卡馬西平聯合塞來昔布治療癲癇模型大鼠的不良反應評估

劉幫慧, 戴啟荷

(湖北省荊州市中心醫院 神經內科, 湖北 荊州, 434022)

癲癇是神經內科較為常見的短暫性腦功能失調綜合征，發病率逐年上升，癲癇發作的表現主要以運動、行為、感覺、自主神經等一系列的功能障礙為主，如不及時采取治療措施，可能會遷延惡化為難治性癲癇，對患者的生命健康與生活質量造成十分大的威脅。抗癲癇藥物(AED)是目前控制疾病發作、減少發作次數的主要藥物，但是部分AED長期服用可能出現嚴重的不良反應，損害臟器或認知功能[1-3]，因此，臨床應用的AED需要保證有較好的耐受性和安全性。本組建立癲癇大鼠模型，給予卡馬西平與塞來昔布聯合用藥，并設立生理鹽水對照組，觀察用藥后的不良反應，為臨床安全用藥提供可靠的動物實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

清潔級雄性Wistar大鼠90只，購自荊州市中心醫院動物實驗室，體質量180～250 g, 放在獨立、通風的籠盒飼養, 5只/籠，飼養溫度19 ℃～25 ℃, 濕度50%～60%, 飼養環境經常消毒，大鼠自由進食，每2 d更換一次墊料。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 實驗儀器：微量注射器(上海玻利鴿工貿有限公司)，腦立體定位儀(日本NARISHIGE公司)，OLYMPUS顯微鏡(日本NARISHIGE公司)，BL-420圖像分析系統(成都泰盟軟件有限公司)，小型牙鉆(韓國DSI公司)。

1.2.2 實驗試劑：海仁酸(美國Kainic Acid公司)，大鼠心肌肌鈣蛋白T(cTnT)ELISE 試劑盒(德國寶靈曼公司)，NycoPlastin試劑(ISI值=1.19)，CaCl2溶液、蘇木素液、伊紅染液(上海科興生物科技有限公司)，卡馬西平片(北京諾華制藥有限公司)，塞來昔布(美國輝瑞公司)。

1.3 方法

1.3.1 分組方法：隨機選出10只大鼠設為假手術組，其余80只設為癲癇模型組。造模過程中假手術組有2只死于麻醉，剩下8只納入研究；模型組麻醉、手術過程死亡18只，根據腦電圖淘汰2只，剩余60只納入研究，并隨機均分為對照組與實驗組，各30只。

1.3.2 癲癇模型建立方法：大鼠10%水合氯醛腹腔注射麻醉，俯臥位固定；于頭背部中間處剪毛消毒后做長2 cm縱切口，暴露前囟區，于右側的海馬CA3區鉆孔，海仁酸1.5 μg(濃度1 μg/μL)緩慢注入該區域，整個注射過程大約10 min, 停針約5 min后緩慢拔出注射器，并在注射區域及額竇置入電極，以502膠固定。縫合切口后外敷青霉素防感染，放回籠后，依照Racine分級辦法密切觀察大鼠的癲癇發作行為及腦電圖。假手術組模型建立方法同上，但在大鼠海馬CA3區域注射的是等量生理鹽水，術后腹腔注射青霉素防感染。

1.3.3 治療方法：灌胃給藥，假手術組及對照組均給予生理鹽水1 mL/d、實驗組給予卡馬西平125 mg/kg、塞來昔布20 mg/kg，連續治療28 d后，處死大鼠。

1.4 癲癇點燃標準

本組根據Racine分級標準判斷模型癲癇點燃情況：大鼠在術后30 min～6 h內出現Ⅳ級以上的癇性行為，即被認為是癲癇充分點燃或者點燃成功；將癇性行為的發作強度分為6個級別，分別為Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級、Ⅳ級、Ⅴ級、Ⅵ級。

1.5 觀察指標

大鼠全部處死后選其腎臟組織、胃竇黏膜制成病理標本，采用光鏡檢測、觀察，分析各組胃竇黏膜的病理學改變；取心臟血檢測凝血功能，計算國際標準化比值(INR)，并觀察血液中心肌損傷標志物cTnT的表達水平。

2 結 果

2.1 各組大鼠的存活情況

假手術組8只均存活，存活率100%; 對照組存活17只，存活率為56.67%; 試驗組存活22只，存活率為73.33%。

2.2 各組大鼠胃竇黏膜病理學改變

假手術組與對照組大鼠胃竇黏膜均未見明顯病理學改變，實驗組中僅有2例(6.67%)出現病理學改變，其中1例表現為胃竇黏膜炎細胞浸潤，另1例表現為胃竇黏膜充血。3組胃竇黏膜病理學改變發生率無顯著差異(P>0.05)。3組大鼠的胃竇組織病理切片見圖1～3。

2.3 各組大鼠腎臟病理學改變情況

假手術組與對照組受檢模型的腎臟組織均無明顯的病理學病變，實驗組1例(3.33%)出現腎小球細胞水樣變性，組間比較無顯著差異(P>0.05)。3組大鼠腎臟病理切片見圖4～6。

圖1 假手術組胃竇黏膜 HE 100倍

圖2 對照組胃竇黏膜 HE 100倍

圖3 實驗組胃竇黏膜 HE 100倍

圖4 假手術組腎臟組織 HE 100倍

圖5 對照組腎臟組織 HE 100倍

圖6 實驗組腎臟組織 HE 100倍

2.4 各組INR值及cTnT水平比較

各組治療后INR 值無顯著差異(P>0.05); 對照組及實驗組cTnT水平顯著高于假手術組(P<0.01), 且實驗組顯著低于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 各組INR值及cTnT水平比較

與假手術組比較，*P<0.05, **P<0.01;與對照組比較, ##P<0.01。

3 討 論

癲癇是臨床常見神經系統疾病，卡馬西平是治療新診斷癥狀性部分性癲癇的一線藥物[4]。研究[5]表明，癲癇的炎性反應與腦內環氧化酶-2(COX-2)激活及前列腺素水平增高等密切相關，因此，COX-2抑制劑被逐漸應用于抗癲癇治療。大量研究[6-7]表明，COX-2抑制劑可降低癇性發作的頻率及癲癇持續狀態的病死率。塞來昔布、伐地考昔、羅非昔布等均屬于COX-2抑制劑，但由于不同的COX-2抑制劑存在不同的代謝途徑、半衰期以及血漿蛋白結合率，因此，在臨床應用中可能出現不同的不良反應。當前，塞來昔布是臨床應用最普遍的COX-2抑制劑。Kim E[8]等對高血壓模型大鼠實施了塞來昔布與羅非昔布的對照試驗，結果顯示塞來昔布在改善腎小球、腎臟CRP值、系膜硬化、防止巨噬細胞聚集等方面的作用顯著優于羅非昔布組，但其在腎臟、凝血功能、心血管等方面的安全性，醫學界尚未有統一的意見[9]。

一項納入11008名關節炎患者的雙盲、隨機的試驗表明，塞來昔布組的胃腸道不良反應率與安慰劑組比較無顯著差異，但顯著低于萘普生組8倍[10]。本研究中，對3組模型大鼠分別進行不同的治療，結果表明實驗組僅出現1例胃竇黏膜炎細胞浸潤、1例胃竇黏膜壞死、1例腎小球細胞水樣變性，3組胃腸道及腎臟病理學改變發生率無顯著差異(P>0.05)，提示卡馬西平與塞來昔布聯合治療癲癇對模型大鼠胃腸道系統及腎臟組織無顯著不良影響。

研究表明，長期聯用塞來昔布與華法林治療凝血功能障礙的患者，其INR水平較單用華法林者高，因此，臨床實施塞來昔布治療時，應密切監測患者凝血功能的變化。本組研究中, 3組INR值比較無顯著差異[11-13], 表明利用海仁酸點燃方式建立的癲癇模型未采取抗癲癇治療時大鼠凝血功能無明顯改變；馬西平聯合塞來昔布治療后也并未對大鼠凝血功能造成顯著不良反應[14]。

現階段，國內外醫學界尚未對塞來昔布影響心肌細胞的程度形成統一的結論，但有實驗研究[15]表明，低劑量塞來昔布可改善急性心肌缺血家兔的冠狀動脈功能。本組研究中，對照組大鼠cTnT水平顯著高于假手術組，提示如未能及時對癲癇大鼠進行抗癲癇治療，大鼠會出現明顯的心肌細胞損傷，原因可能是海仁酸點燃操作中，心肌細胞線粒體膜的通透性被極大改變，細胞呼吸作用的電子傳遞鏈被阻斷，從而出現心肌損害；同時，癲癇的多次反復發作，也可能造成心肌損傷；而實驗組治療后cTnT水平顯著降低，提示聯合用藥后大鼠心肌損傷的程度得到顯著改善。

綜上所述[16], 對通過海仁酸快速點燃海馬建立的癲癇模型給予卡馬西平及塞來昔布聯合治療，并未對大鼠的胃腸道、腎臟、血液系統等產生明顯不良反應，且可有效降低血液cTnT水平，對心肌具有一定保護作用。但這只是小樣本量動物實驗結果，其具體作用還需臨床篩選大樣本病例進一步研究。

[1] Prunetti P, Perucca E. New and forthcoming anti-epileptic drugs[J]. Current opinion in neurology, 2011, 24(2): 159.

[2] Lscher W. Critical review of current animal models of seizures and epilepsy used in the discovery and development of new antiepileptic drugs[J]. Seizure, 2011, 20(5): 359.

[3] Perucca P, Gilliam F G. Adverse effects of antiepileptic drugs[J]. The Lancet Neurology, 2012, 11(9): 792.

[4] 中華醫學會神經病學分會腦電圖與癲癇學組. 抗癲癇藥物應用專家共識[J]. 中華神經科雜志, 2011, 44(1): 56.

[5] Sancho P, Martín-Sanz P, Fabregat I. Reciprocal regulation of NADPH oxidases and the cyclooxygenase-2 pathway[J]. Free Radical Biology and Medicine, 2011, 51(9): 1789.

[6] 張遠之,林智君. 托吡酯與卡馬西平治療部分性癲癇發作的臨床療效評價[D]. 海南醫學, 2014, 25(2): 241.

[7] 張佳. COX-2及其抑制劑在大鼠癇性發作中的作用及其對大鼠認知功能的影響[J]. 醫學綜述, 2012, 18(3): 357.

[8] Kim E. Raval Ap, Defazio R A, et al．Ischemic preconditioning via ep-silonn protein kinase C activation requires cyclooxygenase-2 activat-ion in vitro[J]. Neuroscience, 2007, 145(3): 931．

[9] Narasimha A, Watanabe J, Lin JA, et al．A novel anti-atherogenic rolefor COX-2-potential mechanism for the cardiovascular side effectsof COX-2 inhibitors[J]. prostaglandins Other Lipid Mediat, 2007, 84(12): 24.

[10] 張其梅, 夏杰, 張建宇. 卡馬西平對癲癇患者血同型半胱氨酸、葉酸、維生素B12水平的影響[J]. 海南醫學, 2013, 24(1): 11.

[11] 侯小兵, 周銓, 王國福, 等. 癲癇術中致癇灶切除前后腦電監測棘波減少的量化指標[J]. 南方醫科大學學報, 2010, 30(10): 2363.

[12] 周蘭華. 護理干預對提高成人癲癇患者生活質量的效果觀察[J]. 實用臨床醫藥雜志, 2010, 14(22): 58.

[13] Gage B F, Fihn S D, White R H. Management and dosing of warfarin therapy[J]. The American journal of medicine, 2000, 109(6): 481.

[14] 劉淑丹, 王晗知, 何揚濤, 等. 氯化鋰-匹羅卡品致癇幼鼠成年后少突膠質細胞轉錄因子Olig2在腦白質區的表達[J]. 華南國防醫學, 2010, 3(24): 174.

[15] Zhao M, He X, Zhao M, et al. Low-dose celecoxib improves coronary function after acute myocardial ischaemia in rabbits[J]. Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology, 2012, 39(3): 233.

[16] 張伏龍. 氧化苦參堿對癲癇性腦損傷神經元的保護作用[J]. 實用臨床醫藥雜志, 2010, 14(19): 66.