炙甘草湯加減對急性心肌缺血大鼠心電圖和血清酶學指標的影響

王 智 徐瑞鑫

(黑龍江中醫藥大學附屬第二醫院，黑龍江 哈爾濱 150001)

隨著我國社會經濟的迅速發展和人口的老齡化，心腦血管系統疾病的發病率和死亡率日益增高。急性心肌缺血是最為常見的心血管疾病之一，是中老年人群的多發病。心肌缺血最為明顯的特征是心電圖(ECG)的改變〔1〕以及血清中各種心肌酶濃度的變化〔2〕。炙甘草湯是中醫臨床上治療心動悸、脈結代的經典方劑，具有益氣養血、通陽復脈的功效。本院臨床上常使用炙甘草湯加減治療心肌缺血性疾病，在原方的基礎上去地黃、阿膠、麥門冬、麻仁及大棗，加入開竅藥冰片，益氣通脈作用更強，在實際臨床上取得了令人滿意的療效。但是該方屬于經驗用方，缺乏藥效學的實驗依據。本研究采用結扎冠狀動脈的方法復制急性心肌缺血大鼠的模型，并考察炙甘草湯加減對該模型大鼠ECG以及血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)以及丙二醛(MDA)濃度的影響，以期為該炙甘草湯加減方在臨床上的更廣泛應用奠定前期基礎并提供藥效學實驗依據。

1 材料與方法

1.1實驗材料

1.1.1實驗動物 清潔級Wistar雄性6月齡大鼠30只，體重(240±20)g，由黑龍江中醫藥大學藥物安全性評價中心(GLP)提供，實驗動物許可證號：黑動字第P00700619號。

1.1.2實驗試劑 氨基甲酸乙酯(烏拉坦，上海三浦化工有限公司，批號：20120418)；CK試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司，批號：120530)；LDH試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司，批號：120423)；MDA試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司，批號：120507)。

1.1.3實驗儀器 分析天平(梅特勒-托力多儀器上海有限公司，型號：MS204S)；低速離心機(科大創新股份有限公司中佳分公司，型號：KDC-40)；多道生理記錄儀(美國BIOPAC公司，型號：MP-100)；小動物呼吸機(江西特力麻醉呼吸設備有限公司，型號：TKR-200C)；電子秤(亞太電子天平有限公司，型號：DJ-500A)；半自動生化儀(日立公司，型號：KY2000)；電磁屏蔽室 (常州第二無線電廠，型號：P-22)。

1.2實驗環境 為了避免電磁波對大鼠ECG的干擾，本實驗操作在電磁屏蔽室內進行，屏蔽室內溫度控制在20℃～22℃，相對濕度控制在45%～75%，采用24 h明暗自動控制系統(設定早7：00時和晚19：00時為自動明暗切換時間點)。

1.3實驗方法

1.3.1炙甘草湯加減方的制備 取炙甘草240 g，生姜180 g，桂枝180 g，人參120 g，冰片20 g加8倍量的水，浸泡1 h后，沸水煎煮90 min，過濾，藥渣再加6倍量水，沸后煎煮30 min，再過濾后，合并兩次濾液，濃縮至740 ml，使每毫升濃縮液中含生藥量的濃度為1.0 g/ml，備用。

1.3.2大鼠急性心肌缺血模型的復制 實驗前記錄實驗大鼠Ⅱ導ECG，心電不正常的大鼠剔除。將篩選后雄性Wistar大鼠30只，按照體重區域化隨機分為假手術組，模型組和給藥組，給藥組大鼠每天灌胃炙甘草湯加減方16 ml/kg，假手術組和模型組灌胃給予等體積的生理鹽水，連續14 d，于末次給藥后，給大鼠腹腔注射10%的烏拉坦麻醉(1 g/kg)，仰位固定，剪開頸部毛皮，剝離肌肉，暴露氣管，行氣管插管〔3〕，連接小動物呼吸機，呼吸頻率設定為90次/min，呼吸比為1∶1。將大鼠左側胸部去毛，在左側第3～4肋間開胸，輕壓右側胸部，暴露心臟，剝離心包膜，在肺動脈圓錐與左心耳之間，左心耳下緣約2～3 mm處進針結扎左冠狀動脈前降支，假手術組只穿線不結扎，以排除手術對大鼠造成的影響。縫合肌肉層及毛皮層，采用帶注射器的膠管，邊縫合邊抽出胸腔內空氣，以免造成氣胸〔4〕。

1.3.3實驗指標的監測 采用生理記錄儀監測大鼠的Ⅱ導ECG，并記錄大鼠冠狀動脈結扎30、60 min、2、4、6 h后ECG中J點的位移△J。并在末次記錄△J后，經頸靜脈取血0.5 ml，在離心機上離心，3 500 r/min，離心10 min后取上層血清，用半自動生化儀測定其中CK、LDH及MDA的濃度。

1.4統計學方法 應用SPSS17.0軟件進行分析，運用單因素方差分析進行檢驗(One-way ANOVA)。

2 結 果

2.1炙甘草湯加減對急性心肌缺血大鼠心電圖J點位移的影響 與假手術組相比，模型組大鼠結扎冠狀動脈30、60 min、2、4、6 h后心電圖△J明顯升高(P<0.05)；與模型組相比，給藥組大鼠各時間點心電圖△J明顯降低(P<0.05)。見表1。

表1 炙甘草湯加減對急性心肌缺血大鼠心電圖J點位移的影響

2.2炙甘草湯加減對急性心肌缺血大鼠血清中CK、LDH、MDA濃度的影響 與假手術組相比，冠脈結扎6 h后模型組大鼠血清中CK、LDH及MDA濃度明顯升高(P<0.05)；與模型組相比，給藥組大鼠血清中CK和LDH濃度顯著降低(P<0.05)，在MDA這個指標上雖有下降的趨勢，但是無統計學上的差異(P>0.05)。見表2。

表2 炙甘草湯加減對急性心肌缺血大鼠血清中CK、LDH、MDA濃度的影響

3 討 論

急性心肌缺血是對人類健康危害最大的疾病之一，發病快且致死率高，因此，尋找有效對抗急性心肌缺血的藥物尤為重要。中藥復方炙甘草湯是中醫臨床上較為常用的治療缺血性心臟病的基礎方劑，本研究中在該方的基礎上去地黃、阿膠、麥門冬、麻仁及大棗，加入開竅藥冰片，增強其益氣通脈的作用。結扎冠狀動脈復制急性心肌缺血大鼠模型的方法是目前國內、國外研究者最為常用的復制該模型的方法，通過使冠狀動脈變狹窄，導致其供應區域的血流減少或缺失，進而造成心肌缺血〔5～7〕。心肌細胞因缺血、缺氧導致代謝的紊亂，進而造成局部凝固性的壞死，其發病過程和機制與臨床十分相似。

對心肌缺血進行ECG的ST段標測不僅可以定性、定量地觀察大鼠心肌缺血的嚴重程度，也可以用來考察抗心肌缺血藥物的療效。由于大鼠和人ECG的差異性，常選用J點位移(△J)作為評價其心肌缺血的首選指標。本實驗結果表明，炙甘草湯加減能明顯對抗結扎冠狀動脈對大鼠心肌造成的影響，且該作用從冠脈結扎后的30 min開始，至少能維持6 h。

CK主要儲存在心肌細胞的線粒體內，LDH則廣泛分布在心肌組織中，當心肌缺血后，心肌細胞受到損傷，導致細胞膜破裂壞死，CK和LDH就會被釋放而進入血液，因此，CK和LDH在血液中濃度的變化對診斷缺血性心臟疾病有著十分重要的意義。心肌缺血后會產生大量的氧自由基，MDA就是氧自由基攻擊生物膜后發生脂質過氧化反應的產物，因此血液中MDA的濃度能間接反映心肌細胞受到氧自由基攻擊而造成損傷的程度〔8〕。本研究結果表明，炙甘草湯加減能顯著對抗心肌缺血對大鼠心肌細胞造成的損傷，能明顯降低血清中CK和LDH的濃度，但在MDA這個指標上，雖有降低的趨勢，但是無統計學上的差異。

本研究初步闡明了該炙甘草湯加減方對大鼠心肌缺血的對抗作用，從動物實驗角度明確了炙甘草湯加減的療效，為該方在臨床上更廣泛的應用奠定了理論基礎和實驗依據。

4 參考文獻

1白 雪，宋志宙，楊思進，等.心安顆粒對急性心肌缺血大鼠心電圖影響的研究〔J〕.時珍國醫國藥，2010；21(10)：2707-9.

2王曉明，李付彪，呂文偉，等.白芍總苷對犬急性心肌缺血的保護作用〔J〕.吉林大學學報(醫學版)，2006；32(3)：393-6.

3周文武，林 玲，陳 軍，等.冠脈結扎法制作大鼠心肌缺血模型〔J〕.中國實驗動物學報，2004；4(12)：226-30.

4徐瑞鑫，譚銀豐，李廷利.刺丹混合液對急性心肌缺血大鼠血流動力學的影響〔J〕.世界科學技術-中醫藥現代化，2009；11(6)：852-5.

5He HB,Xu J,Xu YQ，etal.Cardioprotective effects of saponins from Panax japonicus on acute myocardial ischemia against oxidative stress-triggered damage and cardiac cell death in rats〔J〕.Ethnopharmacol，2012；140(1)：73-82.

6Guven-Bagla A，Ercan E，Asgun HF，etal.Experimental acute myocardial infarction in rats：HIF-1α，caspase-3，erythropoietin and erythropoietin receptor expression and the cardioprotective effects of two different erythropoietin doses〔J〕.Acta Histochemica，2013；115(7)：658-68.

7Di Paola R，Mazzon E，Paterniti I，etal.Olprinone，a PDE3 inhibitor，modulates the inflammation associated with myocardial ischemia-reperfusion injury in rats〔J〕.Eur J Pharmacol，2011；650(2-3)：612-20.

8譚銀豐.刺丹混合液抗心肌缺血作用的實驗研究〔D〕.黑龍江中醫藥大學碩士論文，2008.