薄層色譜法鑒別金烏骨通膠囊中淫羊藿苷

貴州省黔南州食品藥品檢驗(yàn)所，貴州 都勻 558000

薄層色譜法鑒別金烏骨通膠囊中淫羊藿苷

徐作剛段萍萬紅才任永奇

貴州省黔南州食品藥品檢驗(yàn)所，貴州 都勻 558000

目的薄層色譜法鑒別金烏骨通膠囊中的淫羊藿苷。方法采用薄層色譜法對(duì)制劑中含有淫羊藿苷進(jìn)行定性鑒別。結(jié)果薄層色譜法檢出淫羊藿苷，且斑點(diǎn)清晰。結(jié)論該方法可作為金烏骨通膠囊中淫羊藿的定性鑒別方法，結(jié)果穩(wěn)定性、重復(fù)性較好。

金烏骨通膠囊；淫羊藿；薄層色譜

金烏骨通膠囊是由金毛狗脊、木瓜、烏梢蛇、葛根、淫羊藿、姜黃、補(bǔ)骨脂等多味藥組成，具有滋補(bǔ)肝腎，祛風(fēng)除濕，活血通絡(luò)的功效。用于肝腎不足，風(fēng)寒濕痹，骨質(zhì)疏松，骨質(zhì)增生引起的腰腿酸痛、肢體麻木等癥[1]。其中淫羊藿具有補(bǔ)腎陽，強(qiáng)筋骨，袪風(fēng)濕的作用，用于腎陽虛衰，陽痿遺精，筋骨痿軟，風(fēng)濕痹痛，麻木拘攣[2](P308)。淫羊藿藥材中主要含有淫羊藿苷、淫羊藿次苷、巫山淫羊藿苷、寶藿苷VI、生物堿、揮發(fā)油等。本實(shí)驗(yàn)選用淫羊藿苷為對(duì)照對(duì)藥品中的淫羊藿進(jìn)行定性鑒別，該方法簡(jiǎn)便易操作，結(jié)果重復(fù)性較好。

1 儀器與試藥

SK250LHC超聲波清洗器(上海科導(dǎo)儀器有限公司)，梅特勒AG135電子天平，卡瑪Linomat5半自動(dòng)點(diǎn)樣儀。淫羊藿苷對(duì)照品(批號(hào)：110737-200415)購于中國藥品生物制品檢定所；樣品和缺淫羊藿陰性樣品由貴州盛世龍方制藥有限公司提供，硅膠G預(yù)制板(批號(hào)：20090406)和硅膠G(批號(hào)：0110916)(青島海洋化工廠分廠)；水為純凈水(娃哈哈)；其它試劑均為分析純。

2 方法[3]與結(jié)果

2.1 提取方法的考察 分別稱取金烏骨通膠囊內(nèi)容物細(xì)粉1.0g，按下述方法處理：①加乙酸乙酯10ml，超聲提取15分鐘；②加70%乙醇溶液10ml，超聲提取30分鐘；③加甲醇10ml，超聲提取30分鐘；④加乙醇20ml，超聲提取30分鐘[2](P307)。提取后，放冷，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状?ml超聲使溶解，靜置，取上清液為供試品溶液①-④。取缺淫羊藿陰性1.0g，照方法④提取，作為陰性對(duì)照溶液。另取淫羊藿苷對(duì)照品適量，加甲醇制成1mg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。

取上述各供試品溶液、陰性對(duì)照溶液、對(duì)照品溶液各3μl，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水 (13.5:6:2 ) 靜置至澄清的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果方法①無對(duì)應(yīng)主斑點(diǎn)，方法②③主斑點(diǎn)清晰但背景較深，方法④主斑點(diǎn)清晰且背景較淺，陰性對(duì)照無干擾。故選取方法④為淫羊藿苷薄層鑒別的提取方法。

2.2 展開系統(tǒng)的考察 取三個(gè)批號(hào)金烏骨通膠囊按提取方法④分別制成供試品溶液。取供試品溶液、陰性對(duì)照溶液和對(duì)照品溶液各3μl，點(diǎn)于薄層板上，分別在下述各展開系統(tǒng)中展開：①硅膠G板，氯仿-甲醇-丁酮 (1:2:2)；②硅膠G板，氯仿-甲醇-水 (13.5:6:2)靜置至澄清的下層溶液；③硅膠H板，乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水 (10:1:1:1)[2](P307)。展開后，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果系統(tǒng)①分離效果差，系統(tǒng)②分離效果較好，主斑點(diǎn)位置居中，陰性無干擾，背景干擾小，系統(tǒng)③主斑點(diǎn)位置對(duì)應(yīng)不理想，陰性對(duì)照無干擾。故選取系統(tǒng)②為淫羊藿苷薄層鑒別展開系統(tǒng)。

2.3 顯色方法的考察 取三個(gè)批號(hào)金烏骨通膠囊按提取方法④分別制成供試品溶液。取供試品溶液、陰性對(duì)照溶液和對(duì)照品溶液各3μl，分別點(diǎn)于硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(13.5:6:2)靜置至澄清的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，分別以下述各方法顯色：①噴以5%三氯化鐵乙醇溶液，晾干，日光下檢視，顯墨綠色斑點(diǎn)；②噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，在紫外燈(365nm)下檢視，顯橙紅色熒光斑點(diǎn)；③噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃下加熱，日光下檢視，顯黃綠色斑點(diǎn)。結(jié)果顯色劑①斑點(diǎn)略顯模糊邊界不明顯，色彩與背景對(duì)比不強(qiáng)；顯色劑②斑點(diǎn)熒光較弱，與背景熒光混合較嚴(yán)重，斑點(diǎn)邊界不明顯，不易辨識(shí)；顯色劑③斑點(diǎn)顏色鮮明，與背景顏色對(duì)比較強(qiáng)，斑點(diǎn)邊界明顯；陰性對(duì)照無干擾。故選取顯色方法③為淫羊藿苷薄層鑒別的顯色方法。

2.4 點(diǎn)樣量的考察 取金烏骨通膠囊按提取方法④制成供試品溶液。取供試品溶液2、3、4、5、6μl、陰性對(duì)照溶液和對(duì)照品溶液各3μl，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水 ( 13.5:6:2)靜置至澄清的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果點(diǎn)樣量較小斑點(diǎn)不夠清晰，點(diǎn)樣量較大則背景顏色較深，點(diǎn)樣量5μl時(shí)斑點(diǎn)顯色清晰且背景干擾較小，陰性對(duì)照無干擾。

故選取5μl為淫羊藿苷薄層鑒別的點(diǎn)樣體積。

2.5 耐用性考察 按照國家藥典委員會(huì)“中藥分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則實(shí)施細(xì)則”的相關(guān)要求，進(jìn)行以下耐用性考察：①溫度的考察：進(jìn)行了低溫(4℃)、室溫(24℃)、高溫(40℃)的考察，分離結(jié)果均較好。②濕度的考察：進(jìn)行了低濕度(25%)、中等濕度(60%)和高濕度(75%)的考察，結(jié)果表明在上述條件下都能較好分離。

3 討論

淫羊藿為金烏骨通膠囊中的重要組成藥味，在生產(chǎn)中的質(zhì)量控制和流通中監(jiān)督檢查均應(yīng)將其作為藥品質(zhì)量的指標(biāo)之一，而原標(biāo)準(zhǔn)中此項(xiàng)目暫缺，本方法可對(duì)其進(jìn)行有效補(bǔ)充。根據(jù)上述不同條件下的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行組合，金烏骨通膠囊中淫羊藿苷的薄層色譜鑒別方法為：取本品內(nèi)容物1.0g，加乙醇20ml，超聲提取30分鐘，放冷，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状?ml超聲使溶解，靜置，取上清液為供試品溶液。取淫羊藿苷對(duì)照品適量，加甲醇制成1mg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(13.5:6:2)靜置至澄清的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃下加熱，日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同黃綠色的斑點(diǎn)。

展開系統(tǒng)的考察中，系統(tǒng)③為淫羊藿薄層鑒別的經(jīng)典系統(tǒng)，但在反復(fù)試驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)其展開效果并不理想，雖斑點(diǎn)清晰位置適中，但由于藥品中其他物質(zhì)的干擾，對(duì)照品主斑點(diǎn)位置總是明顯高于樣品中主斑點(diǎn)位置，故最終選用無此現(xiàn)象的系統(tǒng)②。缺淫羊藿陰性對(duì)照在此薄層色譜系統(tǒng)中無干擾，故可采用淫羊藿苷作為對(duì)照品溶液對(duì)藥品中的淫羊藿進(jìn)行定性鑒別；色譜中主斑點(diǎn)清晰明顯，位置居中，無論是預(yù)制板還是手工板，結(jié)果穩(wěn)定，重現(xiàn)性較好。此方法可作為金烏骨通膠囊中淫羊藿藥材的薄層色譜定性鑒別。

[1]WS-10140(ZD-0140)-2002，金烏骨通膠囊[S].

[2]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

國家藥典委員會(huì)國家藥品標(biāo)準(zhǔn)提高研究課題(項(xiàng)目編號(hào)：2011-530)。

R284.1

A

1007-8517(2014)02-0012-02

2013.12.07)