三種中藥對解脲支原體的體外抑制實驗研究

陳日壽+丁秀芬

[摘要] 目的 本研究分析了莪術、魚腥草、土茯苓三種中藥對解脲支原體（Uu）臨床分離株的體外抑菌作用，并確定了它們的最小抑菌濃度（MIC）。方法 采集臨床標本，在體外培養獲得Uu臨床分離菌株，將三種中藥各制成藥液，用微量稀釋法測定各中藥對Uu臨床分離菌株的最小抑菌濃度。 結果 魚腥草MIC為3.90mg/mL，莪術MIC為3.90mg/mL，土茯苓MIC為7.81mg/mL。 結論 三種中藥對Uu臨床分離菌株均顯示較好的體外抑制作用，效果以魚腥草最佳，莪術次之，土茯苓最后。

[關鍵詞] 中藥；解脲支原體；最小抑菌濃度；體外作用

[中圖分類號] R285.5???[文獻標識碼] A???[文章編號] 2095-0616（2014）11-36-03

An experimental study of the effects of three types of traditional Chinese medicine on in vitro inhibition of ureaplasma urealyticum

CHEN?Rishou??DING?Xiufen

Clinical Laboratory,Dongguan Hospital of Traditional Chinese Medicine,Dongguan 523000,China

[Abstract] Objective To analyze the in vitro antibacterial effect of three types of traditional Chinese medicine (TCM) of curcuma zedoary,houttuynia cordata and rhizoma smilacis glabrae on clinical isolates of ureaplasma urealyticum (Uu),and to confirm their minimum inhibitory concentration (MIC). MethodsClinical samples were collected and cultured in vitro to obtain clinical isolates of Uu.Three types of TCM were made into solutions,and the MIC of each TCM against clinical isolates were measured via microdilution method. Results The MIC of houttuynia cordata was 3.90 mg/mL,the MIC of curcuma zedoary was 3.90 mg/mL and the MIC of rhizoma smilacis glabrae was 7.81 mg/mL. Conclusion The three types of TCM shows a favorable in vitro inhibitory effect against clinical isolates of Uu.The houttuynia cordata has the best effect,the curcuma zedoary the second and the rhizoma smilacis glabrae,the worst.

[Key words] Traditional Chinese medicine(TCM);Ureaplasma urealyticum (Uu);Minimum inhibitory concentration (MIC);In vitro

解脲支原體（urea plasma urealyticum，Uu）是介于細菌和病毒之間、目前所知的能獨立生活的最小微生物。它主要通過性接觸傳播，可導致非淋菌性尿道炎、子宮內膜炎等疾病，嚴重者可致女性不孕不育癥、自然流產，且高濃度Uu感染的女性患不孕癥的危險比正常人群相對高出近3倍[1]。臨床上常用大環內酯類及喹諾酮類抗菌藥治療Uu感染，但由于廣譜抗生素的廣泛應用以及不正確使用等原因，Uu的耐藥現象越來越常見。近年來以單味中藥或復方中藥制劑治療泌尿生殖道Uu獲得較為滿意的療效，且具有副作用少的優點[2-3]。據資料記載，莪術含有姜黃素、莪術醇、異莪術醇等20多種成分，在抗病毒、抗菌和抗腫瘤方面具有較好的作用[4-5]；魚腥草化學成分復雜，主要成分有揮發油、生物堿、黃酮、多糖和有機酸等，具有較好的抗炎活性[6-8]；土茯苓含多種化學成分，有糖類、有機酸黃酮苷類、皂苷類及揮發油成分，具解毒利濕、抗菌消炎功效[9-11]。本實驗以本院就診女性患者生殖道Uu臨床菌株作為標本，旨在研究莪術、魚腥草及土茯苓對Uu的體外抑菌作用，對本院研發治療Uu感染的新型復方洗液作實驗依據。

1?材料與方法

1.1?試劑及中藥的制備

本實驗采用珠海迪爾生物工程有限公司生產的DL Medical液基型支原體培養基，實驗所用的莪術、魚腥草、土茯苓生藥均來自本院中藥房。秤取100g生藥，置燒杯中略粉碎后，加入200~300mL蒸餾水浸泡30min，用電爐煎熱15～30min，過濾，留取濾液。向生藥沉渣再加入適量蒸餾水以相同方法煎制，過濾，沉渣棄去，混合2份濾液。冷卻至室溫后以3000r/min離心15min，留取上層清液，蒸發或補充蒸餾水，將最終濃度調整為1g/mL。以50%枸櫞酸鈉調整pH值在5.5～6.0間。分裝，置高壓鍋中121℃，15min滅菌。4℃保存備用。

1.2?病例選擇及標本留取

選取2013年11月1日～2014年2月1日期間已確診為生殖道Uu感染，并尚未用抗菌藥治療的女性患者共98例。標本由本院婦科醫生用無菌棉拭子去除陰道多余分泌物，再用無菌棉拭子伸入宮頸口1～2cm旋轉并停留30s取出標本，立即接種于支原體液體培養基中，送檢。

1.3?培養及藥敏試驗、

1.3.1?Uu培養?參考Robertson JA研究中的方法[12]，Uu經過三次傳代培養，菌液調整為8×104CCU/mL作為工作菌液。

1.3.2?中藥MIC的確定?先將液體培養基、工作菌液、中藥制劑96孔細胞培養板置于37℃恒溫箱中預熱2h。參考Kenny等[13]的研究方法，稍加修改，連續倍比稀釋中藥。（1）在96孔（8×12）無菌細胞培養板中第1孔加入液體培養基75μL，第12孔加入100μL，第3～11孔加25μL；（2）第2、3孔各加25μL中藥制劑；（3）從第3孔開始，用微量移液器反復吹打混勻，吸出25μL至下一孔，用微量移液器反復吹打混勻，依次類推，直至第1l孔，混勻后吸出25μL棄去；（4）第2～11孔加培養基50μL；（5）第1～11孔加入工作菌液25μL，即第1孔為菌液對照，第12孔為陰性對照，至此，所有孔內液體最終體積為100μL。從3～11孔的中藥濃度依次為250、125、62.5、31.25、15.63、7.81、3.90、1.95、0.97、0.48mg/mL，共10個稀釋度。（6）加樣完畢后，每孔滴加2滴無菌石蠟油，合蓋置37℃恒溫孵育箱培養24h，觀察結果。當菌液對照由黃色變為紅色即陽性，陰性對照為陰性時，判讀結果，以不出現顏色變化的最小藥物濃度為該種中藥對該例Uu的最小抑制濃度（MIC）。

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2?結果

經分析，結果表明魚腥草MIC范圍為3.90～62.5mg/mL，莪術MIC范圍為3.90～62.5mg/mL，土茯苓MIC范圍為7.81～62.5mg/mL。結合MIC50及MIC90分析，本實驗所選的Uu臨床菌株對魚腥草有較好的敏感性，莪術次之，土茯苓居第3位。具體結果見表1。

表1??中藥對UU臨床菌株體外抑制試驗MIC（mg/mL）

中藥 范圍 MIC50 MIC90

魚腥草 3.90～62.5 15.63 62.5

莪術 3.90～62.5 31.25 62.5

土茯苓 7.81～62.5 31.25 62.5

3?討論

目前治療泌尿生殖道Uu感染仍主要依靠喹諾酮類或大環內酯類抗菌藥如環丙沙星、紅霉素治療，但隨著廣譜抗菌藥的普及，以及使用不當等原因，耐藥的Uu菌株愈來愈常見，Uu對喹諾酮類抗菌藥的耐藥現象可高達60%[14]。以中藥治療泌尿生殖道Uu感染，具有毒副作用較少的優點，臨床試驗及治療也獲得了較滿意效果。

中藥對支原體的MIC目前國內尚無統一標準，參照同類實驗[15]，MIC≤7.81g/L為敏感，MIC介于7.81～250g/L為中度敏感，MIC＞250g/L為不敏感。本實驗結果顯示Uu臨床菌株對三種中藥在體外均有較好的敏感性，以魚腥草效果最顯著。三種中藥均具有清熱解毒、健脾護肝、抗炎抗菌作用[8-9]。莪術在體內具有的抗腫瘤、抗炎的作用，且其在體內的抗Uu作用也被證實為有效[3]，本實驗莪術的抗Uu體外抑制試驗結果，從另一側面為莪術的抗Uu療效提供又一佐證。魚腥草和土茯苓能增強白細胞的吞噬作用，從而增強機體免疫功能，已用于治療呼吸道病毒與細菌感染的疾病[16]。其緩解炎癥引起的水腫、疼痛效果也頗為顯著[17]。本實驗結果顯示魚腥草及土茯苓在體外試驗中均具有較好的抗Uu作用，值得進一步研究。

中藥的化學成分復雜，關于其中內含的化合物及其成分作用的研究仍然較少。中藥治療雖具有毒副作用小的優點，但魚腥草注射液引起個體過敏反應的報道并不少見，可見中藥成分的藥理作用及抑制Uu的機制仍有待考究，其體內外作用結果也有所差別。本實驗旨在初步探討莪術、魚腥草及土茯苓對Uu臨床菌株的體外抑制作用，但尚未研究對Uu的14種不同血清型標準菌株進行體外抑制試驗，以及對Uu臨床菌株進行血清型分組。另外，本實驗的樣本量還存在偏少的不足。盡管如此，本次實驗初步證明了三種中藥體外抗Uu的有效性，為進一步研究中藥抗Uu作用提供參考及方向。

[參考文獻]

[1] 朱琴芳，石冬敏.女性不孕癥患者解脲脲原體感染調查及藥敏分析[J].中國血液流變學雜志，2008，8（1）：153-165.

[2] 周曉莉，肖曉菲.盆炎降支顆粒劑聯合阿奇霉素治療女性生殖道解脲支原體感染脾虛濕蘊化熱型40例[J].藥物與臨床，2010，17（19）：76-78.

[3] 岳源，武雙嬋.莪術油治療解脲支原體感染的作用研究[J].中國中醫藥，2010，8（13）：201.

[4] 朱善嵐，黃品芳，王友芳.莪術的藥理作用研究進展[J].海峽藥學，2007，19：9-11.

[5] 徐立春，邊可君，劉志敏，等.天然藥物莪術醇抑制腫瘤細胞生長及RNA合成影響的初步研究[J].腫瘤，2005，25：570-572.

[6] 陳婧，方建國，吳方建.魚腥草抗炎藥理作用機制的研究進展[J].中草藥，2014，45（2）：284-288.

[7] 張美玉，李貽奎，閆位娟，等.魚腥草注射液新制劑抗炎解熱作用及其機制研究[J].中國新藥雜志，2010，19（9）：775-779.

[8] 張薇，盧芳國.魚腥草中揮發油的提取分析及其抗菌抗病毒作用的研究[J].實用預防醫學，2008，15（2）：312-316.

[9] 殷網虎，袁武軍，曹美琳.土茯苓配方顆粒對臨床常見致病菌的抗菌研究[J].中國中醫急癥，2011，20（12）：1957-1958.

[10] 王建平，張海燕，傅旭春.土茯苓的化學成分和藥理作用研究進展[J].海峽藥學，2013，25：42-44.

[11] 邱光清，許連好，林潔娜，等.土茯苓皂苷的抗腫瘤作用研究[J].中藥藥理與臨床，2001，17（5）：14-15.

[12] Robertson JA，Stemke GW.Expanded serotyping scheme for Ureaplasma urealyticum strains isolated from humans[J].J Clin Microbiol，1982，15（5）：873-878.

[13] Kenny GE，Hooton TM，Roberts MC，et al.Susceptibilities of Genital Mycoplasmas to the Newer Quinolones as Determined by the Agar Dilution Method[J]. Antimicrobial Agents and Chemotherapy，1989，33：103-107.

[14] 張克良，劉二平，姜毓清.9029例女性生殖道感染支原體屬檢測及耐藥性分析[J].實用臨床醫藥雜志，2013，17（19）：163-164.

[15] 劉忠儀，張國威，何志云.解脲支原體中藥藥敏試驗[J].中華皮膚科雜志，1996，29（5）：349-351.

[16] 上海第二醫學院附屬第三人民醫院氣管炎防治組.合成魚腥草素治療慢性氣管炎臨床療效及免疫實驗觀察[J].新醫藥學雜志，1973（7）：25.

[17] 顧靜蓉，馮莉莉，羅建偉，等.魚腥草的藥理作用及臨床應用新進展[J].海峽藥學，2006，18（14）：121-123.

（收稿日期：2014-03-10）

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2?結果

經分析，結果表明魚腥草MIC范圍為3.90～62.5mg/mL，莪術MIC范圍為3.90～62.5mg/mL，土茯苓MIC范圍為7.81～62.5mg/mL。結合MIC50及MIC90分析，本實驗所選的Uu臨床菌株對魚腥草有較好的敏感性，莪術次之，土茯苓居第3位。具體結果見表1。

表1??中藥對UU臨床菌株體外抑制試驗MIC（mg/mL）

中藥 范圍 MIC50 MIC90

魚腥草 3.90～62.5 15.63 62.5

莪術 3.90～62.5 31.25 62.5

土茯苓 7.81～62.5 31.25 62.5

3?討論

目前治療泌尿生殖道Uu感染仍主要依靠喹諾酮類或大環內酯類抗菌藥如環丙沙星、紅霉素治療，但隨著廣譜抗菌藥的普及，以及使用不當等原因，耐藥的Uu菌株愈來愈常見，Uu對喹諾酮類抗菌藥的耐藥現象可高達60%[14]。以中藥治療泌尿生殖道Uu感染，具有毒副作用較少的優點，臨床試驗及治療也獲得了較滿意效果。

中藥對支原體的MIC目前國內尚無統一標準，參照同類實驗[15]，MIC≤7.81g/L為敏感，MIC介于7.81～250g/L為中度敏感，MIC＞250g/L為不敏感。本實驗結果顯示Uu臨床菌株對三種中藥在體外均有較好的敏感性，以魚腥草效果最顯著。三種中藥均具有清熱解毒、健脾護肝、抗炎抗菌作用[8-9]。莪術在體內具有的抗腫瘤、抗炎的作用，且其在體內的抗Uu作用也被證實為有效[3]，本實驗莪術的抗Uu體外抑制試驗結果，從另一側面為莪術的抗Uu療效提供又一佐證。魚腥草和土茯苓能增強白細胞的吞噬作用，從而增強機體免疫功能，已用于治療呼吸道病毒與細菌感染的疾病[16]。其緩解炎癥引起的水腫、疼痛效果也頗為顯著[17]。本實驗結果顯示魚腥草及土茯苓在體外試驗中均具有較好的抗Uu作用，值得進一步研究。

中藥的化學成分復雜，關于其中內含的化合物及其成分作用的研究仍然較少。中藥治療雖具有毒副作用小的優點，但魚腥草注射液引起個體過敏反應的報道并不少見，可見中藥成分的藥理作用及抑制Uu的機制仍有待考究，其體內外作用結果也有所差別。本實驗旨在初步探討莪術、魚腥草及土茯苓對Uu臨床菌株的體外抑制作用，但尚未研究對Uu的14種不同血清型標準菌株進行體外抑制試驗，以及對Uu臨床菌株進行血清型分組。另外，本實驗的樣本量還存在偏少的不足。盡管如此，本次實驗初步證明了三種中藥體外抗Uu的有效性，為進一步研究中藥抗Uu作用提供參考及方向。

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（收稿日期：2014-03-10）

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2?結果

經分析，結果表明魚腥草MIC范圍為3.90～62.5mg/mL，莪術MIC范圍為3.90～62.5mg/mL，土茯苓MIC范圍為7.81～62.5mg/mL。結合MIC50及MIC90分析，本實驗所選的Uu臨床菌株對魚腥草有較好的敏感性，莪術次之，土茯苓居第3位。具體結果見表1。

表1??中藥對UU臨床菌株體外抑制試驗MIC（mg/mL）

中藥 范圍 MIC50 MIC90

魚腥草 3.90～62.5 15.63 62.5

莪術 3.90～62.5 31.25 62.5

土茯苓 7.81～62.5 31.25 62.5

3?討論

目前治療泌尿生殖道Uu感染仍主要依靠喹諾酮類或大環內酯類抗菌藥如環丙沙星、紅霉素治療，但隨著廣譜抗菌藥的普及，以及使用不當等原因，耐藥的Uu菌株愈來愈常見，Uu對喹諾酮類抗菌藥的耐藥現象可高達60%[14]。以中藥治療泌尿生殖道Uu感染，具有毒副作用較少的優點，臨床試驗及治療也獲得了較滿意效果。

中藥對支原體的MIC目前國內尚無統一標準，參照同類實驗[15]，MIC≤7.81g/L為敏感，MIC介于7.81～250g/L為中度敏感，MIC＞250g/L為不敏感。本實驗結果顯示Uu臨床菌株對三種中藥在體外均有較好的敏感性，以魚腥草效果最顯著。三種中藥均具有清熱解毒、健脾護肝、抗炎抗菌作用[8-9]。莪術在體內具有的抗腫瘤、抗炎的作用，且其在體內的抗Uu作用也被證實為有效[3]，本實驗莪術的抗Uu體外抑制試驗結果，從另一側面為莪術的抗Uu療效提供又一佐證。魚腥草和土茯苓能增強白細胞的吞噬作用，從而增強機體免疫功能，已用于治療呼吸道病毒與細菌感染的疾病[16]。其緩解炎癥引起的水腫、疼痛效果也頗為顯著[17]。本實驗結果顯示魚腥草及土茯苓在體外試驗中均具有較好的抗Uu作用，值得進一步研究。

中藥的化學成分復雜，關于其中內含的化合物及其成分作用的研究仍然較少。中藥治療雖具有毒副作用小的優點，但魚腥草注射液引起個體過敏反應的報道并不少見，可見中藥成分的藥理作用及抑制Uu的機制仍有待考究，其體內外作用結果也有所差別。本實驗旨在初步探討莪術、魚腥草及土茯苓對Uu臨床菌株的體外抑制作用，但尚未研究對Uu的14種不同血清型標準菌株進行體外抑制試驗，以及對Uu臨床菌株進行血清型分組。另外，本實驗的樣本量還存在偏少的不足。盡管如此，本次實驗初步證明了三種中藥體外抗Uu的有效性，為進一步研究中藥抗Uu作用提供參考及方向。

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[7] 張美玉，李貽奎，閆位娟，等.魚腥草注射液新制劑抗炎解熱作用及其機制研究[J].中國新藥雜志，2010，19（9）：775-779.

[8] 張薇，盧芳國.魚腥草中揮發油的提取分析及其抗菌抗病毒作用的研究[J].實用預防醫學，2008，15（2）：312-316.

[9] 殷網虎，袁武軍，曹美琳.土茯苓配方顆粒對臨床常見致病菌的抗菌研究[J].中國中醫急癥，2011，20（12）：1957-1958.

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[14] 張克良，劉二平，姜毓清.9029例女性生殖道感染支原體屬檢測及耐藥性分析[J].實用臨床醫藥雜志，2013，17（19）：163-164.

[15] 劉忠儀，張國威，何志云.解脲支原體中藥藥敏試驗[J].中華皮膚科雜志，1996，29（5）：349-351.

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[17] 顧靜蓉，馮莉莉，羅建偉，等.魚腥草的藥理作用及臨床應用新進展[J].海峽藥學，2006，18（14）：121-123.

（收稿日期：2014-03-10）

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