水蛭提取物對HL-60細胞增殖與分化的影響

★ 肖移生 侯吉華 廖夫生 朱大誠

(1.江西中醫藥大學基礎醫學院 江西 南昌 330004；2.江西中醫藥大學藥學院 江西 南昌 330004)

水蛭，俗稱螞蝗。其性咸、苦、平，歸肝經，有破血、逐瘀、通經等功效，臨床上用于治癥瘕、痞塊、血瘀閉經、跌打損傷等。其藥理作用為抗凝、溶栓、抗血小板及降血脂等[1]，可單方或組方用于腫瘤的治療[2]。本課題組前期研究發現，水蛭提取物對HL-60細胞生長有抑制作用[3]，為進一步深入研究，本課題組進行了水蛭提取物對HL-60細胞增殖與分化影響的實驗。

1 材料與方法

1.1 細胞株及培養方法 HL-60細胞購自中國醫學科學院基礎醫學研究所基礎醫學細胞中心，由江西中醫藥大學基礎醫學院實驗中心保存。將HL-60細胞置于含有10%新生小牛血清的RPMI1640完全培養基中(37℃，5%CO2飽和濕度)，培養至細胞處于對數生長期，備用于后續實驗。

1.2 主要試劑 RPMI1640培養基和新生小牛血清為美國GIBCO公司產品，全反式維甲酸(All trans-retinoic acid, ATRA)、四甲基偶氮唑鹽(MTT)、二甲基亞砜(DMSO)、佛波酯(TPA)均為美國Sigma公司產品，小鼠抗人CD11b、CD14 FITC熒光標記抗體為Immunotech公司產品。

1.3 藥物 水蛭原藥材購于江西中醫藥大學第一附屬醫院中藥房，并經我校中藥資源學科組鄧可眾副教授鑒定且符合國家中藥臨床應用標準。水蛭用超微粉碎機粉碎，提取物以液氮快速凍融法制備[4]：取水蛭超微粉1.5g置15mL離心管內，加10mL無菌雙蒸水制成混懸液，再將離心管置液氮內5min，取出，立即放入37℃水浴中迅速融解，重復3次，再3000 r/min離心10min。取上清液過濾，濾液冷凍干燥18h即得水蛭凍干粉，-20℃保存備用，臨用前用培養基配成實驗所需濃度工作液，再經0.22μm無菌濾器正壓過濾除菌。……