肺炎支原體快速培養法在呼吸道感染診斷中的應用

楊笑瓊??秦亞軍??詹劍峰

[摘要] 目的 探討快速培養法在診斷肺炎支原體導致的呼吸道感染中的作用。 方法 對2011年12月～2013年12月來院就診的疑似肺炎支原體感染患者200例進行研究，留取咽拭子和血清，分別進行快速培養法、熒光定量PCR法和血清抗體法檢驗，并就快速培養法與其余兩種不同的檢測方法的結果進行對比分析。 結果 快速培養法、熒光定量PCR法和血清抗體檢驗法檢測陽性率分別為30.0%（60/200）、29.0%（58/200）和16.5%（33/200），快速培養法陽性率與熒光定量PCR法檢測陽性率相比較，差異無統計學意義（P>0.05）；而快速培養法檢測陽性率與血清抗體法檢測陽性率相比較，快速培養法檢測陽性率顯著高于血清抗體檢測法，且差異具有統計學意義（P<0.05）。 結論 快速培養法檢測肺炎支原體的敏感性和靈敏性可與熒光定量PCR法檢測結果相媲美，但裝備技術要求和檢測成本明顯低于熒光定量PCR法，同時敏感性和靈敏性顯著高于血清抗體檢測法?？焖倥囵B法檢測肺炎支原體不僅能有效滿足臨床需要，同時兼具有成本低的特點，因此這種方法具有較高的性價比，尤其適用于基層醫院。

[關鍵詞] 肺炎支原體；快速培養法；熒光定量PCR法；血清抗體檢驗法

[中圖分類號] R446 [文獻標識碼] B [文章編號] 2095-0616（2014）15-84-03

肺炎支原體是介于病毒和細菌之間的一種較為特殊的微生物[1]。人體呼吸道黏膜存在著多種支原體，已經被證實可以引起肺炎的支原體只有肺炎支原體[2]。由于可以引起肺炎的病原體種類較多，醫生僅僅根據患者的臨床表現無法確定是哪種病原微生物導致患者發生肺炎，因而無法對癥下藥[3]，因此，病原體的檢測對于疾病的診斷和指導臨床用藥至關重要[4]。肺炎支原體常用的檢測方法有快速培養法、熒光定量PCR法和血清抗體檢驗法[5]。本研究就2011年12月～ 2013年12月來院就診的疑似肺炎支原體感染患者200例進行研究，分別使用三種不同的檢測方法對每位患者進行檢測，并將快速培養法的檢測結果與熒光定量PCR法和血清抗體檢驗法的檢測結果相比較，探討快速培養法在診斷肺炎支原體導致的呼吸道感染中的應用價值。研究取得滿意的結果，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2011年12月～2013年12月來院就診的疑似肺炎支原體感染患者200例，其中男118例，女82例，年齡3～25歲，平均（11.5±5.2）歲。對每位患者取兩份咽拭子并抽取靜脈血3mL，其中取咽拭子前患者必須先漱口。兩份咽拭子分別用于快速培養和熒光定量PCR檢測，靜脈血分離血清后做肺炎支原體特異性IgM抗體檢測。

1.2 方法

1.2.1 快速培養法 快速培養法檢測使用肺炎支原體快速檢測試劑盒（武漢菁華時間科技有限公司生產，批號2010-3-16-03），將一份咽拭子置于液體培養基中攪拌數次，放入37℃培養箱中培養6h后開始觀察結果，如必要可將觀察時間延長到1～ 4周。如果液體培養基顏色變為黃色，再接著進行40倍光學顯微鏡觀察，如果顯微鏡下沒有發現細菌或者真菌，則結果為陽性，發現細菌或者真菌則結果為陰性；如果液體培養基顏色仍保持為原紅色或者非清亮的黃色則結果為陰性。

1.2.2 熒光定量PCR法 核酸定量檢測試劑盒選擇中山大學達安基因股份有限公司產品，使用羅氏公司生產的PCR擴增儀進行擴增，所有操作步驟均嚴格按照說明書執行，結果直接以陽性或者陰性報告。

1.2.3 血清抗體檢測法 將患者血清以3000r/min轉速離心10min后取出血清，然后進行肺炎支原體特異性IgM抗體檢測，采用肺炎支原體特異性IgM抗體檢測試劑盒（膠體金法）進行測試。嚴格按照試劑盒說明書進行，如果沒有出現質控點則表明試驗操作不當或者試劑失效，應當重新按照規定測試；如果出現質控點則表示試驗正常，可以進行結果判定，若僅有質控點則表明結果為陰性，只有在出現2個斑點的情況下才能確定試驗結果為陽性。

1.3 評價指標

將快速培養法的檢測結果（即檢出的陽性率）分別與熒光定量PCR法和血清抗體檢驗法的檢測結果進行兩兩比較，用陽性檢出率的差異是否具有統計學意義判定檢驗方法的效果。

1.4 統計學方法

所有數據經epidata輸入計算機，應用SPSS15.0統計軟件分析，兩組間陽性率的比較采用x2檢驗，α=0.05，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

200例疑似患者分別通過快速培養法、熒光定量PCR法和血清抗體檢驗法檢測陽性率分別為30.0%（60/200）、29.0%（58/200）和16.5%（33/200），快速培養法陽性率與熒光定量PCR法檢測陽性率相比較，差異無統計學意義（x2=0.05，P>0.05）；快速培養法檢測陽性率與血清抗體法檢測陽性率相比較，快速培養法檢測陽性率顯著高于血清抗體檢測法，且差異具有統計學意義（x2=10.21，P<0.05）。具體比較見表1、2。

3 討論

肺炎支原體比較容易引起人肺炎，據相關資料表明肺炎支原體引起的肺炎占到非細菌性肺炎的一半以上[6]。肺炎支原體引起的人體肺組織病理變化主要表現為間質性肺炎，又稱為原發性非典型

肺炎[7]。肺炎支原體可以從急性感染者的咽部、肺部、氣管、支氣管以及胸水中分離出來，也有部分人是肺炎支原體攜帶者。攜帶者一般無臨床癥狀，但其可作為重要的傳染源，是疾病預防控制過程中需要加以重視的環節[8]。支原體肺炎的臨床癥狀一般較為輕微，發病緩慢，患者發熱、咳嗽以及黏液或者膿性痰甚至血痰等癥狀較常見，一般來說不具有明顯的肺部體征[9]。

支原體肺炎的感染途徑主要是因為健康人接觸了或者吸入了肺炎支原體患者排出的分泌物，人群對于肺炎支原體的抵抗力較弱，普遍易感，患者中兒童和青少年占絕大部分[10]。支原體肺炎的發生具有明顯的季節性，大多發生于夏末秋初，春季和冬季也有少量散發。研究顯示[11]，近年來肺炎支原體感染引起肺炎的發病率有逐年增加的趨勢，尤其值得注意的是支原體肺炎在家庭或者醫院中的爆發性流行。

本研究顯示快速培養法陽性率與熒光定量PCR法檢測陽性率相比較陽性率比較接近，差異無統計學意義；快速培養法檢測陽性率與血清抗體法檢測陽性率相比較，快速培養法檢測陽性率顯著高于血清抗體檢測法，且差異具有統計學意義。相關研究表明PCR法檢測肺炎支原體具有較高的靈敏度和準確度，但是PCR操作首先需要較好的設備，其次需要高素質的人才，因此成本較高，每次檢測所需費用非常昂貴，目前尚不具備廣泛推廣的條件[12]。而快速培養法檢測肺炎支原體的靈敏度和可靠性與PCR法非常接近，但每次檢測的成本較低，在患者可承受范圍以內，因而具備廣泛推廣的條件。

綜上所述，快速培養法檢測肺炎支原體的敏感性和靈敏性可與熒光定量PCR法檢測結果相媲美，但裝備技術要求和檢測成本明顯低于熒光定量PCR法，同時敏感性和靈敏性顯著高于血清抗體檢測法?？焖倥囵B法檢測肺炎支原體不僅能有效滿

足臨床需要同時兼具有成本低的特點，因此這種方法具有較高的性價比，可以作為基層醫院檢測方法的重要選擇。

[參考文獻]

[1] 董曉艷，陸權.小兒肺炎支原體感染的診治現狀與進展[J].實用兒科臨床雜志，2011，26（4）：235-238.

[2] 蔣俊曄，曹蘭芳.兒童肺炎支原體肺炎治療的研究進展[J].臨床兒科雜志，2009，27（7）：692-695.

[3] 楊春芳，李曉紅，潘家華，等.肺炎支原體感染診治進展[J].安徽醫藥，2010，14（8）：880-882.

[4] 陳志敏.兒童肺炎支原體感染診治研究進展[J].臨床兒科雜志，2008，26（7）：562-565.

[5] Wulff-Burchfield E，Schell WA，Eckhardt AE，et al. Microfluidic platform versus conventional real-time polymerase chain reaction for the detection of Mycoplasma pneumoniae in respiratory specimens[J]. Diagn Microbiol Infect Dis，2010，67（1）：22-29.

[6] 康妍萌，丁明杰，韓玉玲，等.細胞因子與肺炎支原體感染的相關研究進展[J].山東醫藥，2011，51（21）：113-114.

[7] 劉洋，李敏.肺炎支原體肺炎發病機制研究進展[J].臨床兒科雜志，2011，29（2）：196-198.

[8] 李素榮，牟京輝，常麗，等.肺炎支原體感染所致兒童壞死性肺炎30例胸部CT表現及轉歸[J].中華兒科雜志，2013，51（3）：211-215.

[9] 成智.兒童重癥肺炎支原體肺炎研究進展[J].國際兒科學雜志，2012，39（1）：92-95.

[10] 易海峰.成人肺炎支原體感染研究進展[J].醫學綜述，2011，17（7）：1029-1032.

[11] 劉雅芬，高燕.成人社區獲得性肺炎病原流行病學及診斷研究進展[J].中華醫學雜志，2013，93（4）：317-319.

[12] Qu J，Gu L，Wu J，et al.Accuracy of IgM antibody testing， FQ-PCR and culture in laboratory diagnosis of acute infection by Mycoplasma pneumoniae in adults and adolescents withcommunity-acquired pneumonia[J].BMC Infect Dis，2013，13（1）：172.

（收稿日期：2014-04-15）