用于多藥耐藥轉運評價的P糖蛋白底物羅丹明123定量方法的建立*

★ 李秀瓊 袁慕榮 孫亞彬 劉思佳

(1.佛山市中醫院藥劑科 廣東 佛山 528000；2.南方醫科大學南方醫院藥物臨床試驗機構 廣東 廣州 510515；3.南方醫科大學南方醫院藥學部 廣東 廣州 510515)

羅丹明123(R123)又稱雙6-氨基3-亞胺基3H-氧雜蒽-9-yl苯甲酸甲酯，其分子式為C21H16N2O3·HCl，相對分子質量為344.4。它是一種發黃綠色熒光的熒光染料，可以根據細胞膜的選擇性來染色活細胞線粒體,廣泛用作檢測線粒體膜電位，也常用于細胞凋亡檢測。另外，R123可以快速通過細胞膜,高度選擇性地聚集在線粒體,并且對細胞沒有任何毒性，同時被多藥耐藥細胞(mμLtidrug resistance ,MDR)有效排出[1-5]。R123是P糖蛋白的一種底物，常用于癌癥研究[4,5]。現在常用檢測R123的方法有：熒光分光光度計[6-8]，高效液相熒光檢測器[9,10]，酶標儀[11]等。

R123作為多藥耐藥性體內評價的指示劑時,通常需要檢測其在血液中的濃度。但是現在還未發現有文章應用LC-MS/MS系統的評價R123在血漿中的檢測方法學，并且考察其提取方法，精密度，靈敏度等。本文建立了用LC-MS/MS檢測血漿中R123濃度的方法學，并保證了分析方法快速，靈敏度高，高選擇性。

1 材料與方法

1.1 試劑 羅丹明123(批號：046K3688)；內標羅丹明6G(批號：1425911V)；甲醇，乙腈均為分析純，購自西格瑪公司(中國上海)。乙酸乙酯，二氯甲烷，碳酸氫鈉均為色譜純，購自CAF公司(中國廣州)。

1.2 裝置 Agilent 1100 Series液相色譜儀；Agilent 6410三重四極桿液相色譜/質譜；Agilent MassHunter色譜管理系統。

1.3 LC-ESI-MS 用Zorbax Eclipse XDB C18column(150mm×3.5mm，5μm；Agilent, Wilmington, DE, USA)在柱溫為40℃時分離血漿中的待測物。流動相為甲酸銨(包含5mM甲酸銨及1%的甲酸)和乙腈(5∶95)，流速為0.5mL/min。自動進樣器的溫度設定為25℃

質譜應用陽離子多重反應器(MRM)。……