干擾素治療慢性乙型肝炎對患者T淋巴細胞CD28表達的影響

錢峰

·藥物與臨床·

干擾素治療慢性乙型肝炎對患者T淋巴細胞CD28表達的影響

錢峰

目的 探討干擾素治療慢性乙型肝炎對患者T淋巴細胞CD28表達的影響。方法 符合納入標準的慢性乙型肝炎患者112例, 給予干擾素α-2b抗病毒治療, 療程為12個月, 治療前后測定并比較患者淋巴細胞CD28表達情況。結果 治療后, 患者CD4+CD28+T細胞由(0.43±0.1)×109/L增加至(0.56±0.2)×109/L, CD8+CD28+T細胞由(0.19±0.2)×109/L增加至(0.31±0.1)×109/L, CD28的表達均明顯高于治療前, 比較差異有統計學意義(P<0.05)。高病毒載量組與低病毒載量組患者治療后T淋巴細胞CD28表達差異無統計學意義(P＞0.05)。結論 干擾素α-2b可以有效增加慢性乙型肝炎患者T淋巴細胞CD28的表達, 其抗病毒作用可能與有效激活CD4+CD28+和CD8+CD28+T細胞有關。

干擾素α-2b；慢性乙型肝炎；CD28

慢性乙型肝炎(CHB)是一種全球性的傳染性疾病, 約有20億人群感染過乙型肝炎病毒(HBV), 中國是乙型肝炎的高發地區, 其中約有1.2億人群是病毒攜帶者［1］, 嚴重危害人類健康。治療CHB, 抗病毒治療是關鍵。目前認為, T淋巴細胞介導的細胞免疫在清除HBV中發揮關鍵作用, 其活化和發揮作用的關鍵因素是T淋巴細胞表面協同刺激分子極其配體的正常表達［2］。T細胞只有在抗原特異性的第一信號和T細胞上的CD28與抗原提呈細胞上的B7分子結合提供的第二信號同時存在時, 才開始增殖并分泌相關細胞因子［3］。因此, 提高T細胞CD28的表達, 對HBV的有效清除有著積極的意義。本研究旨在探討干擾素α-2b治療慢性乙型肝炎對患者T淋巴細胞CD28表達的影響, 以期為臨床用藥進一步提供相關臨床證據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本科2012年1月～2013年10月收治的CHB患者112例, 納入標準：①符合中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學分會制定的病毒性肝炎防治方案中CHB的診斷標準［4］；②排除HBV相關疾病, 合并甲、丙、丁、戊型肝炎病毒感染及自身免疫性疾病患者；③未接受過抗病毒及免疫治療。其中男71例, 女41例, 平均年齡(32.5±11.2)歲。所以患者均給予干擾素α-2b 500萬單位隔日肌肉注射1次抗病毒治療, 療程為12個月。治療前后檢測并比較患者CD28表達情況。病毒載量>1×106IU/ml為高病毒載量患者, <1×106IU/ml為低病毒載量患者, 比較高病毒載量患者與低病毒載量患者治療后CD28表達情況。

1.2 CD28表達情況檢測 外周血淋巴細胞CD28表達檢測：各加入50 μl EDTA抗凝血至樣品測定管中, 每管中加入相應抗體10 μl, 振蕩混勻, 室溫避光孵育20 min, 加入溶血素1 ml, 振蕩混勻, 室溫避光放置10 min, 1200 r/min的轉速離心4 min棄上清, 加入PBS 1 ml, 1200 r/min轉速離心4 min, 棄上清, 加入PBS 400 μl, 混勻后上機檢測。使用三色熒光進行檢測, 其中CD4和CD8采用FITC標記, CD28使用PE標記。軟件Cellquest進行分析。于治療前后各采血檢測1 次上述指標。

1.3 統計學方法 采用統計學軟件SPSS16.0對數據進行分析。計量資料以均數± 標準差( x-±s)表示, 采用t檢驗；計數資料采用χ2檢驗。以 P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 抗病毒治療前后CD28表達情況比較 12個月的療程結束后, 患者CD4+CD28+T細胞及CD8+CD28+T細胞較治療前明顯增加, 比較差異均有統計學意義(P<0.05)。表明干擾素α-2b可以增加慢性乙型肝炎患者T淋巴細胞CD28的表達 , 詳見表1。

表1 抗病毒治療前后CD28表達情況比較［ x-±s, (×109/L)］

2.2 不同病毒載量患者治療后CD28表達情況比較 高病毒載量組與低病毒在兩組在治療后患者CD4+CD28+T細胞及CD8+CD28+T細胞CD28的表達差異均無統計學意義(P＞0.05),詳見表2。

表2 不同病毒載量患者治療后CD28表達情況比較［ x-±s, (×109/L)］

3 討論

CD28分子是免疫球蛋白超家族的成員, 是T細胞初始活化過程中不可缺少的第二信號, 在病毒感染的初始階段, T細胞在CD28介導的刺激信號作用下開始克隆增殖, 并促進白細胞介素-2的分泌, 為清除病毒做準備, 而缺乏CD28的介導作用, 將導致T細胞的無能［5］。Fan等［6］研究發現,阻斷CD28 /B7可以抑制T細胞活化, 并誘導免疫耐受。研究表明, CHB的預后與患者抗病毒免疫密切相關, 正常的免疫反應可以有效清除HBV。但CHB患者的細胞免疫功能與正常人相比常有不同程度的下降, T淋巴細胞CD28表達顯著降低, 不利于HBV的清除, 更容易導致病毒的持續感染, 以致病情遷延不愈。因此, T淋巴細胞CD28分子表達的減少可能是CHB患者病毒難以清除的原因之一, 增加T淋巴細胞表面CD28分子的表達可以提高HBV的有效清除率。

理想的抗HBV方案應該具有激活足夠免疫細胞、肝細胞損傷較少及有效終止病毒持續感染的優點。干擾素是一種具有抗病毒和免疫調節雙重機制的多功能糖蛋白, 通過上調I型主要組織相容性復合體FC受體, 促使CTL細胞分化并提高宿主免疫應答, 從而清除HBV感染的細胞［7］。目前, 干擾素已廣泛用于CHB的抗病毒治療, 并取得了一定的療效,但其對CHB患者T淋巴細胞表明CD28分子表達的影響的相關研究較少。

本研究中, 通過12個月療程的干擾素α-2b治療, 患者CD4+CD28+T細胞由(0.43±0.1)×109/L增加至(0.56±0.2)×109/L, CD8+CD28+T細胞由(0.19±0.2)×109/L增加至(0.31±0.1)×109/L, CD28分子表達均明顯高于治療前。結果表明, 干擾素α-2b有效上調CHB患者T淋巴細胞CD28的表達, 此機制可能與干擾素α-2b的抗病毒作用有關。然而, 高病毒載量組與低病毒載量組患者治療后T細胞CD28表達情況并無顯著差異,與張曉幫等［8］報道較為一致。

綜上所述, 干擾素治療可有效增加T淋巴細胞CD28的表達, 從而達到激活T細胞免疫反應的抗病毒作用, 在乙肝治療中發揮作用。

［1］ 鄒德力.談乙型肝炎病毒的傳播、預防和致病機制.中國醫藥導報, 2009, 6(20):151-152.

［2］ 涂遠航, 馬勇, 谷曼, 等.拉米夫定對慢性乙型肝炎患者CD28表達的影響.鄭州大學學報(醫學版), 2011, 46(5):795-797.

［3］ 郝峰, 方芳, 李艷, 等.乙肝患者外周血T淋巴細胞上CD28表達及臨床意義.中國民康醫學(上半月), 2007, 19(19):826-827.［4］ 中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學分會.病毒性肝炎防治方案.中華傳染病雜志, 2001, 19(1):56.

［5］ 朱傳武, 羅端德, 曾令蘭, 等.慢性乙型肝炎患者干擾素療效與CD28陽性外周血單個核細胞的關系.臨床肝膽病雜志, 2002, 18(4):251-252.

［6］ Fan K, Wang H, Wei H, et al.Blockade of LIGHT/HVEMand B7/CD28 signaling facilitates long-term islet graft survivalwith development of allospecific tolerance.Transplantation, 2007, 84(6):746.

［7］ 向曉玲, 蔡杰, 楊云.干擾素α-2α聯合中藥治療HbeAg陽性慢性乙型肝炎的臨床觀察.臨床醫藥實踐, 2009(36):904-905.

［8］ 張曉幫, 劉波, 徐岳軍, 等.慢性乙型肝炎患者外周血CD4+CD25+、CD8+CD28+淋巴細胞的變化及與病毒載量的關系.放射免疫學雜志, 2010, 23(1):77-79.

2014-05-29］

215007 江蘇省蘇州市第五人民醫院感染科