慢性腦供血不足患者早期認知障礙的血液標志物

賈曉靜 張靖涵 賈少杰

(北華大學附屬醫院骨外二科，吉林 吉林 132001)

慢性腦供血不足(CCCI)因其臨床發病率較高、可干預性較強而逐漸被多數學者所熟識〔1，2〕。但因其發病具有隱襲性，早期癥狀輕微、檢測手段繁瑣不易被發現而延誤，直至發展成癡呆或缺血性腦卒中〔3，4〕。本研究應用蒙特利爾認知評估量表(MoCA)、簡易精神狀態量表(MMSE)對CCCI患者進行綜合檢測評分，對入選認知障礙的CCCI患者進行血液指標：S100β、血漿酸性磷脂(AP)及相關血液檢查(如血糖、血脂、血粘等)，試圖找到一種或多種血清學標志物對CCCI患者是否存在認知障礙進行初步評價，以便提高檢測效率，為早預防、早干預、早治療找到一個新的思路，避免進一步加重發展成癡呆或缺血性腦卒中。

1 材料與方法

1.1一般資料 按照2000年日本腦卒中學會診斷標準最新修訂版選擇2011年8月至2012年10月在北華大學附屬醫院神經內科門診及住院治療的患者57例為CCCI組，其中男30例，女27例，平均年齡 (64.33±6.98)歲；健康體檢人員69例為正常對照組(C組)，男33例，女36例，平均年齡(62.83± 5.75)歲。排除其他疾病導致的認知障礙，如Alzheimer病(AD)、正常顱壓腦積水、多發性硬化、腦腫瘤、一氧化碳中毒、前庭-迷路疾病、外傷性疾病、貧血等。

應用MMSE量表和MoCA量表對入選的CCCI組患者進行認知障礙的檢測，將有認知障礙的46例患者及健康組人群經認知評定后無認知障礙的53例患者采集空腹血液，檢測S100β、AP、血糖、血脂、血黏度等相關指標。

1.2方法

1.2.1標本采集 對測試人群一次性采集空腹靜脈血15 ml，其中4 ml置于加入促凝劑的潔凈玻璃管內，2～3 h內離心，3 000 r/min離心10 min，取上清液置于-70℃的冰箱內保存待S100β蛋白測定。另4 ml置于特殊抗凝管內，60 min內離心，8 000 r/min離心10 min，取上層血漿用于測定AP。余血液常規送我院檢驗科進行血糖、血脂等檢測。為避免影響測定結果，要求測試者血液檢測前2 d未進食大量高蛋白、高脂肪、高嘌呤食物及飲酒，采集標本血樣過程中無溶血。

1.2.2測定方法 S100β蛋白測定的試劑采用北京泰福仕科技開發公司試劑盒，使用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)測定樣品中S100β蛋白濃度。AP測定套裝試劑盒購自北京泰福仕科技開發公司，按試劑盒說操作，主要步驟為磷脂抽提、分離、過濾、顯色。血清生化指標采用全自動生化檢測儀進行常規檢查。

2 結 果

2.1兩組病例血清學分析 CCCI組S100β及AP濃度明顯高于正常對照組(均P<0.000 1)。見表1。

表1 兩組人群血清S100β及AP檢測指標

2.2兩組病例的空腹血糖、血脂情況分析 CCCI組的血脂濃度均高于健康對照組，其中CCCI組甘油三酯(TG)與低密度脂蛋白水平(LDL)明顯高于對照組(P<0.001)。其余檢測參數兩組之間無明顯差異性。見表2。

表2 兩組人群空腹血糖、血脂濃度比較

2.3血清指標與CCCI患者認知情況的相關性 以患者MoCA總分為應變量(Y)，S100β濃度為自變量(X1)，AP濃度為自變量(X2)，進行相關性分析。CCCI患者的MoCA量表認知功能得分與其血液S100β、AP檢測濃度呈明顯負相關(Rs=-0.972,P<0.01)，MoCA得分越低S100β及AP濃度超出正常水平越多。而MoCA得分越低與S100β和AP濃度越高時患者認知障礙越嚴重。見圖1，圖2。

圖1 CCCI組患者MoCA評分與S100β濃度的相關性分析

圖2 CCCI組患者MoCA評分與AP濃度的相關性分析

3 討 論

CCCI不僅嚴重損傷腦細胞，同時破壞了血腦屏障，使原本僅存在于中樞神經組織內的一些蛋白或酶類，從壞死或凋亡的腦細胞中釋放出來，通過被破壞的血腦屏障進入血液，所以監測患者血清中相關蛋白或酶類的濃度變化，能夠較可靠地反映腦損傷的嚴重程度，亦有可能對腦認知損傷的治療及預后有一定的預測意義〔5〕。

S100蛋白是一種鈣離子結合蛋白，由α、β兩種亞基組成。而S100β蛋白主要存在于腦中(約占96%)，較其他亞型更具有活性，因此被認為是腦內特異蛋白〔6〕。S100β蛋白主要分布于中樞神經系統(CNS)膠質細胞中，由星形膠質細胞合成，其他少數腫瘤細胞(如：神經膠質瘤、黑色素瘤等)、不同區域的神經元、突觸小體和突觸膜上也存在S100β蛋白的表達〔7〕。且S100β蛋白的半衰期約為25 min，時間較短，由于半衰期很短，因此其持續升高提示可能繼發有腦細胞損傷，監測S100β蛋白水平變化程度可反映腦膠質細胞損傷的嚴重程度。此蛋白的水平變化不僅反映腦膠質細胞損傷的嚴重程度，在眾多研究中發現其還可以調控神經元與膠質細胞的相互作用。在經過大量的動物實驗和臨床研究中發現，S100β蛋白在腦出現缺血、缺氧、外傷及血管性意外時因神經膠質細胞受到刺激后被大量激活、釋放入腦脊液中，再因血腦屏障受損而進入血液。亦有報道顯示，血清S100β蛋白濃度水平與動脈中乳酸鹽的水平呈正相關，血清S100β蛋白濃度水平與平均動脈壓和pH值呈負相關，因此可以看出人體內血清S100β蛋白水平與組織灌注量具有密切關系〔8，9〕。

血漿酸性磷脂AP是在機體缺血、缺氧時磷脂酶D氧化應激的直接產物〔10〕，極性與溶血磷脂酸極為相似。當機體細胞處于應激狀態時，AP被大量釋放，會引起鈣離子的動員，并且會激活或協同激活細胞內各種酶(如蛋白激酶C、磷酸二酯酶、還原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶等)〔11〕。在此基礎上AP還可促進細胞內超氧化物的形成和誘發血小板聚集。雖然目前對于AP的研究甚少，許多發生機制不明確，但根據其極性、來源并綜合眾多臨床實驗研究發現，AP對于腦部缺血、缺氧極為敏感，在腦缺血后24 h內就產生，亦被作為腦缺血標志物，可以及時反映患者當前腦部供血水平。因此AP是缺血性腦卒中早期的預警分子，在缺血性腦病中具有重要的研究價值和廣闊的應用前景。

本研究可以看出血清中S100β蛋白、血脂及血漿酸性磷脂可能參與了CCCI〔12〕?？紤]血清S100β蛋白及AP是CCCI患者認知功能障礙的高危因素，其檢測對CCCI發生認知障礙的診斷和預后具有潛在的臨床價值。但限于受試者數目較少，僅為小樣本實驗，只是初步進行了探討，仍需進一步的大樣本研究及流行病學調查，如可早期識別CCCI引起的認知障礙〔13〕，并了解其影響因素，對其進行及時而有效地干預，防止癡呆形成，將對臨床工作及社會家庭產生十分重要的意義。

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