淫羊藿配方顆粒的提取工藝研究

★ 張雪杰 龔千鋒 胡昌江 周一帆

(1.江西中醫藥大學 南昌 330006; 2.成都中醫藥大學 成都 611137)

中藥配方顆粒是用符合炮制規范的優質中藥飲片為原料，經現代制藥技術提取濃縮而成的單味顆粒。其性味、功效與原生藥一致，供中醫臨床配方使用，具有質量穩定、療效可靠、不需煎煮、直接沖服、服用量少、衛生安全、攜帶和儲存方便等優點。近年來，中藥配方顆粒作為對傳統中藥飲片應用形式的突破越來越受到認可。

淫羊藿為小檗科植物淫羊藿Epimediumbrevi-cornuMaxim.、箭葉淫羊藿Epimediumsagittatum(Sieb.etZucc.)Maxim、柔毛淫羊藿EpimediumpubescensMaxim、或朝鮮淫羊藿EpimediumkoreanumNakai的干燥葉。性溫，味辛，甘。歸腎、肝經。具有補腎陽，強筋骨，祛風濕的作用。用于腎陽虛衰，陽痿遺精，筋骨痿軟，風濕痹痛，麻木拘攣等癥。[1]現代研究證實，淫羊藿有效成分為總黃酮，其中淫羊藿苷是總黃酮的主要成分。[2-5]目前對淫羊藿的研究報道多在化學成分和藥理作用等方面，而對其制成的單味中藥配方顆粒的研究尚未報道，因此本實驗以淫羊藿苷和總黃酮含量、收膏率為指標，對其配方顆粒的提取工藝進行優選，為淫羊藿配方顆粒生產提供理論依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀(Agilent 1200S，四元泵，)，KQ-300E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，BP-61電子天平(十萬分之一，德國Sartorius)，ZDHW調溫電熱套(北京中興偉業儀器有限公司)，756PC紫外可見分光光度計(上海洪紀儀器設備有限公司)。

1.2 試藥 淫羊藿苷對照品(中國藥品生物制品檢定所 批號：110737-200415)；乙腈(色譜純，美國Tedia公司)，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。 淫羊藿藥材購于成都荷花池藥材市場，經胡昌江教授鑒定為小檗科植物淫羊藿EpimediumbrevicornuMaxim.的干燥莖、葉。

2 實驗方法

2.1 正交設計 淫羊藿苷為黃酮類成分，有良好的水溶性，所以可以用水作為提取溶劑。經預試驗，根據影響提取的主要因素，選擇加水量、提取時間、提取次數作為考察因素，以淫羊藿苷和總黃酮含量、藥材出膏率為考察指標，按L9(34)表進行正交試驗。因素水平見表1。

表1 因素水平

2.2 淫羊藿苷含量的考察

2.2.1 樣品溶液的制備 按正交試驗設計安排實驗(見表1)，分別稱取淫羊藿飲片9份，每份20 g。按正交試驗方案規定的加水量，提取時間，提取次數進行回流提取，煎煮后藥液合并過濾并定容至500mL，搖勻。精密吸取10mL濃縮藥液至25mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，即得樣品溶液。吸取5mL樣品溶液，過0.45μm的微孔濾膜，棄去初濾液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取淫羊藿飲片適量，粉碎，取粉末(過三號篩)約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇20mL，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33kHz)1小時，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.3 對照品溶液的制備 取淫羊藿苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

色譜條件與系統適用性試驗：： Diamonsil C18 色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)；G1314B型VWD紫外檢測器(美國Agilent)，柱溫為30℃，檢測波長270nm，流動相：乙腈-水(30∶70)，流速1mL/分。柱效：按照淫羊藿苷峰計算理論塔板數不應低于1 500。

線性關系的考察 精密量取淫羊藿苷對照品溶液2、4、6、8、10、14 μL進樣，記錄色譜圖，測定其峰面積，并以峰面積值(Y)對進樣量(X)進行回歸，得標準曲線方程Y=1253.4X+ 9.859 1，r=0.999 7。結果表明，在0.200 8-1.405 6 μg范圍內，線性關系良好。

2.3 出膏率的考察

精密吸取9次正交試驗所得提取液各10mL，分別置于已經經過干燥恒重的蒸發皿中，蒸發水分至恒重得到干浸膏，計算出膏率。

2.4 總黃酮含量的考察

2.4.1 供試品溶液的制備 精密量取淫羊藿苷轉移率測定項下的供試品溶液1mL，置100mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.4.2 對照品溶液的制備 取淫羊藿苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

2.4.3 測定方法 以甲醇作為空白溶液，在270nm波長處分別測定對照品溶液與供試品溶液的吸光度，計算，即得。

線性關系考察 精密量取上述對照品溶液1.2，1.4，1.6，1.8，2.0mL，置10mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，按上述測定方法測定吸光度。以質量濃度為橫坐標，吸光度的值為縱坐標，繪制標準曲線，經計算得回歸方程：Y=3.356 6X+0.056 6，r=0.999 1，結果表明，淫羊藿總黃酮在0.012-0.020mg/mL范圍內吸光度與質量濃度之間呈良好的線性關系。

2.4.4 樣品溶液的制備 精密量取淫羊藿苷轉移率測定項下的樣品溶液3mL，置100mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，即得樣品溶液。

2.5 實驗結果分析

采用加權評分法，按照淫羊藿苷含量、總黃酮含量和出膏率的權重比(4∶3∶3)計算綜合評分，并對實驗結果進行分析，結果見表2，方差分析見表3。

表2 正交試驗結果

表3 方差分析

2.6 最佳工藝的確定 從上述結果分析可以看出，3個因素的影響大小依次為C>A>B，且A3>A2>A1，B1>B3>B2，C3>C2>C1，且因素A和因素C有顯著性差異，因素B無顯著性差異。從節約能耗和降低成本考慮，在保證提取充分的前提下，綜合分析各因素對淫羊藿苷和總黃酮含量、出膏率的影響，確定提取工藝為加12倍量水、煎煮提取3次、每次1小時。

為了驗證所選條件的合理性和可行性，進行了驗證實驗，結果見4。

表4 驗證試驗

淫羊藿苷平均含量為6.53mg/g，總黃酮平均含量為41.67 mg/g，平均出膏率為18.82%。結果表明，優選的提取工藝基本可行。

3 結論與討論

經過研究確定淫羊藿配方顆粒提取的最佳工藝為：A3B2C3，即加12倍量水、煎煮提取3次、每次1小時。實驗證明該淫羊藿提取工藝穩定合理，能有效地提取淫羊藿苷，且能適用于大生產，可作為淫羊藿配方顆粒的提取工藝。

黃酮類化合物是淫羊藿飲片中的重要成分，而淫羊藿苷又是總黃酮的主要成分，對心腦血管系統、血液系統、免疫系統、骨骼系統、生殖和內分泌系統有較好作用，還有抗腫瘤和抗炎等藥理作用，[6]且國家對中藥制劑的質量等各方面要求也越來越高，因此本試驗將淫羊藿苷和總黃酮含量、收膏率三項作為考察指標更加具有可行性。

中藥配方顆粒作為飲片的發展，大多以水作為其提取溶劑，淫羊藿中的淫羊藿苷易溶于水，故以水作為溶媒將其制成中藥配方顆粒，既保證了傳統中藥以水煎煮的特點，又為生產節約了成本，值得推廣和應用。

淫羊藿品種較多，《中華人民共和國藥典》(2010年版)規定的就有4種，經過對幾種淫羊藿中淫羊藿苷的含量比較之后，發現淫羊藿植物中淫羊藿苷含量明顯高于其他幾種，大約為1.37%，且該淫羊藿植物在藥材市場較易購買，故本實驗選定淫羊藿這一品種進行研究。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(2010年版一部)[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：306.

[2]藺學燕，董傳海，李偉華，等.淫羊藿有效成分的藥理研究與臨床應用[J].時珍國醫國藥，2005，16(9)：917.

[3]李遇伯，孟繁浩，鹿秀梅，等.淫羊藿化學成分的研究[J].中國中藥雜志，2005，30(8)：586-587.

[4]張明月，石進校.淫羊藿屬植物研究進展[J].吉首大學學報，2009，30(1)：108-109.

[5]韓廣軒，王麥莉，張軍東，等.淫羊藿化學成分研究進展[J].藥學實踐雜志，2002，20(6)：359-360

[6]郭峰，趙納.淫羊藿藥理作用的研究現狀及展望[J].中國藥業，2007，16(24)：71