加味五苓散對(duì)S180腹水型小鼠腹水量及外周血中TNF-α濃度的影響

★ 石躍進(jìn) 張寧蘇 高宏 殷東風(fēng)

(1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 沈陽(yáng) 110032；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 沈陽(yáng) 110032)

癌性腹腔積液繼發(fā)于不同惡性腫瘤的腹腔內(nèi)轉(zhuǎn)移，標(biāo)志著腫瘤已進(jìn)入晚期，此時(shí)患者免疫功能亦會(huì)下降[1]。一旦發(fā)生，患者的中位生存期大約僅為數(shù)周至數(shù)月，一年生存率低于10%[2]。臨床上通常采取利尿，腹腔穿刺放水，腹腔穿刺置管引流，腹腔內(nèi)注射給藥等方法來(lái)治療。中醫(yī)認(rèn)為臟腑功能失調(diào)影響津液運(yùn)行，毒聚水停是惡性腹水發(fā)病的基本病機(jī)，由此我院腫瘤科臨床中采用“加味五苓散”來(lái)治療惡性腹水。設(shè)計(jì)本實(shí)驗(yàn)旨在闡明加味五苓散對(duì)惡性腹水的作用機(jī)理，為臨床應(yīng)用提供一定的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及細(xì)胞株

昆明種小鼠50只，雌雄各半，體重(20±2)g，7周左右周齡，購(gòu)于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。S180細(xì)胞株由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品及制備

加味五苓散由茯苓20g、白術(shù)20g、豬苓15g、桂枝15g、澤瀉15g、葶藶子15g、土茯苓15g、龍葵15g、白花蛇舌草20g、半枝蓮20g、山慈菇15g、生薏苡仁30g、炙甘草10g構(gòu)成，將上述藥品用水煎煮，濃度濃縮為2.13g/mL，經(jīng)過(guò)無(wú)菌處理后放置在冰箱中備用。

注射用順鉑(凍干型)10mg/瓶，齊魯制藥有限公司生產(chǎn)。以上藥品均購(gòu)于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院。

1.3 S180腹水型小鼠模型建立

用一次性注射器抽取適量S180細(xì)胞株混懸液無(wú)菌條件下注射于10只健康昆明種小鼠腹腔內(nèi)，0.2mL/只，10天后S180腹水型小鼠模型制備成功，成功率100%，腹水生成，齊性好，未見(jiàn)血性腹水。無(wú)菌條件下取已制備好的10只S180腹水型小鼠腹水，制備成S180腹水瘤細(xì)胞懸液(瘤細(xì)胞成活率>95%，細(xì)胞濃度(1×106/mL)，無(wú)菌條件下注射到隨機(jī)抽取的32只健康小鼠腹腔，每鼠注入0.2mL，7天后32只S180腹水型小鼠全部造模成功，全鼠成活，腹水齊性好[3]。

1.4 動(dòng)物分組及給藥方法

1.4.1 動(dòng)物分組 剩余的8只小鼠為空白組，32只S180腹水型小鼠隨機(jī)分為4組，每組8只，分別為對(duì)照組、中藥組、西藥組、中藥加西藥組。共5組。

1.4.2 給藥方法 空白組、對(duì)照組、西藥組每日予以0.5mL生理鹽水灌胃，中藥組、中藥加西藥組每

日予以0.5mL加味五苓散灌胃；第1日和第7日，西藥組、中藥加西藥組予以配備好的順鉑注射液(10mg順鉑溶解于17.4mL生理鹽水)0.2mL腹腔內(nèi)注射，空白組、對(duì)照組、中藥組予以生理鹽水0.2mL腹腔內(nèi)注射。實(shí)驗(yàn)周期14天。

1.5 指標(biāo)檢測(cè)

1.5.1 小鼠腹水量測(cè)定 各組用藥14天后，次日麻醉小鼠，無(wú)菌條件下抽取腹水，記錄腹水量。

1.5.2 小鼠外周血中TNF-α的濃度測(cè)定 各組用藥14天后，次日麻醉小鼠，無(wú)菌條件下取出小鼠血，采用ELISA法(詳見(jiàn)說(shuō)明書)測(cè)定血液中TNF-α濃度。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法

2 結(jié)果

2.1 各腹水型小組腹水量測(cè)量結(jié)果

中藥組、西藥組、中藥加西藥組與對(duì)照組比較腹水量減少有意義(P<0.05)；中藥加西藥組與中藥組、西藥組比較腹水量減少均有意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 各腹水型小組腹水量測(cè)量結(jié)果

2.2 各組小鼠外周血中TNF-α的濃度測(cè)定結(jié)果

中藥組、中藥在西藥組與對(duì)照組比較外周血中TNF-α濃度升高有意義(P<0.05)；西藥組與對(duì)照組比較外周血中TNF-α濃度升高，但無(wú)顯著差異(P>0.05)；中藥加西藥組與單用西藥組能使小鼠外周血中TNF-α濃度升高有意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 各組小鼠外周血中TNF-α水平測(cè)定結(jié)果

3 討論

五苓散首見(jiàn)于《傷寒雜病論》，張仲景用其治療太陽(yáng)病表邪不解，水蓄為患的病癥。清代醫(yī)家汪昂在其所著《醫(yī)方集解·利濕之劑》曰：“經(jīng)曰，淡味滲泄為陽(yáng)，二苓甘淡入肺，而通膀胱為君，咸味涌泄為陰，澤瀉甘咸入腎膀胱，同利水道為臣，益水所以制水，故以白術(shù)苦溫健脾祛濕為佐，膀胱者津液藏焉，氣化則能出矣，故以肉桂辛熱為使，熱因熱用，引入膀胱以化其氣，使?jié)駸嶂敖詮男∷鲆病盵4]。本實(shí)驗(yàn)所用加味五苓散是由五苓散加抗癌以及利水滲濕之品組成，功在化氣利水育陰，解毒抗癌消積。

TNF-α可通過(guò)直接細(xì)胞毒作用、抗腫瘤血管生成以及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡達(dá)到殺傷腫瘤細(xì)胞的作用[5]。TNF-α為可溶性細(xì)胞因子，是迄今所發(fā)現(xiàn)的直接殺傷腫瘤作用最強(qiáng)的一種生物學(xué)活性因子[6]。

從本研究中可以得出加味五苓散提高S180小鼠外周血中TNF-α的濃度顯著，腹水量減少明顯；使用順鉑時(shí)聯(lián)合使用加味五苓散比單用順鉑的S180小鼠外周血中TNF-α的濃度升高及腹水量減少顯著。單獨(dú)使用順鉑時(shí)TNF-α的濃度升高不顯著，但是腹水量減少明顯，可能與順鉑副作用免疫抑制或者樣本數(shù)量不足等有關(guān)，需要進(jìn)一步研究。

加味五苓散用于癌性腹水患者可以通過(guò)升高其外周血中TNF-α的濃度，抑制腹水生長(zhǎng)，達(dá)到控制腹水，改善患者生存質(zhì)量目的，在臨床中值得推廣使用。

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