老年胃腺癌患者癌組織Nanog、Oct-4和Furin的表達及意義

才保加 祁玉娟 周 為 王曉龍 馬玉斌 馬曉明

(青海大學附屬醫院胃腸外科，青海 西寧 810001)

胃腺癌病變進展快，多數患者預后較差。老年患者由于常伴有退行性改變及萎縮性變化，因此其癌變過程多是基因和蛋白異常表達引起的。研究認為多種蛋白表達增高是促進腫瘤進展的重要因素〔1〕。胚胎特異性基因Nanog和Oct-4均為同源域轉錄因子，在多種生物細胞的分化中起重要作用〔2〕。研究顯示Nanog和Oct-4基因的成人干細胞可能是癌變起源的靶細胞之一，即Nanog和Oct-4蛋白表達升高時，可能對促進腫瘤發生有一定作用〔3〕。Furin是蛋白前體加工酶家族中的重要成員，與腫瘤的轉化發展及轉移密切相關〔4〕。本研究旨在探討老年胃腺癌患者癌組織Nanog、Oct-4和Furin的表達及臨床意義。

1 材料和方法

1.1臨床資料 2009年1月至2013年6月在我院行胃腺癌根治手術的老年患者140例作為觀察組，術后常規留取新鮮組織，并置于-80°冰箱中凍存。均符合世界衛生組織中的診斷和分型標準。其中男80例，女60例，年齡60～82歲，平均(68.9±5.9)歲。其中高分化20例，中分化30例，低分化90例。術前均未進行放、化療。同時選取部分病例的切端，經病理證實為正常胃黏膜，共95例作為對照組，其中男50例，女45例，年齡60～81歲，平均(68.7±6.4)歲。兩組一般臨床資料無明顯差別(P>0.05)，具有可比性。

1.2流式細胞術檢測Nanog、Oct-4和Furin蛋白的表達 Nanog、Oct-4和Furin蛋白的濃縮液均購自武漢博士德生物工程有限公司。依不同比例進行稀釋，并應用免疫組化法進行預實驗，選擇最佳配比濃度進行流式細胞的正式實驗。制備1×106的單細胞懸液，取1 ml，嚴格按實驗步驟加入一抗蛋白和二抗后，上機檢測，應用美國BD公司的流式細胞儀進行檢測，設陽性對照和陰性對照，應用系統自帶的軟件分析。嚴格質量控制，減少人為誤差。

1.3Nanog、Oct-4和Furin結果的判定方法 應用熒光指數(FI)表示Nanog、Oct-4或Furin蛋白表達的相對含量。

1.4統計學方法 應用SAS6.12軟件進行t檢驗和相關分析。

2 結 果

2.1兩組Nanog、Oct-4和Furin蛋白表達量的比較 觀察組中Nanog、Oct-4和Furin蛋白的表達量明顯高于對照組(P<0.000 1)，見表1。

2.2觀察組不同臨床特征Nanog、Oct-4和Furin蛋白表達的比較 觀察組Nanog、Oct-4和Furin的表達量與腫瘤的浸潤深度、臨床分期、分化程度、腫瘤最大徑均密切相關。見表2。

2.3觀察組Nanog、Oct-4和Furin表達相關性 Nanog和Oct-4的表達呈正相關(r=0.45，P=0.035 1)。而Nanog、Oct-4和Furin的表達均未見明顯相關性(P>0.05)。

表1 兩組Nanog、Oct-4和Furin蛋白表達的比較

表2 觀察組不同臨床特征Nanog、Oct-4和Furin蛋白表達的比較

3 討 論

老年人胃腺癌發病機制目前尚不清楚。多項研究認為癌基因和干細胞的活化可以促進腫瘤的進展〔5〕。Nanog是胚胎干細胞中特異表達的基因，是維持干細胞自我增殖和多能性的關鍵因子〔6〕。Nanog屬于ANTP類NK家族基因，在人類定位于12號染色體12p13區，大小為7.84 Mb。Nanog的cDNA由2 184個核苷酸組成，包含一個開放閱讀框，編碼305個氨基酸〔7〕。有觀點認為Nanog是多能性轉錄系統的核心元素，是干細胞增殖所必需的，也是保持分化潛能的重要因子〔8,9〕。Oct-4基因是參與調控胚胎干細胞自我更新和維持其全能性的最重要的轉錄因子之一〔10〕，也是細胞外基質全能性標志，能有效地維持細胞外基質正常的未分化狀態并促進細胞的增殖反應〔11,12〕。Furin參與許多重要的生理過程，如多肽與蛋白質激素的合成與分泌、膜受體的成熟、血漿蛋白前體的激活等〔13〕。這些蛋白質在發揮活性之前需經蛋白轉化酶對其前體進行切割〔14〕。Furin在多種組織中均有表達，在細胞內主要定位于反式高爾基體，在細胞膜和細胞質中也有一定的分布，并在這些部位參與多種底物分子的加工活化〔15〕。在其眾多底物中，有許多與腫瘤的轉化、發展浸潤與轉移密切相關，因此探討Furin與腫瘤的關系有重要意義〔16〕。

本研究結果提示Nanog高表達是促進腫瘤發生和進展的因素，還證明了胃腺癌中存在一種干細胞樣的腫瘤細胞，但是不能就此斷定表達Nanog的細胞就是胃腺癌的干細胞，還需要更多的證據證明腫瘤作為干細胞起源及對腫瘤發生的影響作用。Nanog、Oct-4和Furin 3種蛋白參與腫瘤的浸潤性生長、分化過程及腫瘤進展。聯合檢測3種蛋白的表達可能對判斷預后有一定影響，即Nanog、Oct-4和Furin高表達提示不良預后。Nanog和Oct-4二者可能具有協同正向作用，而Nanog和Oct-4與Furin均為不同調節的通路。也有觀點認為Nanog和Oct-4在自我增殖中起關鍵性作用，多條通路如WNT、SHH和NOTCH等可能與Nanog、Oct-4的調節有關〔9〕。但是其具體調節通路需要更多實驗證實。Nanog、Oct-4和Furin高表達時，腫瘤細胞生長快，體積增大，侵襲能力增加〔17～19〕。

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