AS患者血漿MCP-1、bFGF水平變化與疾病進(jìn)展關(guān)系的研究

郝建萍 馬成龍 張凡

·論著·

AS患者血漿MCP-1、bFGF水平變化與疾病進(jìn)展關(guān)系的研究

郝建萍 馬成龍 張凡

目的觀察動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)患者血漿單核細(xì)胞趨化因子(monocyte chemoattractic prptein-1,MCP-1)、堿性成纖維生長因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)水平與病變進(jìn)展的相關(guān)分析。方法分別收集50例AS患者作為實驗組、健康體檢者32例作為對照組。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血漿MCP-1、bFGF水平，同時收集患者臨床病理參數(shù)，分析血漿MCP-1、bFGF水平與動脈硬化進(jìn)展的內(nèi)在聯(lián)系。結(jié)果AS組MCP-1水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，且血漿MCP-1水平與患者冠脈病變支數(shù)、冠脈病變程度、E/A比值、射血分?jǐn)?shù)間呈正相關(guān)(r值分別為0.3541、0.5501、0.6237和0.8564，P<0.05)；AS組血漿bFGF水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，且血漿bFGF水平與冠脈病變程度、左室射血分?jǐn)?shù)間呈正相關(guān)(r值分別為0.6359和0.8751，P<0.01)；血漿MCP-1與bFGF水平之間呈正相關(guān)(r=0.4702，P<0.01)。結(jié)論MCP-1、bFGF是促進(jìn)AS進(jìn)展的關(guān)鍵因素，動態(tài)檢測其變化可以評估療效及預(yù)后。

單核細(xì)胞趨化因子；堿性成纖維生長因子；動脈粥樣硬化

動脈粥樣硬化是一種多種細(xì)胞因子參與的慢性炎癥反應(yīng)，其始動因素是內(nèi)皮細(xì)胞損傷，同時脂蛋白與內(nèi)皮細(xì)胞粘附侵入內(nèi)膜下，積聚的脂蛋白氧化后與單核細(xì)胞表面受體結(jié)合導(dǎo)致單核細(xì)胞趨化進(jìn)入內(nèi)膜下，單核細(xì)胞釋放脂蛋白吸引更多單核細(xì)胞進(jìn)入內(nèi)膜下，同時這一過程受到多種因子的調(diào)控，阻斷這一過程將為臨床治療帶來希望；巨噬細(xì)胞系統(tǒng)分泌的MCP-1因子在募集更多單核細(xì)胞侵入到內(nèi)膜下層發(fā)揮重要作用，而單核細(xì)胞吞噬的脂蛋白溢出細(xì)胞外形成脂湖，刺激更多MCP-1釋放，惡性循環(huán)，而MCP-1與AS不同病理參數(shù)的關(guān)系以及調(diào)控機(jī)制尚不清楚。bFGF是多種細(xì)胞分泌的促纖維化細(xì)胞因子，與多種病理過程中的纖維化進(jìn)程密切相關(guān)，研究顯示動脈硬化病灶中浸潤的單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞都分泌bFGF，可促進(jìn)AS患者血管中層平滑肌的增生和纖維化，而在動脈硬化進(jìn)程中上述兩種因子是否存在協(xié)同作用以及具體的調(diào)控機(jī)制鮮見報道，我們選取不同疾病階段的AS患者進(jìn)行上述兩個指標(biāo)的對比檢測，期望為AS的臨床治療和發(fā)病的分子機(jī)制研究提供初步科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院、河北省康?？h醫(yī)院內(nèi)科2005年1月至2007年10月間收治的AS患者50例，男31例，女19例；年齡46～63歲，平均年齡(52.4±2.6)歲；NYHA心功能分級：Ⅰ級3例，Ⅱ級17例，Ⅲ級24例，Ⅳ6例。冠脈造影均在河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院導(dǎo)管室完成，選擇性冠脈造影術(shù)采用judkins法，記錄左、右冠脈主干、前降支、回旋支病變情況。右冠狀動脈病變13例，左冠狀動脈病變25例，左右冠狀動脈均存在病變12例。SCAI病變分類：冠狀動脈病變程度Ⅰ型14例，Ⅱ型3例，Ⅲ型26例，Ⅳ型7例。

1.2 研究方法

1.2.1 左心功能測定：采用Philips iE 33型彩色多普勒超聲心動圖儀，配有S5—1探頭(頻率1～5 MHz)及X3—1全容積探頭(頻率1～3 MHz)。受檢者左側(cè)臥位，囑平靜呼吸，同步記錄心電圖。常規(guī)超聲心動圖檢查完畢后，采集心尖四腔心切面動態(tài)二維圖像(圖像幀頻在50～70幀以上，取連續(xù)3個心動周期)，啟動“FuUVol—ume”模式，將左心室心內(nèi)膜完整置于取樣框，固定探頭位置，采集連續(xù)3個心動周期的圖像。脫機(jī)后使用Qlab 7．1軟件進(jìn)行分析。實時三維超聲心動圖分析進(jìn)入3DQA模式，在三維數(shù)據(jù)庫中選取心內(nèi)膜清晰的左心室切面分別置于3個相互正交的參考平面上，手動勾畫左心室內(nèi)膜面，計算左心室舒張末期容積(EDV)、左心室收縮末期容積(ESV)及左心室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)、二尖瓣口測舒張期血流E峰、A峰、E/A比值。

1.2.2 MCP-1、bFGF測定：MCP-1、bFGF ELISA檢測試劑盒購自上海灝晶生物試劑公司，患者分別入院后即刻抽取2 ml靜脈血，加入EDTA(1.5 mg/ml)，4℃離心15 min(3 500 r/min)，取血漿-70℃保存待測。按試劑說明采用ELISA方法測定MCP-1、bFGF。同時檢測CK、CK-MB、TnT、肝腎功能、血脂、血糖及電解質(zhì)測定。

2 結(jié)果

2.1 MCP-1血漿水平在不同組間的比較 所有50例患者中50歲以上年齡組水平明顯高于50歲以下組(P<0.01)；NYHAⅠ級、Ⅱ級與Ⅲ級、Ⅳ級無明顯差別(P>0.05)；LVEF≤50%組明顯低于LVEF>50%組(P<0.01)；E/A≤1組明顯高于E/A>1組(P<0.01)。血脂增高組明顯高于正常組(P<0.01)。

2.2 bFGF血漿水平在不同組間的比較 所有50例患者中50歲以上年齡組水平與50歲以下年齡組無明顯差異(P>0.05)；NYHAⅠ級、Ⅱ級明顯高于Ⅲ級、Ⅳ；LVEF≤50%組(21例)水平明顯小于>50%組(P<0.01)；E/A≤1組與E/A>1組比較無明顯差別(P>0.01)；冠狀動脈病變程度Ⅰ型、Ⅱ型明顯低于Ⅲ型、Ⅳ型(P<0.01)。血脂增高組明顯高于正常組(P<0.01)。見表1。

表1不同分組患者M(jìn)CP-1、bFGF血漿水平變化比較

項目MCP-1(pg/ml)bFGF(Pg/ml)t值P值50歲以上(n=24)149±7443±9.4tM=5.3007<0.00150歲以下(n=26)97±3438±4.6tb=1.0923>0.05心功能ⅠⅡ級(n=20)78±14.542±6.1tM=8.3246>0.001心功能ⅢⅣ級(n=30)88±4.636±4.5tb=0.9234>0.05LVEF>50%(n=21)163±1474±10.3tM=5.6679<0.001LVEF≤50%(n=29)98±6.437±7.2tb=4.2483<0.001E/A≤1(n=25)110±10.639±6.0tM=0.8653<0.05E/A>1(n=25)174±12.443±8.1tb=1.2355>0.05冠狀動脈病變程度Ⅰ、Ⅱ型(n=17)82±1120±3.7tM=3.8027<0.01冠狀動脈病變程度Ⅲ、Ⅳ型(n=33)160±9343±4.1tb=1.2355<0.01血脂正常(n=19)93±7320±3.5tM=4.5437<0.05血脂升高(n=31)175±5242±9.8tb=5.8921<0.01

注：tM代表MCP-1,tb代表bFGF

2.3 MCP-1、bFGF與心功能指標(biāo)的相關(guān)性分析 MCP-1上升幅度與患者冠脈病變支數(shù)、冠脈病變程度、E/A比值、射血分?jǐn)?shù)間呈正相關(guān)(r值分別為0.3541、0.5501、0.6237和0.8564)；bFGF上升幅度與冠脈病變程度、左室射血分?jǐn)?shù)間呈正相關(guān)(r值分別為0.6359何0.8751，P<0.01)。

2.4 MCP-1、bFGF 水平變化的相關(guān)性 MCP-1、bFGF升高幅度在疾病早期存在正相關(guān)關(guān)系(r=0.6712，P<0.01)。

3 討論

AS是一種與高血脂和內(nèi)皮細(xì)胞持續(xù)損傷相關(guān)的慢性炎癥疾病，主要累及血流動力學(xué)較高的血管，多種炎癥細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子在疾病發(fā)展過程中共同作用。首先內(nèi)皮細(xì)胞損傷導(dǎo)致低密度脂蛋白進(jìn)入內(nèi)膜下，同時低密度脂蛋白通過內(nèi)皮細(xì)胞間隙下遷移后被氧化修飾，誘導(dǎo)單核細(xì)胞進(jìn)入內(nèi)膜下吞噬脂蛋白，吞噬脂質(zhì)后單核細(xì)胞形成泡沫細(xì)胞，脂蛋白對細(xì)胞具有毒性作用，破壞細(xì)胞后脂質(zhì)分泌到細(xì)胞外形成粥湖，繼續(xù)誘導(dǎo)單核細(xì)胞的趨化，同時刺激中層平滑肌細(xì)胞增殖，導(dǎo)致粥樣斑塊形成并不斷擴(kuò)大，血管壁增厚變硬，而這一過程中伴隨促纖維化細(xì)胞因子分泌(比如MCP-1)，導(dǎo)致內(nèi)皮下血管中層的平滑肌細(xì)胞增生、間質(zhì)纖維化，但是其過程的具體調(diào)控網(wǎng)絡(luò)尚不清楚[1，2]，我們試驗選取單核細(xì)胞趨化因子和纖維細(xì)胞生長因子對其過程進(jìn)行動態(tài)觀察，希望為尋找新的治療靶點和手段提供較為客觀的依據(jù)。

MCP-1是趨化因子CC家族中的一員，由76個氨基酸殘基組成，可由多種細(xì)胞如成纖維細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌。其基因啟動子上游有核轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點，與NF-kB的DNA結(jié)合可以激活MCP-1基因的轉(zhuǎn)錄[3，4]。MCP-1具有誘導(dǎo)單核巨噬細(xì)胞趨化和激活的雙重作用，是炎癥反應(yīng)的始動因子，主要的作用機(jī)制是(1)趨化外周單核細(xì)胞浸潤至血管內(nèi)皮，誘導(dǎo)因子反應(yīng)；(2)誘導(dǎo)單核細(xì)胞表達(dá)組織因子，參與血栓形成；(3)活化血管平滑肌細(xì)胞并促進(jìn)增殖；(4)促進(jìn)動脈粥樣硬化斑塊中的血管新生，使斑塊不穩(wěn)定[5]。研究發(fā)現(xiàn)敲除小鼠MCP-1基因或CCR2基因可使斑塊巨噬細(xì)胞含量和損傷面積明顯下降，過表達(dá)則加速動脈硬化的形成。臨床研究發(fā)現(xiàn),MCP-1水平變化與冠狀動脈粥樣斑塊的穩(wěn)定性有一定的相關(guān)性，并在冠心病炎癥的發(fā)生和發(fā)展過程中起重要作用[6，7]。我們實驗結(jié)果顯示：MCP-1血漿水平在不同組間的比較 ， 所有50例患者中50歲以上年齡組水平明顯高于50歲以下組；NYHAⅠ級、Ⅱ級與Ⅲ級、Ⅳ級無明顯差別；LVEF≤50%組明顯低于LVEF>50%組；E/A≤1組明顯高于E/A>1組；血脂增高組明顯高于正常組。說明血流動力學(xué)的改變和血脂的升高時促使多種細(xì)胞分泌MCP-1增加；相關(guān)分析顯示MCP-1上升幅度與患者冠脈病變支數(shù)、冠狀動脈病變程度、E/A比值、射血分?jǐn)?shù)之間存在正相關(guān)；說明MCP-1隨冠脈硬化程度的加重和心功能降低其表達(dá)水平明顯增高。

研究表明，內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、分化及其形態(tài)和功能變化與bFGF有密切關(guān)系[8，9]。bFGF在動脈粥樣硬化斑塊形成過程中發(fā)揮重要作用。bFGF具有內(nèi)皮趨化性，并刺激內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生纖溶酶元活化物和膠原酶，能降解血管基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)[10]。本組資料提示bFGF血漿水平在不同組間的比較： 所有50例患者中50歲以上年齡組水平與50歲以下年齡組無明顯差異；NYHAⅠ級、Ⅱ級明顯高于Ⅲ級、Ⅳ；LVEF≤50%組(21例)水平明顯小于>50%組；E/A≤1組與E/A>1組比較無明顯差別；冠狀動脈病變程度Ⅰ型、Ⅱ型明顯低于Ⅲ型、Ⅳ型；血脂增高組明顯高于正常組。說明bFGF可通過促進(jìn)纖維化促進(jìn)動脈硬化的進(jìn)展。

動脈硬化是一個多因素共同參與的復(fù)雜過程，內(nèi)皮細(xì)胞損傷、繼發(fā)炎癥、氧化應(yīng)激、免疫功能障礙相互作用是加速AS的主要因素。相關(guān)分析顯： MCP-1、bFGF升高幅度在AS早期存在正相關(guān)。說明MCP-1、bFGF的協(xié)同作用在AS早期斑塊形成中發(fā)揮主要作用，當(dāng)然AS是一個復(fù)雜的病理生理過程，多種細(xì)胞因子參與動脈粥樣硬化過程的機(jī)制尚需深入的研究，以便為今后的臨床治療和藥物的開發(fā)提供新的分子靶點。

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10.3969/j.issn.1002-7386.2014.13.040

075000 河北省康?？h醫(yī)院心內(nèi)科(郝建萍、馬成龍)；河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院病理科(張凡)

R 543

A

1002-7386(2014)13-2014-03

2014-02-23)