肝癌患者血清IFN-λ3(IL-28B)水平高于健康人、HBV攜帶者、慢性乙肝患者、肝硬化患者(P均<0.01)；HBV攜帶者、慢乙肝、乙肝肝硬化和健康對照組間血清IL-28B水平比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表4。

討 論

HBV感染仍然是重要的全球公共健康問題，目前，全世界超過3.5億人感染HBV，持續的慢性感染有發展為肝硬化、肝癌的危險[1]。抗病毒是治療慢性HBV感染的關鍵，IFN-α和核苷(酸)類藥物是治療慢乙肝的推薦藥物[2]。有研究認為，使用IFN -α治療可降低慢乙肝患者HBV相關肝癌的發生率[3]。雖然IFN -α已被用于臨床治療慢性HBV感染，但僅對約40%的患者有效，而且IFN-α是多向性的細胞因子，其感受器分布廣泛，不良反應較多，不適用于乙肝肝硬化及肝癌患者[4]。隨著核苷(酸)類似物在慢乙肝抗病毒治療中的不斷推廣，核苷(酸)類似物治療相關的耐藥變異也日益增加。因此，迫切需要尋找一種療效更好、不良反應較少的治療方法。

表4 慢性HBV感染患者和健康人血清IFN-λ3(IL-28B)水平比較

IFN-λs具有體外抗HCV和HBV的抗病毒特性。IFN-λs抑制HBV的分子機制與IFN-α/-β和IFN-γ都是通過阻止包裹HBV RNA的衣殼在細胞質中組裝，抑制HBV復制[5]。除了抗病毒性之外，IFN-λs還具有抗細胞增殖和抑制體內腫瘤增生活性。與Ⅰ型IFN類似，IFN-λs的抗腫瘤機制包括：①通過抑制內皮細胞活性來抑制腫瘤血管生成；②通過增強T細胞、NK細胞、樹突狀細胞以及巨噬細胞的免疫活性間接殺傷腫瘤細胞；③增強腫瘤細胞的免疫源性來增強機體的抗腫瘤免疫反應。有研究證明了IFN-λs在鼠癌模型中有抗腫瘤活性[6]，IFN-λs與Ⅰ型IFN具有共同的生物活性，不過由于IFN-λs感受器表達受限，其功能具有組織特異性。因此，IFN-λs治療可能引起的不良反應較少，改善既往IFN治療的耐受性。目前有關HBV感染的人體內的IFN-λs水平研究較少，因此有必要充分了解慢性HBV感染患者體內IFN-λs的表達狀態，以及其抗病毒反應的調節和活動。

本研究對慢性HBV感染者，包括HBV攜帶者和慢乙肝、乙肝肝硬化、HBV相關性肝癌患者血清中IFN-λs水平進行檢測，并與健康人作對照，結果顯示人體體內IFN-λs水平并未因慢性HBV感染呈顯出高表達；相反，慢乙肝、乙肝肝硬化、HBV相關肝癌患者的血清IFN-λ1(IL-29)水平均明顯低于健康對照組(P均<0.01)，慢乙肝、乙肝肝硬化、HBV相關肝癌患者血清IFN-λ1(IL-29)水平明顯低于HBV攜帶者(P均<0.01)。這可能是由于HBV感染在免疫反應啟動之前就已建立，與HBV不誘導干擾素-α/β的表達、卻抑制IFN-α/-β產生相似[7]。慢性HBV感染也不會誘導IFN-λs的高表達，反而抑制IFN-λ1(IL-29) 產生。也正是由于IFN-λs和IFN-α/-β表達不足，使HBV免疫逃逸，造成慢性感染。也可能在HBV的免疫清除過程中IFN-λ1(IL- 29)參與了重要作用，使之消耗，在慢乙肝患者表現更為明顯。因此，對應用IFN-α無效、或不耐受IFN-α治療的慢乙肝、乙肝肝硬化、HBV性肝癌患者，IFN-λs可作為替代治療或聯合治療藥物之一，發揮其抗病毒、調節免疫、抗腫瘤作用。

有研究發現，IFN-λ在膀胱癌、血液病、乳腺癌、神經膠質瘤和肺癌組織中高表達，而且3種腫瘤相關的轉錄因子(甾體生成因子-1，腎母細胞瘤-1和P53)結合位點均在人IFN-λ轉錄起始位點上游1.0 kb以內的區域。本研究結果顯示，HBV相關性肝癌患者血清中IFN-λ3(IL-28B)的水平明顯高于其他人群(包括HBV攜帶者、慢乙肝、乙肝肝硬化患者及健康人)。由此推測，IFN-λ3(IL-28B)可能與肝癌的發生密切相關，檢測慢乙肝、肝硬化患者血清的IFN-λ3(IL-28B)，可能預測肝癌的發生、發展和預后。但結果尚待進一步大規模研究，并動態觀察、隨訪肝癌患者IFN-λ3(IL- 28B)變化驗證。

[1] Liang TJ, et al. Hepatitis B: the virus and disease. Hepatology，2009，49：S13-S21.

[2] 中華醫學會肝病學分會、感染病學分會. 慢性乙型肝炎防治指南. 中華傳染病雜志， 2005，23:421-431.

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