葉酸受體介導的FRD在宮頸上皮內瘤變和癌變診斷中的應用價值

張朝紅，薛曉玲，黨蓉芳，黃 瑋，朱 艷，劉夏星

(寶雞市婦幼保健院 婦科，陜西 寶雞721000)

宮頸癌是最常見的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，全世界每年約有49.3萬新發(fā)子宮頸癌病例，我國每年新增病例13.15萬人，約占1/3，每年約5萬人死于宮頸癌[1]。隨著醫(yī)療技術的發(fā)展，對宮頸癌的診治有了相當的突破，明確了主要病因(90%由于HPV的感染所致)[2]。研究發(fā)現，癌前病變有一個相當長的發(fā)展過程，將病變阻斷于癌前病變，即可以減少宮頸癌的發(fā)病，降低宮頸癌的死亡率，因此，癌前病變的檢測相當重要[3]。葉酸受體介導的宮頸特殊染色法(Folic acid Receptor-mediated Tumor Diagnosis，FRD)是一種新的上皮細胞診斷新技術，具有國家專利，是一種用于人體上皮組織腫瘤細胞的活細胞染色劑，由葉酸衍生物、還原態(tài)亞甲藍和乙酸等組成，呈淡棕黃色。本文主要通過對我院應用FRD篩查宮頸癌前病變及對宮頸癌病例的結果分析，評價其在宮頸上皮內瘤變和癌變診斷中的臨床應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2013年3月—2013年6月來我院就診的門診及住院婦科疾病患者，在征得其同意后行FRD染色檢查宮頸病變，共檢查患者2 528例，其中門診1 762例，住院76 例，年齡最大70歲，最小18歲，平均年齡47.45歲，均為非妊娠婦女，且未接受過宮頸手術。其中1 586例有臨床癥狀，如白帶增多伴外陰瘙癢、血性分泌物或接觸性出血等。其余均為體檢患者及因其他病變需要住院手術的患者。對照檢查有陰道鏡檢查、細胞學檢查，其中942例患者行宮頸細胞學檢查，1586例患者行陰道鏡檢查。

1.2 檢查方法

對前來我院就診的門診及住院婦科疾病患者，在征得同意后，在婦科檢查后立即行FRD宮頸特殊染色法檢查排除宮頸病變，先行宮頸管染色，再行宮頸染色。FRD宮頸管特殊染色：暴露宮頸，醫(yī)用小棉簽蘸取FRD宮頸特殊染色液(陜西高源醫(yī)療器械服務有限公司)至近飽和(浸泡<2秒)插入宮頸管(2.5 cm-3 cm)，沿頸管內壁旋轉5圈逐步下拉棉簽，立即觀察棉簽顏色。FRD宮頸特殊染色：用大棉簽(>Φ15 mm)蘸取FRD宮頸特殊染色液至近飽和(浸泡<5秒)，用力涂抹宮頸5圈再在宮頸口按壓5秒即可取出，立即觀察棉簽顏色。

1.3 評判標準

陰性：①棉簽無變化，淡黃棕色，提示上皮組織無病變。②淡綠色或淡藍綠色，提示宮頸無異常病變，建議定期檢查或進行細胞學檢查。陽性：棉簽顏色為深藍綠色、墨綠色、紫黑色，提示宮頸異常病變，建議行陰道鏡檢查并取活檢。所有病例的染色均由經過專門培訓的婦科醫(yī)生操作，操作均按使用說明進行。

1.4 細胞學與陰道鏡檢查

細胞學檢查：所用的細胞學(宮頸刮片)樣本由我院病理科醫(yī)生判斷，巴氏染色IIb均認定為異常，需進一步在陰道鏡下取活檢、病理學證實。陰道鏡檢查：部分患者需行陰道鏡檢查對比，部分患者宮頸刮片或宮頸特殊染色提示異常，均在我院陰道鏡室檢查。電子陰道鏡采用深圳金科威SLC-2000電子陰道鏡成像系統(tǒng)，檢查醫(yī)師由專門經過培訓的婦科醫(yī)師操作。活檢結果由本院病理科專人評定，必要時進行會診討論。以宮頸活組織病理檢查為最后確診標準。

1.5 統(tǒng)計學方法

數據結果采用SPSS 19軟件進行統(tǒng)計學處理。

2 結果

2.1 染色顏色特征分布

淡棕色256例，淡綠色及淡藍綠色2 183例，深藍綠色、墨綠色80例，紫黑色9例。

2.2 檢查結果

942例患者同時行宮頸細胞學檢查，其中11例提示IIb以上，異常率為1.16%(11/942)。共有1 597例患者行陰道鏡檢查(包括需行陰道鏡對比的1 586例患者及細胞學異常在陰道鏡下取活檢的11例患者)，取100例(89+11)行活檢，結果發(fā)現，正常或炎癥的84例；病理診斷CIN共10例，其中CINⅠ3例，CINⅡ5例，CINⅢ 2例，宮頸Ca 6例，CIN檢出率為7.5%(6/80)，宮頸Ca(其中鱗癌4，腺癌2例)檢出率為66.67%(6/9)。

2.3 宮頸特殊染色病理診斷結果比較

以組織病理學診斷為標準，回顧性分析染色法和細胞學檢查法的敏感性和特異性。在發(fā)現CINII以上病變方面，FRD特殊染色法的診斷符合率為70.4%，宮頸癌檢出率達到83.3%。以病理結果CINII以上為陽性標準，FRD特殊染色的敏感性為76.9%，特異性為81.6%，見表1。

表1 組織病理學檢查結果與FRD染色異常的關系

3 討論

近年來，隨著社會的發(fā)展和性開放，宮頸癌發(fā)病率越來越高，且呈年輕化趨勢[4，5]。值得注意的是，2012年美國宮頸癌診治指南中提到，大約有一半的宮頸癌在美國確診的婦女從未篩選，額外的10%的癌癥發(fā)生在在過去5年的婦女不篩選，在美國這樣一個發(fā)達的國家，篩查的機率應該比我國更多，可見篩查的重要性。我院已引進葉酸受體介導的宮頸特殊染法，費用較低，可為絕大多數患者接受，可以在術前、每年的常規(guī)篩查中應用，而且不需投入復雜的設備及操作人員培訓，簡單易行。

近30年臨床研究證明，葉酸受體數量在大多數腫瘤細胞表面處于高表達，而在正常細胞中較少或無表達[6，7]，所以，葉酸復合物可以作為腫瘤特異性靶向介導分子用于診斷和治療。生物染色劑亞甲基藍對癌細胞及黑色素有高度的親和性，其氧化還原性使亞甲基藍在腫瘤組織的氧化還原態(tài)中表現出不同的變色反應光譜[8]。FRD宮頸特殊染色液被涂抹于上皮組織后，如果有癌細胞存在，葉酸及葉酸復合物就會經過這些細胞表面的葉酸受體，迅速進入細胞漿，同時還原型的亞甲基藍也被帶入細胞漿內。葉酸被還原成四氫葉酸，參與一碳單位的代謝過程中。還原型的亞甲基藍則被細胞內廣泛存在的活性氧化，變?yōu)閬喖姿{。由于這些生物大分子的進入，使得細胞內的滲透壓升高，致使亞甲藍逸出細胞外，則可在棉簽上顯現出不同的顏色。如棉簽無變色，則表明無病變細胞，如果棉簽變色(深藍綠色、墨綠色、黑色)，表明病變部位的葉酸受體數量異常增高，則提示可能有癌前病變或癌變，需進一步檢查。

宮頸特殊染色的優(yōu)勢在于婦科檢查時同時得到結果，簡便快捷，改變了傳統(tǒng)的刮片、TCT需等待結果，不需要復雜的培訓及設備添置，經濟實惠，為廣大患者接受。本研究利用宮頸病變發(fā)生時細胞內發(fā)生的異常變化來判斷病變的性質，原理與其他檢查完全不同，根據病變組織葉酸受體數量在大多數腫瘤細胞表面處于高表達，而在正常細胞中較少或無表達的機理。本次研究發(fā)現，組織病理學結果與宮頸特殊染色的診斷符合率依次為：CINI為 66.7%(2/3)，CIN II為80%(4/5)，CIN III為50%(1/2)， 宮頸癌83.3%(5/6)。以組織病理學CIN II為標準，宮頸特殊染色的敏感性為76.9%，特異性為71.3%，陽性預測值為28.6%，陰性預測值為95.4%。提示宮頸特殊染色其病變性質越嚴重、級別越高，特殊染色的診斷符合率越高，說明特殊染色結果能夠客觀地反映上皮組織的病變程度。

作者簡介：張朝紅(1978-)，女，碩士，主治醫(yī)師，從事子宮內膜異位癥方面的研究。

參考文獻：

[1]連麗娟,林巧稚.婦科腫瘤學[M].第4版.北京：人民衛(wèi)生出版社,2006.

[2]盧洪勝,曹學全,甘梅富,等.宮頸癌及癌前病變NOB1的表達及與高危型HPV感染的相關性[J].實用醫(yī)學雜志,2013,29(12):1958.

[3]楊惠新.宮頸癌前期病變篩查836例結果分析[J].中國醫(yī)藥導刊,2012,14(7):1116.

[4]趙恩鋒,鮑 嫘,李 超,等.近50年宮頸癌的發(fā)病趨勢和臨床特點分析[J].解放軍醫(yī)學雜志,2005,30(7):644.

[5]葉 倩,饒 金,郜紅藝，等.754例宮頸癌流行病學分析[J].中國婦幼保健,2013,28(19):3068.

[6]Reddy JA,Allagadda Vm,Leamon CP.Targeting therapeutic and imaging agents to folate recep tor positive tumors[J].Current Pham Biotech,2005(6):131.

[7]賴百塘.亞甲藍在腫瘤診斷和治療中的應用[J].中國藥學雜志,2004,39(4):243.

[8]楊 瑞,王淑君,張 穎.亞甲藍作為淋巴示蹤劑的研究與展望[J].中國藥劑學雜志,2009,7(4):65.