康腎口服液的最佳制備工藝研究

王希東 范莉莉 李文俊 張正臣

·藥物研究·

康腎口服液的最佳制備工藝研究

王希東 范莉莉 李文俊 張正臣

目的 研究康腎口服液的最佳制備工藝。方法比較水提法、雙提法、醇提法3種提取方法，并對優者用正交設計法進行優化，考察提取溫度、提取時間和提取次數3個因素。每個因素確定為2水平，選擇L8(27)表。并按獲得的最佳制備工藝進行連續3批試制。結果提取溫度為最大影響因素，然后依次為提取時間、提取次數；連續試制3批，效果穩定。結論所得康腎口服液最佳制備工藝，方法穩定可靠。

康腎口服液；正交設計；制備工藝

康腎口服液是根據中醫理論和現代藥理研究成果擬定的院內協定處方。本制劑由人參、黃芪、白術、茯苓、淫羊藿、山藥、地龍、紅花、金櫻子、芡實、甘草為原料制備而成，具有益氣溫陽，固本澀精，活血通絡的作用和功效。用于慢性腎炎、腎病綜合征、陽痿早瀉。為了保證制劑質量，本文對其最佳提取工藝進行研究。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 人參、黃芪、白術、茯苓、淫羊藿、山藥、地龍、紅花、金櫻子、芡實、甘草均符合《中國藥典》2010年版一部有關規定，購自河南省新鄉市藥材公司。人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對照品，中國藥品生物制品檢定所提供。高效液相色譜儀HP1100，美國惠普公司生產。

1.2 實驗內容

1.2．1 提取方法

1.2.1.1 水煎煮提取：經預試驗，根據正交設計選出了最佳提取條件，即按處方比例稱取各味藥材共175 g，粉碎成10目粗粉，加水煎煮3次，40 min/次，水提液部分趁熱濾過，濾液濃縮至相對密度為1.31～1.34的稠膏(70℃)，干燥。得樣品A。

1.2.1.2 雙提法提取：經預試驗，根據正交設計選出了最佳提取條件，即按處方稱取各味藥材共175 g,粉碎成10目粗粉，加水煎煮3次，40 min/次，水提液部分趁熱濾過，濾液濃縮至適量，放冷，加入95%乙醇使其達含醇量60%，靜置24 h，取上清液，回收乙醇至無醇昧，濃縮至相對密度為1.31～1.34的稠膏(70℃)，干燥。得樣品B。

1.2.1.3 不同濃度乙醇提取[1，2]：稱取1/2量上述各味藥材各3份，分別用20%、40%、50%、60%、70%、85%、90% 乙醇提取2次，溶媒量為8倍，每次提取時間為2 h。醇提取液合并，回收乙醇至無醇味，濃縮至相對密度為1.31～1.34的稠膏(70℃)，干燥。得樣品 C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7。

1.2.2 考察指標及方法

1.2.2.1 樣品中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的含量測定方法：人參為方中主要藥味，本法采用高效液相法對方中人參以人參皂苷Rg1、人參皂苷Re為指標進行含量測定。①色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱為Diamonsil C18(4.6×150 mm，5 μm)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(18∶82)為流動相；流速為1.0 ml/min；柱溫為30℃；檢測波長為 203 nm。理論板數按人參皂苷Rg1計算應不低于6 000。②對照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品，加甲醇制成每毫升各含0.2 mg的混合溶液，搖勻，即得。③供試品溶液的制備 取本品10 ml,用水飽和正丁醇振搖提取3次(30、20、10 ml)，合并正丁醇液，依次用氨試液20 ml，水20 ml洗滌，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉移至5 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，，搖勻，濾過，取續濾液，即得。④測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算出供試品中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的含量，即得。

1.2.2.2 人參皂苷Rg1、人參皂苷Re含量測定線性關系試驗 取人參皂苷Rg1、人參皂苷Re混合對照品溶液(含人參皂苷Rg1為0.53 mg/ml、含人參皂苷Re為0.37 mg/ml)，精密量取1、2、3、4、5 ml，置10 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。精密量取各10 μl，分別注入液相色譜儀，人參皂苷Rg1回歸方程為Y=1E+06X，相關系數r=0.9996；人參皂苷Re回歸方程為Y=2E+06X，相關系數r=0.9997。測定峰面積，結果見表1。以峰面積(X)對進樣濃度(C，mg/ml)進行線性回歸，人參皂苷Rg1濃度在0.053～0.265 mg/ml范圍內，峰面積與濃度線性關系良好，人參皂苷Re濃度在0.037～0.185 mg/ml范圍內，峰面積與濃度線性關系良好。

表1 人參皂苷Rg1、人參皂苷Re線性關系試驗結果

1.2.2.3 精密度試驗：取線性關系試驗項下的3號溶液，精密量取10 μl，連續測定6次。峰面積的相對標準差RSD<2%。見表2。

表2 精密度試驗結果

1.2.2.4 回收率測定：取已知含量的樣品，加人參皂苷Rg1對照品溶液(0.53 mg/ml)2.5 ml和人參皂苷Re對照品溶液(0.37 mg/ml)2 ml，按供試品溶液制備方法制備，測定峰面積，計算測得量，結果平均回收率為99.12%，RSD為1.02%。見表3。

表3 回收率測定結果

1.2.2.5 穩定性試驗：取同一批樣品，按含量測定項下方法制備樣品，得樣品供試品溶液；取供試品溶液與對照品溶液，于0 h、1 h、2 h、4 h、8 h及24 h分別進樣，每次進樣量10 μl，記錄峰面積值。見表4。

2 結果

2.1 3種方法人參皂苷Rg1、人參皂苷Re含量比較 水提取法中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re損失較大，原因是常規水提法提取人參皂苷時，過濾十分困難，是由于人參中粘多糖與濾紙纖維形成一種膜狀物質阻礙了提取液的抽濾。雙提法對康腎口服液中主要藥味人參的有效成分提取較完全，而不同提取溫度、不同提取時間、不同提取次數提取，效果不同，因此對雙提法工藝進行優化。見表5。

表4 穩定性試驗結果

表5 三種方法人參皂苷Rg1、人參皂苷Re含量的比較

2.2 因素-水平的確定 人參皂苷Rg1、人參皂苷Re溶于水中，采用水作溶媒進行提取。重點考察因素為提取溫度、提取時間和提取次數3個因素。每個因素確定為2水平。見表6。

表6 正交實驗因素水平表

2.3 正交設計表的選擇 根據因素-水平及自由度，試驗次數為8，考慮因素之間的交互作用，選擇L8(27)表，根據正交設計表及因素-水平表。見表7。

2.4 試驗方差分析 只有A因素效應獲顯著性意義(P<0.01)；其他均未獲顯著性意義，故可認為影響提取工藝的主要因素是A因素，獲得提取工藝相對最優組合以提取量最高者為好，即A2B2C2，在100℃提取40 min，提取次數為3次。見表8。

表7 正交試驗實施方案及計算表

表8 正交試驗方差分析

注：經查F值表，F0.05(1,2)=18.5，F0.01(1,2)=98.5，F0.05(1,4)=7.71，F0.01(1,4)=21.2

3 討論

人參為康腎口服液的主要藥材，關于其提取很多報道。本實驗分別用水煎煮法、雙提法、醇提法進行比較研究，發現由于常規水提法提取人參皂苷時，過濾十分困難，是由于人參中粘多糖與濾紙纖維形成一種膜狀物質阻礙了提取液的抽濾。同時，不同提取溫度、不同提取時間、不同提取次數提取，效果不同，因此對雙提法工藝進行優化。得最佳制備工藝，并連續3批按法試制，結果穩定可靠。

1 吳清，李云谷，杜守穎，等.當歸、川芎提取工藝研究.中國實驗方劑學雜志，1995，5：17-18.

2 張品，陳全成，鄭毅丹,等.不同提取方法對人參皂苷提取率的影響.吉林農業大學學報，2003,25：71-72.

·消 息·

本刊對來稿推薦信及更改作者的要求

1.來稿必須附第一作者單位的推薦信，并加蓋公章，只在稿件上蓋章無效。

2.介紹信的內容必須包括該作者的姓名及文題全稱，并應說明：(1)稿件內容真實；(2)稿件內容不涉及保密；(3)無一稿兩投；(4)作者署名及順序無爭議；(5)臨床試驗研究論文應注明患者知情同意。

3.在稿件處理期間，因故增減作者或必須更改作者署名順序者，變更前后所有作者簽名，由原出具投稿推薦信的單位開具證明，并加蓋公章。

另外，論文若屬國家自然科學基金項目或軍隊、部、省級以上重點課題，請寫出課題號，并附由推薦單位加蓋公章的基金或課題證書復印件。

本刊編輯部

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.03.054

453000 河南省新鄉市，中國人民解放軍第371中心醫院

張正臣，453000 中國人民解放軍第371中心醫院；

E-mail：xxzzc2010@126.com

R 917

A

1002-7386(2014)03-0437-03

2013-07-22)