宮頸癌組織高危型HPV感染與HWAPL蛋白表達的關系

胡 濱，崔金全，鄧克紅，石瑩瑩

鄭州大學第二附屬醫院婦產科 鄭州 450014

宮頸癌組織高危型HPV感染與HWAPL蛋白表達的關系

胡 濱△，崔金全，鄧克紅，石瑩瑩

鄭州大學第二附屬醫院婦產科 鄭州 450014

△男，1979年6月生，碩士，主治醫師，研究方向：婦科腫瘤的防治，E-mail:149845691@qq.com

宮頸癌；HPV；HWAPL

目的：檢測宮頸癌組織中人乳頭瘤病毒(HPV)感染率及人半翼基因(HWAPL)蛋白表達水平，探討高危型HPV感染與HWAPL蛋白表達的關系。方法收集宮頸上皮內瘤變(CIN)組織及宮頸癌組織石蠟標本共132例，其中CINⅠ 29例、CINⅡ 28例、CINⅢ 35例、宮頸癌40例，應用HPV分型基因芯片系統檢測其內HPV并分型，應用PV-9000法進行HWAPL染色。結果宮頸癌和CINⅢ組織中高危型HPV陽性率高于CINⅡ和CINⅠ組織(χ2=34.560，P<0.001)。宮頸癌和CIN組織中HWAPL蛋白表達強度比較，差異有統計學意義(H=58.981，P<0.001)。高危型HPV感染與HWAPL蛋白表達有關聯(rP=0.356，P=0.001)。結論HWAPL蛋白異常表達可能是高危型HPV致宮頸癌發病的重要環節。

宮頸癌組織中人乳頭瘤病毒(HPV)的檢出率可以達到90%以上[1]。HPV可分為高危型和低危型，高危型有HPV16、18、33、45、58，低危型有HPV6、11、31、35。基因治療是腫瘤治療的一個趨勢，但有關宮頸癌特異性基因的研究報道很少，影響了宮頸癌基因治療的進展。Oikawa等[2]發現宮頸癌組織中人半翼基因(HWAPL)的mRNA表達水平升高，并推測HWAPL可能是一種宮頸癌特異性高表達基因。該研究目的在于檢測宮頸癌組織中HPV并進行分型，結合組織中HWAPL蛋白免疫組化檢測結果找出高危型HPV感染與HWAPL蛋白表達的關系，以期為宮頸癌的預防和基因治療提供理論依據。

1 對象與方法

1.1研究對象收集2004年2月至2008年2月鄭州大學第二附屬醫院的132例宮頸組織石蠟標本。其中40例為宮頸鱗狀細胞癌組織，患者術前均未進行放療或化療，年齡29～57(41.2±2.3)歲；92例為宮頸上皮內瘤變(CIN)組織，包括CINⅠ級29例、CINⅡ級28例、CINⅢ級35例，患者年齡24～45(32.5±4.5)歲。

1.2基因芯片技術檢測HPV的分型運用HPV分型基因芯片檢測系統檢測宮頸組織中HPV的類型。每張膜條的PC位點處均應有藍色斑點出現，此時結果視為有效；陰性者除PC位點為藍色斑點外其余部位均不顯色，否則可能發生污染或實驗不成功。由斑點顯現的位置判讀組織中HPV的型別。

1.3免疫組化法檢測HWAPL蛋白的表達采用免疫組化PV-9000法對宮頸組織石蠟切片進行HWAPL染色。HWAPL兔抗人多克隆抗體購自加拿大Novus Biological公司，稀釋度為1:200。免疫組化PV-9000試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司。按照試劑盒說明書進行操作。免疫組化陽性染色結果顯示HWAPL蛋白表達于細胞質中，呈棕黃色或黃色顆粒。在400倍鏡下對每張切片選擇5個視野,每個視野計數200個細胞。陽性細胞百分比<5%為陰性(-)，5%～為弱陽性(+)，25%～為中等陽性()，75%～為強陽性()。

1.4統計學處理采用SPSS 13.0對數據進行分析。宮頸癌和CIN組織中HPV陽性率及HWAPL蛋白表達情況的比較采用χ2檢驗和秩和檢驗，宮頸組織中HPV感染與HWAPL蛋白表達之間的關系采用列聯系數進行分析。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1宮頸癌和CIN組織中高危型HPV陽性率比較結果見表1。

表1 宮頸癌和CIN組織中HPV基因芯片檢測結果

χ2=34.560，P<0.001；*：與宮頸癌和CINⅢ比較，P均<0.008。

2.2宮頸癌和CIN組織中HWAPL蛋白表達情況比較HWAPL蛋白主要表達于宮頸上皮細胞的胞質中，見圖1和表2。

2.3宮頸組織中HPV感染與HWAPL蛋白表達的關系宮頸組織中HWAPL蛋白表達與高危型HPV感染有關聯，見表3。

圖1 宮頸癌(A)、CINⅢ(B)、CINⅡ(C)和CINⅠ(D)組織中HWAPL蛋白的表達(PV-9000法，×100)

表2 宮頸癌和CIN組織中HWAPL蛋白表達結果 例(%)

H=58.981，P<0.001。

表3 宮頸組織中HPV感染與HWAPL蛋白表達的關系 例(%)

rP=0.356，P=0.001。

3 討論

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一，90%以上的宮頸癌患者有HPV持續感染史，是目前病因最明確的腫瘤。隨著對宮頸癌診斷治療的完善，患者的生存率逐步提高，宮頸癌的預防和基因治療的重要性則更加突出。HPV感染是宮頸癌發生的主要原因。HPV是一種環狀雙鏈結構的DNA病毒,可分為高危型和低危型，目前認為高危型HPV主要有HPV16、18和58[3-4]。該研究中發現宮頸癌和CINⅢ組織中高危型HPV陽性率均高于CINⅡ和CINⅠ組織，與以往研究[5]結果一致。

WAPL是1977年在果蠅體內發現的一個基因，在有絲分裂中WAPL編碼的蛋白質主要功能是管理異染色質結構，維持姐妹染色單體的粘合。WAPL的變異會妨礙姐妹染色單體的正常靠近和并列，但不影響染色單體各自的凝集和分離。WAPL在人體內的同源序列稱為HWAPL，長約6 307 bp，定位于10q23.2，其具體作用可能與染色體的穩定有關[6]。Oikawa等[2]發現宮頸癌組織中HWAPL mRNA表達升高，初步推測HWAPL可能是一種宮頸癌特異性高表達基因。還有學者[7-8]研究發現HWAPL與宮頸癌發病密切相關。該研究的免疫組化結果表明：HWAPL蛋白在宮頸癌和CIN組織中的表達存在差異，從而支持HWAPL可能是一種宮頸癌特異基因，為宮頸癌的進一步研究提供了科研依據。

研究[2]發現高危型HPV早期蛋白影響HWAPL的表達，HPV16型E6/E7表達的逆轉錄病毒導入來源于成人皮膚組織的上皮角質細胞中后可表達HWAPL。以上研究結果初步說明HWAPL和HPV在宮頸癌的發生中有重要作用，二者之間有著十分密切的關系。該研究發現，高危型HPV感染與HWAPL蛋白表達有關聯。由此可以推斷在高危型HPV致宮頸癌的過程中HWAPL可能起重要作用。

該研究證實了宮頸癌組織中存在高危型HPV感染，HWAPL蛋白呈高表達，推測高危型HPV感染可增強宮頸癌組織中HWAPL的表達，HWAPL異常表達可能是HPV致宮頸癌發病的重要環節。臨床上可以結合使用HPV疫苗和HWAPL基因靶向治療來提高宮頸癌治愈率，延長宮頸癌患者的生存時間。

[1]沈鏗,郎景和.婦科腫瘤面臨的問題和挑戰[M].北京:人民衛生出版社,2002:20

[2]Oikawa K,Ohbayashi T,Kiyono T,et al.Expression of a novel human gene, human wings apart-like (hWAPL), is associated with cervical carcinogenesis and tumor progression[J].Cancer Res,2004,64(10):3545

[3]Bosch FX,Lorincz A,Muoz N,et al.The causal relation between human papillomavirus and cervical cancer[J].J Clin Pathol,2002,55(4):244

[4]Turan T,Kalantari M,Calleja-Macias IE,et al.Methylation of the human papillomavirus-18 L1 gene: a biomarker of neoplastic progression?[J].Virology,2006,349(1):175

[5]劉潔,平靜,王俊利,等.TCT聯合高危型人乳頭瘤病毒檢測用于宮頸病變篩查的評價[J].鄭州大學學報:醫學版,2011,46(3):466

[6]Kuroda M,Oikawa K,Ohbayashi T,et al.A dioxin sensitive gene, mammalian WAPL, is implicated in spermatogenesis[J].FEBS Lett,2005,579(1):167

[7]李元昆,鄧克紅,崔金全.hWAPL基因多態性增加HPV16/18陽性宮頸癌患者的發病危險性[J].現代婦產科進展,2014，23(4):287

[8]張文虹,鄭衛東.FQ-PCR檢測宮頸癌hWAPL基因mRNA及其診斷價值分析[J].國際檢驗醫學雜志,2012,33(10):1189

(2014-01-01收稿 責任編輯姜春霞)

Relationship of high-risk HPV infection and HWAPL protein expression in cervical cancer tissue

HUBin,CUIJinquan,DENGKehong,SHIYingying

DepartmentofGynecologyandObstetrics,theSecondAffiliatedHospital,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450014

cervical cancer; HPV; HWAPL

Aim: To detect the infection rate of high-risk HPV and the expression level of HWAPL in cervical cancer tissue and to investigate the relationship between them. Methods: Gene chip technology was used to detect HPV genotyping,at the same time PV-9000 immunohistochemistry was used to detect HWAPL protein expression in 132 specimens(including CINⅠ 29 cases, CINⅡ28 cases, CINⅢ 35 cases, and cervical cancer 40 cases).Results: The positive rates of high-risk HPV in cervical cancer and CINⅢ were significantly higher than those in CINⅡ and CINⅠ(χ2=34.560，P<0.001). The expression level of HWAPL protein in cervical cancer and CIN were significantly different(H=58.981，P<0.001). High-risk HPV infection was positively correlated with HWAPL protein expression (rP=0.356，P=0.001). Conclusion: The abnormal expression of HWAPL may be an important part for high-risk HPV induced cervical cancer.

10.13705/j.issn.1671-6825.2014.06.026

R737.33