旋覆花配方顆粒質量標準研究

★ 徐東婷 閆炳雄 韓玉惠 董金香

(1.長春中醫藥大學 長春 130117；2.吉林四平巨能藥業 四平 136000)

旋覆花為菊科植物旋覆花InulajaponicaThunb.或歐亞旋覆花I.britannicaL.的干燥頭狀花序,味苦,辛、咸,性微溫,歸肺、脾、胃、大腸經。具有降氣、消痰、行水、止嘔等功效,中醫臨床多用于風寒咳嗽、痰飲蓄結、胸膈痞滿、喘咳痰多、嘔吐噫氣、心下痞硬等癥[1]。中藥配方顆粒[2]又稱免煎中藥，主要通過將單味中藥進行加工提取其有效成分，制成中藥飲片新劑型；臨床應用及相關藥理實驗研究表明，單味中藥配方顆粒和傳統的水煎劑具有基本相同的療效和藥理作用，且中藥配方顆粒具有體積小，易于攜帶保存，質量穩定等優點[3]。旋覆花配方顆粒是旋覆花飲片經水提、濃縮、干燥、制粒等工序制成的單味中藥配方顆粒劑。據報道[4-5],綠原酸為旋覆花抗菌消炎作用的酚酸類活性成分。本實驗采用HPLC法[1-4,6]測定制劑中綠原酸含量,并參考2010年版《中國藥典》鑒別項下內容,為旋覆花配方顆粒的質量控制提供科學依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1260高效液相色譜儀；色譜柱：Agilent TC-C18(4.6mm×250mm,5μm)；超聲儀；電熱鼓風干燥箱；數碼照相機；硅膠G板。

1.2 試劑與試藥 綠原酸對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號：110753-200413，供含量測定用)；旋覆花對照藥材(中國藥品生物制品檢定所,批號：121125-200402，供鑒別用)；旋覆花飲片(長春中醫藥大學-吉林敖東藥業集團現代中藥配方顆粒研究聯合實驗室提供，批號：201306)，飲片經長春中醫藥大學鑒定教研室姜大成教授鑒定為真品。乙腈、甲醇為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2 旋覆花配方顆粒的薄層色譜鑒別

按照《中國藥典》2010年版一部旋覆花飲片【鑒別】項下規定，取旋覆花對照藥材及飲片粉末2g，置具塞錐形瓶中，加石油醚(60-90℃)30mL，密塞，冷浸1小時，加熱回流30分鐘，放冷，濾過，濾液濃縮至近干，殘渣加石油醚(60-90℃)2mL使溶解，取上清液作為對照品溶液。另取三批旋覆花配方顆粒各2g，同法制成供試品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60-90℃)-乙酸乙酯(5∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。結果見圖1所示。圖1表明，配方顆粒與對照藥材顯示相同的斑點。

3 旋覆花配方顆粒檢查

3.1 水分 按照《中國藥典》2010年版一部附錄IX H[7]水分測定項中烘干法測定。取同一批旋覆花配方顆粒，平行3份，測得平均含水量為4.56%(小于6.0%)，符合要求。

圖1 旋覆花對照藥材與配方顆粒TLC圖譜

3.2 溶化性 取旋覆花配方顆粒10g，加熱水200mL，攪拌5分鐘，觀察到顆粒全部溶化，符合要求。

3.3 粒度 按照《中國藥典》2010年版一部附錄XI B[7]粒度測定第二法進行測定，結果不能通過一號篩和能通過五號篩的顆粒為9.7g(不超過15%)。

4 綠原酸含量測定

4.1 色譜條件[7]Agilent TC-C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相為乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)；柱溫為室溫；體積流量1.0mL/min；檢測波長327nm；進樣量10vμL。陰性對照品、綠原酸對照品和供試品的HPLC圖譜見圖2所示。

A

B

C

4.2 對照品溶液的制備 取綠原酸對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成，每1mL含綠原酸0.216mg的對照品溶液。即得綠原酸對照品母液。

精密吸取綠原酸對照品母液適量，配制成8.64，17.28，25.92，34.56，43.20，51.84g/mL的溶液。

4.3 供試品溶液的制備 取本品粉末約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘(150W，40kHz)，取出放冷后，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液5mL，置25mL棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得。重復上述操作，即得供試品平行組。

4.4 線性關系考察 分別吸取上述各質量濃度對照品溶液10μ，注入液相色譜儀進行分析，以綠原酸進樣量(μg)為橫坐標，峰面積值為縱坐標，進行線性回歸，回歸方程：Y=2829X+3.2，r=1，表明綠原酸在0.0864-0.5184g范圍內與其峰面積呈良好的線性關系。

4.5 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10μL，注入液相色譜儀，連續進樣6次，測定峰面積，RSD為0.06%，表明儀器精密度良好。

4.6 重復性試驗 取本品同一批次樣品6份，按4.3項下方法操作，分別按上述色譜條件方法測定綠原酸，RSD為2.39%，結果表明該方法重復性良好。

4.7 穩定性試驗 精密吸取上述供試品溶液10μ，分別在0，4，8，10，12，24h進樣，按上述色譜條件測定，RSD為0.49%，色譜峰面積在24h內基本無變化，說明穩定性較好。

4.8 回收率試驗 精密稱定本品0.5g，平行6份，按4.3項下方法操作制備供試液，然后向供試液中精密加入一定量綠原酸對照品，混勻后測定綠原酸含量，結果平均回收率為102.71%，RSD為2.44%，結果見表1所示。

表1 回收率測定試驗結果(n=6)

4.9 樣品測定 分別精密稱定不同批號的旋覆花配方顆粒約1g,按4.3項下方法制備供試品，按上述色譜條件測出峰面積，采用外標法計算綠原酸的含有量。結果見表2所示。

表2 三批樣品中綠原酸含量測定結果

5 討論

將旋覆花制備成顆粒劑能夠保留原藥材的性味、有效成分和功能。本實驗通過TLC法進行鑒別，然后對顆粒劑各項指標進行檢查，最后檢測有效成分的含量，建立起一套科學、標準的檢測方法。

TLC實驗是參照2010年版中國藥典的TLC鑒別方法進行的，實驗中還進行了更換不同溶劑(石油醚、乙醚、氯仿)和提取方法(冷浸、回流)，進行薄層色譜分析[8]結果表明以石油醚(60-90℃)作溶劑的薄層色譜斑點較乙醚和氯仿好,色譜斑點分離清楚。加熱回流法提取完全，而且縮短時間，便于快速分析。并且對薄層色譜條件的耐用性進行了考察，分別在高溫、低溫、高濕、低濕條件下展開，以明確該薄層色譜條件的耐用性。結果顯示，薄層色譜條件耐用性良好。

HPLC實驗是參照2010年版中國藥典金銀花項下方法進行的，本實驗考察了不同提取方法(熱回流、超聲法)不同提取時間(20、30、40min),結果表明，超聲處理30min中提取效率最高。

本實驗采用水提工藝，以有效成分綠原酸為指標評價旋覆花配方顆粒，結果顯示，該方法科學準確，具有良好的可控性，因此可以作為旋覆花配方顆粒的質量可控制標準。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].2010年版.北京:中國醫藥科技出版社,2010:305.

[2]吳鏑，趙忠慧．中藥配方顆粒的應用與研究[J].中國醫藥導報，2011，(25)：10-11.

[3]諸明娜．免煎中藥配方顆粒與傳統中藥飲片的比較[J].湖北中醫雜志，2004，26(11)：55.

[4]耿紅梅.高效液相色譜法測定歐亞旋覆花中綠原酸的含量[J].時珍國醫國藥,2009,20(1):201-202.

[5]耿紅梅.歐亞旋覆花化學成分的研究[J].時珍國醫國藥,2008,19(10):2 432-2 433.

[6]賈法強,尹寧寧,林林.HPLC法測定忍冬藤中綠原酸的含量[J].齊魯藥學,2007,26(1):26-27.

[7]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2010年版一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010:52,65,205.

[8]張新民,吳銀生.旋覆花的薄層色譜鑒別[J].蘇州醫學院學報，1999，19(8)：901.