趨化因子CXCL16在肝衰竭患者血清中的表達及意義

封麗琴 趙彩彥

·論著·

趨化因子CXCL16在肝衰竭患者血清中的表達及意義

封麗琴 趙彩彥

目的探討趨化因子CXCL16在肝衰竭患者血清中的表達及臨床意義。方法采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測肝衰竭患者(n=19)及健康對照組(n=16)血清CXCL16的濃度。結果肝衰竭組和健康對照組血清CXCL16濃度比較，差異有統計學意義(t=3.446，P<0.01)。結論趨化因子CXCLl6可能參與了肝衰竭(LF)患者肝臟炎癥損傷，可能是導致肝衰竭發病的發病機制之一。

趨化因子；CXCLl6；肝衰竭(LF)；酶聯免疫吸附法

隨著社會的發展，感染性疾病及腫瘤是威脅世界人類生命健康最常見的兩種疾病，而乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是常見感染性疾病之一，該疾病常可導致急性病毒性肝炎、慢性病毒性肝炎、肝硬化、肝衰竭及肝癌甚至死亡。據世界衛生組織(WHO)統計乙型肝炎病毒感染是世界上造成人類死亡的第9大原因，嚴重的危害人們的生命。而我國更是乙型肝炎病毒感染的高發地區之一，據不完全統計我國成年人乙肝病毒感染率約60%，大約25%呈現急性病毒性肝炎，其中大多數感染者能清除乙肝病毒，有大約10%乙肝病毒感染者可發展成慢性肝炎，并可反復發作，可發展成肝硬化甚至癌變[1]。有少數病毒感染者可發展成重型肝炎即肝衰竭，病死率極高。近些年來，醫學科學有了很大的進步，并在兒童期進行了乙型病毒的計劃免疫，但仍有許多急性肝炎感染患者轉為慢性乙型肝炎、慢性遷延性肝炎甚至肝衰竭導致死亡。國內外有許多研究機構對其有深入研究，但其發病機制仍尚未完全明了。近年來國內外研究發現趨化因子在肝衰竭中發揮了重要作用。其中趨化因子CXCL16在患者血清中的表達變化規律與肝衰竭的關系國內研究尚少報道。本實驗通過收集肝衰竭患者血清檢測患者CXCL16的變化，研究CXCL16參與肝衰竭發病的可能機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2013年1月至2014年1月石家莊市第五醫院肝病科住院的19例肝衰竭患者。其中，男16例，女3例；年齡31～70歲。患者均有乙型肝炎病史，有Ⅱ度以上肝性腦病，乏力、皮膚鞏膜黃染，膽紅素明顯升高。16例正常健康者(對照組)，來自門診部體檢中心的健康體檢者。其中男12例，女4例；年齡36～65歲。2組間一般資料有可比性。

1.2 入選與排除標準

1.2.1 入選標準：①肝衰竭患者符合中華醫學會感染病學分會肝衰竭與人工肝學組中華醫學會肝病學分會重型肝病共同制定的《肝學組肝衰竭診治指南(2012年版)》。②年齡31～71歲。

1.2.2 排除標準：通過病史采集、腹部B超或腹部CT排除酒精肝、脂肪肝及自身免疫性肝炎等。排除甲、丙、丁、戊、庚型病毒及酒精肝、脂肪肝、自身免疫性肝炎、先天性代謝疾病等引起的肝炎；并排除患有艾滋病、結核等其他感染性疾病;并排除類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡等免疫性疾病。研究經醫院倫理委員會批準，患者外周血留取均征得患者同意，并簽署書面知情同意書。

1.3 主要儀器、試劑及實驗過程 美國全自動酶標分析儀檢測趨化因子CXCL16，趨化因子CXCLl6 ELISA檢測試劑盒。盒購自武漢優爾生科技股份有限公司，生產商為美國Cloud-Clone 公司，操作過程按試劑盒說明進行。(1)在波長為450 nm的全自動酶標儀上讀出每孔標準品、待測血清的OD值，因標準品是雙孔，計算每種標準品的平均OD值。(2)采用深圳晶美生物技術有限公司提供的Curve Exper 1．3軟件，以標準品平均OD值為縱坐標，以標準品濃度為橫坐標繪制標準品曲線，然后根據各樣品孔的OD值計算相應的濃度范圍。(3) 按照下列公式計算出CXCL16的濃度：Quadratic Fit:y=a+bx+cx^2，Coefficient Data:a=-0.023 b=2.636 c=0.127。

2 結果

2.1 肝衰竭組和對照組的血清CXCL16濃度分別為(3.71±2.23)ng/ml，(1.21±0.59)ng/ml，差異有統計學意義(t=3.446，P<0.01)。

2.2 趨化因子CXCL16的標準曲線 見圖1。

圖1 1趨化因子CXCLl6的標準曲線

3 討論

我國是乙型肝炎的高發地區，隨著乙型肝炎疫苗的廣泛使用及生活水平的提高，乙型病毒性肝炎的發病報告率持續下降，在一般人群乙肝表面抗原陽性流行率已有9.75%下降為7.18%。但在法定傳染病報告中，病毒性肝炎的發病率與病死率仍均占首位。2010年全國報告乙肝發病人數為106萬。據全國統計調查，我國一般人群中估計約9 300萬國人為慢性乙肝病毒感染，占世界該病感染者的1/3左右。其中目前我國現有慢性病毒性肝炎患者約2 700萬人，仍然嚴重的危害人們的健康。

在臨床上乙型肝炎病毒感染包括隱形感染到急性病毒性肝炎，有時甚至發生急性重癥肝炎即肝衰竭。乙型病毒性肝炎的發病機制非常的復雜，到目前為止其發病機制仍未完全明了，有待繼續研究。目前大多認為免疫病理損傷機制在其中起著重要作用，肝細胞病變主要取決于患者機體的免疫應答，尤其是細胞免疫應答。各種原因導致的乙型肝炎病毒復制增加均可啟動患者機體對病毒的免疫應答反應。患者機體的免疫應答不同，可導致臨床表現各異。當人的機體處于免疫耐受時，不發生免疫應答，成為無癥狀的攜帶者，而當人的機體免疫功能正常時，則多可能表現為急性病毒性肝炎的發生，當機體免疫功能低下、不完全免疫耐受、自身免疫反應產生、乙型肝炎病毒基因突變逃逸免疫清除等情況下，均可導致慢性肝炎的發生；當患者機體處于超敏反應，大量的抗原-抗體復合物產生并激活補體系統并在腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)、白細胞介素-1,6(inter-leukin-1,6)、內毒素等參與下，可導致大片肝細胞壞死，發生重型肝炎即肝衰竭的出現。

有學者研究認為，炎性細胞表面趨化因子(CK)與炎性細胞表面相應趨化因子受體相互作用在其中共同發揮了關鍵作用[2,3]。趨化因子也稱趨化激素、趨化素或化學激素，是一類可刺激白細胞趨化性的小分子的細胞因子，由白細胞分泌，對中性粒細胞、單核細胞、淋巴細胞和嗜酸性粒細胞等等具有很強大的趨化作用和激活作用。在機體的抗感染中發揮重要作用。該因子能吸引免疫細胞到免疫應答部位，共同參與機體免疫調節和免疫病理反應。它們共同機構特征包括分子量小，多為小于100個氨基酸的小分子糖蛋白，有4個位置保守的半胱氨酸殘基以保證其三級結構，根據其氨基末端2個半胱氨酸殘基是直接相連還是被氨基酸分開，分為4群，分別為CXC亞族(α亞族)、CC亞族(β亞族)、C亞族(γ亞族)和CX3C亞族(δ亞族)4個亞家族 。趨化因子CXCL16屬于CXC趨化因子家族，是由國外學者發現的一個趨化因子[4，5]。他們根據該類趨化因子氨基端含CXC模序的特點，將其劃歸為CXC亞家族，命名它為CXCL16。趨化因子CXCL16與乙型病毒性肝炎的關系的基礎研究與臨床研究近幾年國內外研究較多。Dong等[6]早在2002年分析鼠暴發性肝炎模型肝組織中細胞因子、趨化因子變化時就發現趨化因子CXCL16的表達異常。學者Xu等[7]在2005年在細菌內毒素引起大鼠暴發性肝炎模型的發病過程中也發現CXCL16在將T淋巴細胞遷移到肝臟過程中發揮了重要作用。同時發現在對實驗大鼠模型應用抗-CXCL16單克隆抗體后可明顯降低實驗大鼠模型轉氨酶、并下調血清腫瘤壞死因子-α、細胞凋亡因子FasL的表達，應用單克隆抗體有效的減輕肝壞死，明顯降低了發生暴發性肝炎大鼠動物模型的死亡率。國內學者徐煥賓等[8]研究發現，趨化因子CXCL16在肝損傷組織與肝臟病理損傷程度有關。在小鼠免疫性肝損傷動物模型中，將趨化因子CXCL16抗體用于體內阻斷CXCL16生物活性，肝臟的損傷得到了很明顯的改善，且降低了丙氨酸氨基轉移酶的水平，明顯延長了小鼠的存活率，提示CXCL16在小鼠免疫性肝損傷中起到了重要作用。該研究者在應用特異抗CXCL16抗體阻斷可以明顯降低相應的腫瘤壞死-α和凋亡因子Fas-FasL的表達，從而改善肝組織的病理損傷的發生[9]。國內楊勇等[10]2008年研究發現，急性乙型肝炎病例組及慢性乙型肝炎病例組血清CXCL16濃度水平均高于正常健康對照組，血清CXCL16濃度與乙型肝炎的病情相關，隨著乙型肝炎病情加重而加重。

我們的試驗研究通過采用酶聯免疫法(ELISA法)檢測了肝衰竭病例組及正常健康對照組外周血清CXCL16濃度發現，肝衰竭組和對照組的血清CXCL16濃度差異有統計學意義(t=3.446，P<0.01)，提示趨化因子CXCL16或許參與了將免疫細胞募集到發生炎癥的肝臟，這與國內外學者對趨化因子CXCL16的研究結果符合。在肝衰竭即重癥肝炎患者發病過程中，CXCL16同樣也可能發揮了重要作用。

綜上所述，在肝衰竭發病過程中，趨化因子CXCL16可能參與了肝衰竭的炎癥損傷過程，可能是肝衰竭發病機制之一，但其詳細發病機制有待進一步研究探索。

1 黃文林主編.分子病毒學.第1版.北京：人民衛生出版社，2002.178-180.

2 李玉林主編.病理學.第6版，北京：人民衛生出版社，2003.112-113.

3 Paul WE.Fundamental Immunology.Fourth Edition，Philadel-phia：Lippincott Williams&Wikkins Inc，2003，1160-1161.

4 Matloubin M，David A，Engel S,et al.A transmembrane CXC Chemokine is a ligand for HⅣ-coreceptor BONZ0．Nat Immunol，2000，1：298-304.

5 Wilbanks A，Zondlo S，Murphy K，et al.Expression cLoning of the STRL33/BONZ0/TYMSTR ligand reve-als elements of CC．CXC and CX3C chemokines.J Immunol，2001，166：5145-5154.

6 Dong H，Toyoda N，Yoneyama H，et al.Gene expression profile analysis of the mouse liver during bacteria-induced fulminant hepatitis by a cDNA microarray system ．Biochem Biophys Res Commun，2006，298：675-686.

7 Xu H，Xu W，Chu Y，et al.Involvement of Up—Regulsted CXC Chemokine Ligand 16/Scavenger Receptor That Binds Phospha-tidylserine and Oxidized lipoprotein in Endotoxin-Induced Lethal Liver Injury via Regulation of T-Cell Recruitment and Adhesion.Infect Immun,2005，73：4007-4016.

8 徐煥賓，龔燕萍，儲以微，等.CXCLl6抗體可阻斷BCG和LPS誘導的小鼠免疫性肝損傷.中華微生物學和免疫學雜志，2005，25：114-115.

9 徐煥賓，龔燕萍，儲以微，等.CXCLl6趨化因子在小鼠免疫性肝損傷中的作用.中國免疫學雜志，2004，20：369-373.

10 楊勇,劉佩芝,詹愛琴.乙型肝炎患者血清趨化因子CXCL16的檢測及其意義.臨床肝膽病雜志,2008,24:114-116.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.12.010

050021 河北省石家莊市第五醫院ICU(封麗琴)；河北醫科大學第三醫院感染科(趙彩彥)

趙彩彥，050051 河北醫科大學第三醫院感染科；

E-mail:zhaocy2005@163.com

R 575.3

A

1002-7386(2014)12-1788-03

2014-01-03)