柴芍安神解郁顆粒制備工藝研究*

★ 李智勇 王洛臨 施之琪 徐文杰 陳雪婷 陳朋 曾文雪*

(1.廣東省中醫(yī)研究所 廣州 510095；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 廣州 510405；3.江西中醫(yī)藥大學(xué) 南昌 330006)

柴芍安神解郁顆粒是廣東省第二中醫(yī)院臨床應(yīng)用十余年、用于治療中風(fēng)后抑郁癥的經(jīng)驗(yàn)方劑，主要由醋柴胡、白芍、香附、石菖蒲、郁金、酸棗仁等組成，具有疏肝理氣、化痰祛痰、安神定志之功效。本研究對其提取工藝和成型工藝進(jìn)行研究，以保證制劑質(zhì)量和臨床療效。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200高效液相色譜儀(美國)，Mettler XS205 D型分析天平(瑞士)，JJ 300型精密電子天平(常熟雙杰測試儀器廠)，TC-15套式恒溫器(海寧市新華醫(yī)療器械廠)，DFG-9070A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，KQ5200D型數(shù)控超聲波清洗器(昆明市超聲儀器有限公司)，GK-70型干式造粒機(jī)(江蘇瑰寶集團(tuán)有限公司)。

1.2 試藥

芍藥苷對照品(110736-201136購于中國食品藥品檢定研究院，供含量測定)，所用藥材均購自廣州中芝源中藥飲片有限公司，經(jīng)過廣東省中藥研究所王洛臨主任中藥師鑒定，均符合中國藥典2010年版一部各項(xiàng)下規(guī)定。乙腈為色譜純(Merck)，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 揮發(fā)油提取工藝的研究

處方中香附、石菖蒲、郁金均含揮發(fā)油，具有多種藥理作用[1-3],以揮發(fā)油體積和收油率為評價(jià)指標(biāo)，采用單因素篩選法浸泡時(shí)間、加水量、蒸餾時(shí)間等對揮發(fā)油提取的影響[4,5]。

2.1.1 浸泡時(shí)間對收油率的影響

取香附、石菖蒲、郁金飲片共三份，每份150g，加入藥材量8倍的水，分別浸泡0，1，2h后，蒸餾提取8h，結(jié)果分別得揮發(fā)油0.97，0.99，0.99mL。表明三者之間無差異，可選擇浸泡時(shí)間為1h。

2.1.2 加水量對收油率的影響

取香附、石菖蒲、郁金飲片共四份，每份150g，分別加入4、6、8、10倍水，浸泡1h，提取揮發(fā)油8h，結(jié)果分別得揮發(fā)油0.88，0.92，0.98，0.99mL。表明加8倍與10倍量水的揮發(fā)油得率無明顯差異，可選擇加水量為8倍。

2.1.3 提取時(shí)間對收油率的影響

取香附、石菖蒲、郁金飲片共三份，每份150g，加入8倍水，浸泡1h，加熱蒸餾提取8h，記錄不同時(shí)間的揮發(fā)油體積，結(jié)果提取8h后，揮發(fā)油體積不再增加，在提取5h時(shí)，平均揮發(fā)油提取量達(dá)0.97mL(約為總收油量的97%)，為節(jié)約能源，可將提取時(shí)間定為5h。

2.1.4 揮發(fā)油提取工藝驗(yàn)證

根據(jù)確定的揮發(fā)油提取工藝進(jìn)行3批驗(yàn)證試驗(yàn)，即加8倍量水，浸泡1h，蒸餾提取5h，結(jié)果揮發(fā)油收油率平均達(dá)0.66%，RSD為0.87%，說明揮發(fā)油提取工藝基本穩(wěn)定可行。

2.2 水提工藝的優(yōu)選

2.2.1 正交提取實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)處方中各藥材的有效成分性質(zhì)，針對提取次數(shù)、提取時(shí)間，加水倍量等三個(gè)主要影響因素，以方中白芍的主要有效成分芍藥苷的提取率(權(quán)重系數(shù)定為0.7)和干膏得率(權(quán)重系數(shù)定為0.3)為指標(biāo)綜合評分評價(jià)，選用L9(34)正交試驗(yàn)，篩選最佳水提工藝條件[6]。因素水平見表1。

表1 因素水平表

2.2.2 樣品的制備

按處方稱取白芍(處方中白芍藥材量為18g)等飲片與相同處方量的香附、石菖蒲、郁金提取揮發(fā)油后的藥渣共9份，按正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表所列各因素水平實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行提取，濾過，合并提取揮發(fā)油后的水溶液，濃縮至一定體積，備用。

2.2.3 考察指標(biāo)的選擇

2.2.3.1 干膏得率的測定 精密吸取各樣品20mL，置己恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，照《中國藥典》2010年版一部附錄IXG干燥失重測定法測定，計(jì)算干膏得率。

2.2.3.2 芍藥苷的含量測定[7]色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-0.1%磷酸溶液(14：86)為流動(dòng)相；檢測波長為230nm，流速：1mL/min。

對照品溶液的配制 精密稱取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含50.76μg的溶液，搖勻，即得。

供試品溶液的制備 取提取液適量(相當(dāng)于含白芍0.1g)，精密稱定，置50mL量瓶中，加稀乙醇35mL，超聲處理(功率240W，頻率45kHz)30分鐘，取出，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密吸取芍藥苷對照品溶液2、4、8、10、12μL進(jìn)樣，測定峰面積，以芍藥苷的峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，以進(jìn)樣量(ng)為橫坐標(biāo)(X)，回歸得直線方程：Y=1.2512X+19.183；r=0.9999。結(jié)果顯示，芍藥苷在進(jìn)樣量101.52-609.12ng范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.2.4 實(shí)驗(yàn)方案及結(jié)果

見表2。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果表

綜合評分=芍藥苷含量/最大芍藥苷含量×0.7×100%+得膏率/最大得膏率×0.3×100%

對正交試驗(yàn)所得結(jié)果作直觀分析和方差分析，以判斷各因素對提取效果的影響程度，篩選出最優(yōu)的提取條件。方差分析結(jié)果見表3。

表3 方差分析

由直觀分析可知，影響提取效果的順序?yàn)椋禾崛〈螖?shù)(A)﹥提取時(shí)間(B)﹥加水倍量(C)，最佳工藝為：A3B3C2。方差分析結(jié)果表明，因素A對提取結(jié)果有顯著影響(P<0.05)，其余二個(gè)因素對結(jié)果均無顯著影響，綜合考慮生產(chǎn)效率和節(jié)能等各方面因素，確定的優(yōu)選工藝為A2B3C1，即每次加水8倍量提取2次，每次1.5小時(shí)。

2.2.5 水提取工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

按處方比例，稱取藥材3份，每份480g，照確定的工藝提取，濾過，合并，濃縮，轉(zhuǎn)移至1000mL量瓶中，加水至刻度，分別測定芍藥苷含量和干膏得率。結(jié)果3次試驗(yàn)的芍藥苷提取率分別為73.19%，75.42%，77.35%，平均提取率為75.32%；干膏率分別為19.85%，20.73%，20.10%，平均干膏得率為20.22%。說明水提工藝基本合理穩(wěn)定。

2.3 濃縮、干燥工藝研究

2.3.1 濃縮工藝考察

取處方藥材960g，依法提取，合并提取液，混勻，平均分為四份，常壓濃縮和減壓濃縮各2份，分別濃縮至相對密度約1.15(60℃)，分別測定芍藥保留率。結(jié)果顯示，芍藥苷保留率分別為91.87%和93.07%，表明二者之間無明顯差異，可選擇常壓工藝進(jìn)行濃縮。

2.3.2 干燥工藝的考察

真空干燥和噴霧干燥工藝對比結(jié)果顯示，噴霧干燥工藝所得浸膏中芍藥苷轉(zhuǎn)移率96.07%略高于真空干燥工藝92.73%，但無明顯差異，可選擇噴霧干燥法進(jìn)行干燥。

2.3.3 噴霧干燥工藝參數(shù)優(yōu)選

選定入塔風(fēng)溫為180℃和出風(fēng)溫度為80℃，以噴干粉外觀、粘壁情況等為考察指標(biāo)，分別考察清膏不同相對密度1.05，1.10，1.15，1.20對噴霧干燥的影響。結(jié)果顯示，清膏相對密度為1.10-1.20(60℃)時(shí)，噴霧干燥均可以順利進(jìn)行，粘壁少，所得粉末外觀良好，選定噴霧干燥工藝為：清膏的相對密度為1.10-1.20，進(jìn)風(fēng)溫度180℃，出風(fēng)溫度80℃。

2.4 制劑成型工藝研究

2.4.1 處方中浸膏粉與輔料配比的確定

根據(jù)日服生藥材劑量為58g，總出膏率平均為20.22%，得浸膏11.73g，按日服兩次，每次5.86g浸膏粉，擬定每袋裝8g，每袋輔料用量為2.14g，即浸膏粉與輔料配比約為10∶3.65。

2.4.2 輔料種類篩選[8]

中藥顆粒劑常用輔料有淀粉、乳糖、麥芽糊精、微晶纖維素等。試驗(yàn)中以顆粒成品率、溶化性、吸濕率為考查指標(biāo)，對輔料的種類進(jìn)行選擇。

2.4.2.1 溶化性 取顆粒10g加熱水至200mL，攪拌5分鐘，觀察顆粒溶化情況。

2.4.2.2 吸濕率測定 稱取樣品顆粒約2g，置干燥至恒重稱量瓶中，精密稱重，置入25℃盛有氯化鈉過飽和溶液的玻璃干燥器中，相對濕度為75%，放置48h，精密稱量，計(jì)算吸濕百分率：

2.4.2.3 樣品制備 稱取柴芍安神解郁浸膏粉5份，每份100g，分別加入36.5g藥用淀粉、乳糖、麥芽糊精、微晶纖維素和不加輔料，以95%乙醇制粒，干燥，整粒，分別測定顆粒成品率、吸濕率并觀察溶化性，結(jié)果見表4。

表4 輔料篩選結(jié)果

結(jié)果顯示，加入藥用淀粉、乳糖、麥芽糊精、微晶纖維素均可良好改善所制顆粒的溶化性、成型性和吸濕性較低，尤以乳糖、麥芽糊精為佳。綜合考慮生產(chǎn)成本等因素，選擇麥芽糊精為稀釋劑。

2.4.3 矯味劑用量考察

由于柴芍安神解郁顆粒的口味苦澀，需加入適當(dāng)矯味劑，以增加患者用藥的順從性。實(shí)驗(yàn)中分別向顆粒中加入不同量(0.3%-1.5%)的甜菊素，考察其口感變化，選擇矯味劑的最適用量。結(jié)果加入甜菊素至為制成顆粒量的0.5%時(shí)，口感良好，并且對其外觀無影響。

2.4.4 干壓制粒工藝條件的確定[9]

分別稱取藥粉、麥芽糊精和甜菊糖，按照上述實(shí)驗(yàn)比例混勻，分別烘干或加入適量95%乙醇，混勻，測定物料的含水量，再干法制粒，控制壓輪壓力為0.3-0.35Mpa，側(cè)封壓力為0.05-0.06Mpa，裝12目篩整粒，稱定一次干壓制粒制得在12目篩和60目篩之間的顆粒，計(jì)算顆粒成型率，并觀察顆粒的外觀，結(jié)果見表5。

表5 不同含水量藥粉干壓制粒結(jié)果

由上述結(jié)果可以看出，隨著藥粉含水量的增加，顆粒的成型率也隨之升高，而且當(dāng)藥粉含水量超過了6%時(shí)，顆粒外觀出現(xiàn)了少量花斑，結(jié)合顆粒的一次干壓顆粒成型率，故干壓制粒藥粉含水量應(yīng)控制在4%-6%之間為宜。

2.4.5 臨界相對濕度(CHR)的測定

配制系列鹽飽和溶液，分別置于玻璃干燥器中，恒溫25℃放置48h，使其內(nèi)部濕度平衡構(gòu)成不同相對濕度(RH)的環(huán)境，將己干燥恒重稱量瓶中放入約3g柴芍安神解郁顆粒，平鋪于瓶底，厚約2mm，稱重，并干燥至恒重，精密稱定，打開稱量瓶蓋，放入上述不同的RH干燥器中，吸濕至恒重，精密稱重計(jì)算吸濕率。以吸濕百分率數(shù)據(jù)為縱坐標(biāo)，RH數(shù)據(jù)為橫坐標(biāo)作圖，計(jì)算CHR。結(jié)果顯示，柴芍安神解郁顆粒CRH值約為55%，提示顆粒吸濕性較強(qiáng),對制備環(huán)境的濕度控制和包材選擇提出了較高的要求。結(jié)果如表6。

表6 柴芍安神解郁顆粒的臨界相對濕度的測定結(jié)果

3 小結(jié)與討論

3.1 實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，石菖蒲揮發(fā)油的比重比水大，但香附、郁金的揮發(fā)油的比重比水小，而石菖蒲、香附、郁金的混合揮發(fā)油比重較水小，在提取過程中產(chǎn)生的混合揮發(fā)油會緩緩上浮于上層。

根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，柴芍安神解郁顆粒的提取工藝可確定為香附、石菖蒲、郁金等提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集，藥渣與與其余藥材加8倍量水提取2次，每次1.5小時(shí)，驗(yàn)證結(jié)果顯示，該工藝方法簡單、穩(wěn)定，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

3.2 柴芍安神解郁顆粒采用噴霧干燥后干壓制粒的工藝中，對比實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，選用麥芽糊精為輔料，藥粉顆粒的含水率控制在4%-6%，制備的顆粒成型率高、溶化性良好、吸濕率低，可以滿足工業(yè)化生產(chǎn)的需求。

[1]曹玫,張洪,張曉燕,等.香附的藥理活性作用研究進(jìn)展[J].藥物流行病學(xué)雜志,2010,19(2)：111-113.

[2]陳樂真,屠凌嵐.石菖蒲的化學(xué)成分與藥理研究進(jìn)展[J].浙江實(shí)用醫(yī)學(xué),2008,13(3):222-225.

[3]劉華鋼,劉俊英,賴茂祥,等.郁金化學(xué)成分及藥理作用的研究進(jìn)展[J].廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2008,11(2):81-83.

[4]孫兆姝,周凌,康廷國.二妙膠囊中蒼術(shù)揮發(fā)油提取及包合工藝研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2009,27(4):876-877.

[5]林國鋇,謝燕,李國文,等.地黃益智顆粒中揮發(fā)油提取及包合工藝[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,15(15):32-35.

[6]鮑玲玲,秦海軍,田軍,等.紫芩止咳顆粒提取工藝研究[J].安徽醫(yī)藥,2010,14(4):389-391.

[7]李智勇,張建軍,曾文雪,等.香芍胃舒康顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2011,23(2):56-58.

[8]宋金春,譚娟,曾俊芬.柴葛消熱顆粒成型工藝的研究[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2009,15(5):28-29.

[9]賈永艷,田效志,祝俠麗,等.產(chǎn)婦康顆粒成型工藝研究[J].中醫(yī)研究,2012,25(10):67-69.