NEU-P11對膿毒癥大鼠心肌損傷的保護作用研究

黃靚 Moshe Laudon

南華大學1. 心血管疾病研究所；2. 外科學總論教研室 湖南 衡陽，421001

3．Drug Discovery，Neurim Pharmaceuticals lad，Tel-Aviv，Israel

NEU-P11對膿毒癥大鼠心肌損傷的保護作用研究

黃靚1,2楊璐2朱夢霞2王漢群2Moshe Laudon3尹衛東1

南華大學1. 心血管疾病研究所；2. 外科學總論教研室 湖南 衡陽，421001

3．Drug Discovery，Neurim Pharmaceuticals lad，Tel-Aviv，Israel

目的： 研究NEU-P11對膿毒癥大鼠心肌的保護作用，并探討其作用機制。方法30只SPF級雄性SD大鼠隨機分為假手術組(Sham組) 、膿毒癥模型組(CLP組)和Neu-p11處理組，每組10只。采用盲腸結扎穿刺法制作膿毒癥大鼠模型。術后6h收集血清，取心肌，檢測血清中LDH、CK的活性，檢測心肌組織中MDA、SOD的含量。結果NEU-P11處理可明顯改善膿毒癥大鼠的心肌損傷，減少血清中LDH、CK 的釋放和心肌組織中MDA的產生，增加心肌組織中SOD的含量。結論NEU-P11對膿毒癥大鼠心肌有顯著的保護作用，可能與其能減少血清中LDH、CK 的釋放和心肌組織中MDA的產生，增加心肌組織中SOD的含量有關。

NEU-P11；膿毒癥；心肌損傷

膿毒癥是指由感染引起的全身炎癥反應，膿毒癥、嚴重膿毒癥、膿毒性休克、多臟器功能不全是本疾病發展的連續過程。心功能障礙是嚴重膿毒癥的常見并發癥。近10 年來統計數據顯示，膿毒癥患者中40%～50%可發生心肌抑制，7% 發生心力衰竭。NEU-P11是一種新型的非選擇性的褪黑素受體MTI/MT2激動劑，它具有改善睡眠、調節糖脂代謝以及清除自由基等作用，本研究擬采用盲腸結扎穿刺法( cecal ligation puncture ,CLP) 制備大鼠膿毒癥模型, 觀察NEU-P11對膿毒癥大鼠的心臟保護效應及探討其作用機制。

1 材料與方法

1.1 動物模型制備及分組

體重250-300g的SPF級雄性SD大鼠30只，由南華大學實驗動物學部提供，隨機分為3組：假手術組(Sham組)、膿毒癥組(CLP組)、NEU-P11組，每組15 只。采用盲腸結扎穿刺法制備膿毒癥模型：大鼠在標準飼養條件下適應1周，腹腔注射20%的烏拉坦麻醉大鼠，消毒腹壁皮膚后，取腹壁正中切口2 cm。拉出盲腸，在盲腸血管弓內距盲腸盲端1～1. 5 cm 處結扎，避免損傷血管。用18號針頭于盲腸盲端對合穿孔3次。輕輕擠壓結扎的盲腸，擠出少量糞便內容物。觀察腸段無活動性出血后將盲腸還納入腹腔，逐層關閉腹腔，術后立即皮下注射生理鹽水。Sham組除不行盲腸結扎穿刺外,其余操作同CLP 組。NEU-P11組則術前7天每天腹腔注射濃度為15mg/kg的NEU-P11，其余操作同CLP組。

1.2 血清中LDH、CK 的測定

術后 6 h 以濃度 7%水合氯醛溶液麻醉大鼠。腹主動脈采血 2 mL，置入 5 mL規格的消毒 EP 管中，4℃冰箱放置凝固后，以 8000 g 離心 5 min，取上層血清，-20℃保存備用。標本收集后用生化試劑盒測定LDH、CK的活性(南京建成生物醫學工程研究所)。

1.3 心肌組織中MDA、SOD含量測定

取下心臟，制備成心肌組織勻漿，用黃嘌呤氧化酶法測定心肌中過氧化物歧化酶( SOD) 活性, 用硫代巴比妥酸鹽法測定心肌中丙二醛( MDA) 含量。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 Neu-p11對血清中LDH和CK活性的影響

與Sham組相比，CLP組血清中LDH和CK活性明顯增高 (P<0.05)，Neu-p11組可顯著降低LDH、CK活性(P<0.05)，見表1。

表1 各組血清中LDH和CK活性的變化

2.2 Neu-p11對心肌中MDA和SOD含量的影響

與Sham組相比，CLP組心肌組織中MDA含量顯著增高，SOD 含量顯著下降(P<0.05)，Neu-p11組可降低心肌MDA，增加心肌SOD含量(P<0.05)，見表2。

表2 各組心肌中MDA和SOD含量的變化

3 討論

隨著社會的快速發展以及免疫抑制藥物的使用和耐藥菌的出現,膿毒癥的發病率以每年1.5%的速度增長,成為危重病人主要的死亡原因之一。盡管對于膿毒癥的研究投入了大量的人力、物力和財力,包括采用抗炎制劑的臨床治療,但收效甚微。心肌損傷是膿毒癥常見的并發癥,也是影響膿毒癥轉歸的重要因素，臨床上表現為心律失常、低血壓和心力衰竭，可進一步加重其他器官功能進一步損害。據統計,膿毒癥合并心功能障礙使膿毒癥死亡率由不合并心功能的20%增長到70%-90%，因此,針對膿毒癥心肌損傷的發病機制開展深入研究及早期防治,對提高膿毒癥的救治水平具有重要意義[1]。

LDH、CK 是目前常用的心肌損害有關酶學檢查，它們廣泛存在于細胞漿內，故心肌細胞損傷時，二者進入血液中，活性升高，因此，血清中CK 和LDH 的量與心肌損傷和壞死程度呈正相關[2]。本研究通過大鼠膿毒癥模型研究 NEU-P11對大鼠心肌細胞的保護作用。結果顯示，CLP組的 LDH 和 CK 水平明顯高于假手術組，而NEU-P11組的 LDH 和 CK 水平明顯低于CLP組，差異有統計學意義，以上結果表明，提示膿毒癥大鼠心肌組織受到了損害，NEU-P11能夠明顯減輕膿毒癥引起的心肌組織的損傷。

MDA 是細胞內發生脂質過氧化反應的終產物，是反映體內氧化應激反應的重要指標之一，其含量多少可反映細胞膜脂質過氧化的程度，可間接反映細胞損傷程度。SOD 是廣泛存在于需氧物體內的一種金屬酶，能催化超氧陰離子自由產生歧化反應，是體內最為重要的自由基清除劑[3]。本實驗結果顯示，在大鼠膿毒癥模型上，CLP組大鼠心肌組織中MDA含量增高，SOD含量降低，而NEU-P11治療組能明顯升高心肌中SOD,降低MDA的含量，提示NEU-P11可通過提高心肌組織抗氧化能力，保護心肌細胞膜，進而保護受損的心肌。

綜上所述，NEU-P11對膿毒癥大鼠的心肌損傷有明顯的保護作用，其機制可能是通過激活抗氧化酶，提高SOD 的含量，減少過多氧自由基對組織的損傷，最終表現出對心肌損傷的保護作用，但其作用的起始點及環節有待于進一步研究。

[1]彭娜. 烏司他丁對膿毒癥心肌損傷的保護作用及機理探討 [D]. 廣東: 南方醫科大學, 2010.

[2]董六一，邵 旭，江勤，等. 牡荊素對大鼠實驗性心肌缺血損傷的保護作用及其機制 [J].中草藥，2011,42(7)：1378-1383.

[3]馮毅，馬亞飛，張林波，等. 葛根素預處理對缺血再灌注心肌脂質過氧化與內質網應激的影響 [J].中國醫學創新，2014,11(8)：11-12.

2013年衡陽市科學技術發展計劃項目 2013KJ10

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1009-6019(2014)08-0131-02