健脾和胃顆粒提取工藝研究

★ 吳德強(qiáng)

(南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥劑科 江西 南昌 330006)

健脾和胃顆粒由黨參，麥冬，肉桂，厚樸，遠(yuǎn)志，五味子等十余味中藥材組成。具有疏肝理氣、健脾和胃功效，臨床常用于治療消化不良，不思飲食，腹脹腸鳴，大便溏瀉，脅肋脹痛，頭昏乏力等證，且取得有良好的臨床療效。本研究對乙醇濃度、溶劑量、提取時間、提取次數(shù)等因素進(jìn)行了考察。為了提高藥品質(zhì)量,確保藥物的安全有效,采用高效液相色譜法測定該品中橙皮苷的含量。

1 儀器與材料

健脾和胃顆粒(院內(nèi)制劑，批號：20131201，20131202，20131203)；橙皮苷對照品(中國藥品生物制品鑒定所，批號：781-9404)；高效液相色譜儀Prominence LC-20A(日本島津)。

2 實驗方法

2.1 含量測定

2.1.1 方法系統(tǒng)適用性 色譜柱：十八烷基鍵合硅膠柱，流動相：乙腈-水(32∶68)，流速：1.0mL/min。

2.1.2 對照品溶液制備 精稱稱取橙皮苷對照品適量，加甲醇制成0.526mg/mL的溶液即得。

2.1.3 供試品溶液制備 取樣品10g，研細(xì)，精密稱取1g，置索氏提取器中，加甲醇40mL加熱回流4h，濾過，轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿中濃縮至干。殘渣加水10mL使溶解，水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40mL，合并正丁醇液。再用氨試液充分洗滌2次，每次40mL，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水5mL使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂粒(內(nèi)徑1.5cm,長12cm)的色譜柱。用水50mL洗滌，棄去水液。再分別用40%、70%乙醇各40mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解，并轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 分別精密量取對照品溶液5，7.5，12.5，15，17.5，20μL溶液注入色譜儀，以對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，得回歸方程Y=2×106X-6.63×105(r=0.9998)，說明橙皮苷進(jìn)樣量在2.63～10.52μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.5 精密度考察 分別精密吸取對照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜峰面積，測定結(jié)果RSD分別0.73%，說明儀器精密度良好。

2.1.6 穩(wěn)定性考察 精密量取同一供試品溶液及對照品各10mL，分別于供試品溶液制備后的0,2,4,6,8,10h進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，供試品溶液和對照品溶液連續(xù)測定結(jié)果的RSD分別為1.12%、1.67%，表明樣品的穩(wěn)定性良好。

2.1.7 重復(fù)性考察 取樣品6份，每份10g，按供試品制備方法制成供試品溶液。取10μL,注入液相色譜儀中，結(jié)果表明，方法重復(fù)性試驗良好。

2.1.8 加樣回收率考察 取樣品6份，每份10g，分別研細(xì)，精密稱取1g，精密加入橙皮苷對照品適量，按樣品“含量測定”相下方法，測定，結(jié)果顯示：橙皮苷的回收率在95.03～101.55%之間，RSD為1.48%，符合有關(guān)規(guī)定。

2.2 正交試驗方法

2.2.1 因素水平確定 依據(jù)中藥提取經(jīng)驗,確定醇濃度(A)、溶劑量(B)、提取時間(C)、提取次數(shù)(D)、為提取效果的主要因素,每個因素選取3個水平。選用L9(34)正交表安排實驗,取浸膏的收膏率與橙皮苷含量二項為考察指標(biāo),并用直觀法和方差分析法分析，結(jié)果見表1～3。

表1 正交試驗因素水平表

分別以干浸膏的收膏率與橙皮苷含量為指標(biāo),對測定結(jié)果進(jìn)行方差分析,結(jié)果見表2和表3。

表2 正交實驗設(shè)計及結(jié)果分析表

表3 方差分析表

從干膏收率和橙皮苷含量結(jié)果分析表明, 各因素對橙皮苷含量的影響情況為A3>A2>A1,B1>B2>B3, C1>C2>C3, D2> D1>D3。方差分析結(jié)果表明,A、B,兩因素對干膏收率和橙皮苷含量均有顯著性的差異,故A3,B選B1,根據(jù)工業(yè)化大生產(chǎn)省時、降耗、降低成本角度考慮,故因素A選擇水平2，即A2；C、D因素?zé)o顯著的影響,因此C選C1,D選D2。因此,其優(yōu)選工藝條件應(yīng)為A2B1C1D2。

3 討論

本論文通過對健脾和胃顆粒制備工藝的研究，進(jìn)一步優(yōu)化了制備工藝的方法，利用高效液相色譜儀對原藥材提取液中有效成分的含量進(jìn)行測定，對各因素的水平選擇，依據(jù)已有的文獻(xiàn)資料報道，對處方中原藥材有效成分的提取溶劑，用量，提取時間等進(jìn)行優(yōu)選，通過方差分析及單因素分析對醇提工藝中各因素進(jìn)行優(yōu)化、篩選，確定最優(yōu)醇提工藝為：取黃芪、陳皮、厚樸、枳實、遠(yuǎn)志、五味子，加75%乙醇回流提取2次,第一次加入10倍量75%乙醇,加熱回流提取3h;第二次加8倍量75%乙醇,加熱回流提取2h。此方法提高了有效成分的轉(zhuǎn)移率，確保藥物的療效，為藥物在臨床上的應(yīng)用提供了保障。此外，方中肉桂、川芎所含成分為揮發(fā)性成分，工藝上應(yīng)采用揮發(fā)油提取，但由于揮發(fā)油提取工藝較成熟[3,4]，本研究對其提取工藝未作考察。同時將醇提后的藥物殘渣與肉桂川芎殘渣及白芍、麥冬等方中其他藥物共同水煎，并確定了最終水煎工藝。

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