HPLC法測定注射用乳糖酸阿奇霉素中的有關物質

譚佳　李鳳鳴　吳群容

[摘要] 目的 建立高效液相色譜法測定注射用乳糖酸阿奇霉素的有關物質。 方法 采用高效液相色譜法測定已知雜質以及未知單雜。使用BDS HYPERSIL C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈∶pH8.2磷酸鹽緩沖液（0.05mol/L磷酸氫二鉀溶液， 用20%磷酸調節pH至8.2）（55∶45）為流動相。樣品溶液的進樣量為200μg，流速：1.5mL/min，檢測波長：293nm。 結果 乳糖酸阿奇霉素與其雜質能達到基線分離，且阿奇霉素注射劑中的酸根對阿奇霉素的有關物質測定無影響，供試品溶液的濃度與峰面積線性良好，方法的準確性以及靈敏度均可滿足要求。 結論 該方法簡便、專屬性好、靈敏度高，能較好反映各種乳糖酸阿奇霉素制劑中的有關物質的情況。

[關鍵詞] 高效液相色譜法；乳糖酸阿奇霉素；有關物質；制劑

[中圖分類號] R927 [文獻標識碼] B [文章編號] 2095-0616（2014）13-97-03

[Abstract] Objective To establish the determination method of the related substances in azithromycin lactobionate and its injection. Methods High performance liquid chromatography（HPLC）was used for the determination of the known impurity and the unknown impurities. The analysis was performed on a BDS HYPERSIL C18 column （250mm×4.6mm， 5μm）. The mobile phase was composed of acetonitrile∶pH8. 2 phosphate buffer （0.05mol/L K2HPO4 solution， adjust pH to 8.2 with 20% phosphate acid） （ 55∶45） ，the injection amounts of sample solutions were 200μg，with the flow of 1.5mL/min.The detection wavelength was 293nm. Results Azithromycin lactobionate and its related substances can be well separated from each other on the developed system. The co-existence acids in azithromycin for injection did not interfere with the determination of the related substances. The chromatographic peak area and concentration of moxacin hydrochloride showed a good linear relationship。Accuracy and sensitivity of the method could meet the specific analytical requirements. Conclusion The developed method is convenient， a good specificity， high sensitivity. It can be used to determine the related substances in azithromycin lactobionate and its injection.

[Key words] HPLC； Azithromycin lactobionate； Related substances； Drug products

阿奇霉素在水中幾乎不溶解，但在稀酸溶液中易溶，且其對酸較敏感，在酸溶液中可使其完全降解[1-2]。中國藥典2005年版中收載有阿奇霉素，目前常用鹽酸、硫酸、乳糖酸、馬來酸、門冬氨酸阿奇霉素以及阿奇霉素磷酸二氫鈉、阿奇霉素檸檬酸二氫鈉及相應的注射劑（粉針，小針劑及大輸液）[3]。有關物質檢查是目前藥品安全性評價的一個重要指標。HPLC法是最常用的有關物質檢查方法之一[4]。近年，我國呼吸系統感染發病率直線上升，本品需求量穩步攀升，已逐漸成為治療呼吸道感染的重要藥物。現參考國內外藥典及有關文獻，建立控制注射用阿奇霉素有關物質的方法，報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AG-135電子天平（瑞士Mettler Toledo公司），戴安U3000高效液相色譜儀，檢測器：VWD檢測器，工作站：變色龍軟件；Milli-Q超純水系統（美國密理博公司）。

1.2 試藥及溶劑

市售注射用乳糖酸阿奇霉，阿奇霉素系統適用性對照品、阿奇霉素峰鑒別對照品（均為歐洲藥典對照品）；其原料、輔料均由沈陽第一制藥有限公司提供。甲醇、乙腈均為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

使用BDSHYPERSILC18色譜柱（250mm× 4.6mm，5μm），以乙腈∶pH8.2磷酸鹽緩沖液（0.05mol/L磷酸氫二鉀溶液液，用20%磷酸調節pH至8.2）（55∶45）為流動相。樣品溶液的進樣量為200μg，流速：1.5mL/min，進樣量：20μL，理論板數不低于3500，檢測波長：293nm，柱溫：40℃。

2.2 供試品溶液和對照溶液的制備

精密稱取供試品3mL，置于10mL棕色容量瓶中，加溶劑至刻度，搖勻，作為供試品溶液；精密稱取1mL，置于10mL棕色容量瓶中，加溶劑至刻度，搖勻，精密稱取1mL，置于100mL棕色容量瓶中，加溶劑至刻度，搖勻，作為對照溶液。

2.3 檢測方法

精密量取供試品溶液和對照溶液各50?L，分別注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，記錄色譜圖。取系統適用性對照品溶液及峰鑒別對照品溶液50?L注入液相色譜儀，根據峰鑒別溶液色譜圖確定雜質峰位，錄色譜圖至主峰保留時間的2.5倍。

2.4 線性

稱取供試品適量，置于50mL棕色容量瓶中，加溶劑稀釋至每毫升含0.1mg的溶液，搖勻，量取1mL，置于100mL棕色容量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為線性儲備液；精密稱取上述儲備液2、5、10、20、30mL，分置于100mL棕色容量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為線性測試溶液1、2、3、4、5；精密量取上述線性測試溶液1、2、3、4、5線性儲備液各20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果見表1，表明在2.017～30.255范圍內，線性關系較好。

2.5 精密度試驗

精密取供試品50mg，置于100mL棕色容量瓶中，加溶劑至刻度，搖勻，精密量取1mL，置于10mL棕色容量瓶中，加溶劑至刻度，搖勻，精密量取1mL，置于100mL棕色容量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；精密量取上述供試品溶液50?L連續進樣5次。見表2。

3 討論

阿奇霉素為半合成的十五大環內酯類藥物，其屬于廣譜抗生素，其抗菌譜與紅霉素相近，但其作用較強，對淋球菌、流感嗜血桿菌的作用比紅霉素強4倍；不僅對革蘭陽性菌有較強的抗菌活性，且對嗜肺軍團菌、肺炎衣原體及沙眼衣原體等作用也較強，對抗梭狀芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌感染也比紅霉素有效；該藥物口服吸收迅速，口服生物利用度為40%，消除半衰期可長達32～45h臨床廣泛用于控制呼吸系統感染，泌尿系統感染及其他感染[5-10]。

本研究對乳糖酸阿奇霉素中有關物質測定的HPLC法進行了系統的方法學驗證。結果顯示，乳糖酸阿奇霉素進樣質量在2.017～30.255μg/mL（r=0.9999）范圍內，供試品溶液的濃度與峰面積線性良好。最小檢出限：供試品的最小檢測限為0.11μg/mL。最小定量限為4.03ng，精密度：RSD為0.92%。溶液穩定性：RSD為0.87%，試品溶液及其對照溶液在8h內穩定。

本研究對樣品和市售品進行了檢測，對已知雜質進行了檢測及定量分析，結果顯示，乳糖酸阿奇霉素中單個已知雜質均達到檢測限，且未知雜質未檢出。綜上所述，本研究建立的易在國內普及、專屬性較好的阿奇霉素有關物質HPLC分析方法，較好地解決了阿奇霉素有關物質分析的難題，為阿奇霉素注射劑質量控制提供了良好的分析手段。但阿奇霉素對酸敏感、對熱不穩定，因此，阿奇霉素輸液劑型應注重其合理性。

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（收稿日期：2014-04-21）