凋亡相關蛋白死亡受體5、細胞內Fas相關死亡域樣白介素1-β轉換酶抑制蛋白在胃組織中的表達及臨床意義

朱亞平 周 雨 劉 靜 王 樂 凌 暉

(邵陽醫學高等專科學校，湖南 邵陽 422001)

胃癌是世界上居第二位致死性的惡性腫瘤〔1〕，其發生、發展與多種致癌基因、細胞凋亡基因密切相關,其中細胞凋亡的失衡起著重要的作用。凋亡主要通過內在和外在的凋亡通路進行誘導。內在的通路是激活線粒體相關信號,而外在的通路以死亡受體活化為特點〔2〕，外在凋亡通路的死亡受體屬于腫瘤壞死因子(TNF)受體超家族,包括Fas、TNF受體1(TNFR1)、凋亡相關蛋白死亡受體3(DR3)、DR4、DR5、DR6〔3〕。本文主要檢測不同胃組織中DR5與白介素1β轉換酶抑制蛋白(c-FLIP)的表達情況，了解在疾病中的作用。

1 資料與方法

1.1一般資料 組織制備選用胃腺癌組織60例,32例癌旁正常胃黏膜和26 例慢性胃炎標本。其中男37例,女23 例,年齡61～77〔平均(68.25±4.72)〕歲，其中高分化腺癌 20 例、中分化腺癌 21 例和低分化腺癌19 例。所有患者術前均未接受化、放療。

1.2切片制作及免疫組化染色〔4,5〕將樣本切片放入溫箱烘片后,經二甲苯脫蠟和梯度酒精逐級水化,蒸餾水沖洗3 min,磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗5 min×3次。把切片浸入拘椽酸鹽抗原修復液中,修復20 min,然后置于新鮮配制的3%H2O2中浸泡30 min,先滴加一抗(DR5 1∶1 000,c-FLIP 1∶200)于切片上 ,4℃冰箱過夜后滴加二抗工作液,孵育25 min。滴加辣根過氧化物酶標記鏈霉素卵白素工作液,37℃濕盒內孵育20 min。各步間PBS水洗,二氨基聯苯胺(DAB)顯色,蘇木素復染。使用梯度酒精脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片,在顯微鏡下進行觀察。

1.3觀察指標 觀察不同性別、年齡及胃組織中DR5及c-FLIP的表達，不同分化程度的胃腺癌中DR5及c-FLIP的表達，以及DR5及c-FLIP的關系。

1.4統計學方法 應用SPSS13.0軟件，計數資料比較采用χ2檢驗，相關性檢驗用 Spearman分析。

2 結 果

2.1DR5及c-FLIP在不同性別、年齡及胃組織中的表達 DR5與c-FLIP蛋白表達與年齡、性別無明顯相關性，各組DR5在胃癌組織中陽性表達率比較差異有顯著性意義(P<0.05)。各組c-FLIP在胃癌組織中陽性表達率比較差異有顯著性意義(P<0.05)。見表1。

表1 DR5及c-FLIP在不同性別、年齡及胃組織中的表達情況〔n(%)〕

2.2不同分化程度的胃腺癌中DR5及c-FLIP的表達 DR5蛋白在高、中、低分化腺癌中的表達率比較差異有顯著性意義(P<0.05)。c-FLIP在高、中、低分化腺癌中的表達率比較差異有顯著性意義(P<0.05)。即分化程度越低,DR5與c-FLIP 蛋白表達越高。見表2。

表2 不同分化程度的胃腺癌中DR5及c-FLIP的表達〔n(%)〕

2.3DR5及c-FLIP的關系 51例 c-FLIP 蛋白陽性表達的胃癌標本中有35例DR5呈陽性表達，DR5 與 c-FLIP 蛋白之間的關系表現為正相關性(r=0.93)。

3 結 論

胃癌是我國最常見的消化道惡性腫瘤，其中癌基因、抑癌基因、凋亡制基因之間的失調在疾病的發生、發展過程中起著重要的作用。死亡受體是外源性凋亡通路的重要調節器,激活某些死亡受體如DR5，通過誘導凋亡選擇性殺死癌細胞,TNF相關凋亡誘導配體(TRAIL)死亡受體已經逐漸成為一種重要的癌癥治療靶點,DR5高表達于多種腫瘤組織中〔6～8〕。 研究表明，在非小細胞肺癌中,DR5表達與死亡風險相關〔9〕。乳腺癌中DR5表達與淋巴結轉移顯著相關，與預后相關〔10〕。c-Flip蛋白是細胞凋亡調節因子與增殖誘導劑。c-Flip常通過阻止半脫氨酸蛋白酶(caspase-8)活化抑制凋亡，能夠抑制fas、TNFR-1、DR3、TRAILR介導的凋亡〔11～13〕。

DR5在胃癌組織中大部分為陽性表達，可利用其作為TRAIL的受體,研發胃癌的治療藥物〔14〕。c-FLIP 在胃癌組織高表達,且顯著高于正常胃黏膜,c-FLIP 表達可能與胃癌細胞增殖相關〔15〕。DR5 與 c-FLIP 蛋白之間的關系表現為正相關性。一方面可以作為胃癌早期診斷的檢測指標;另一方面可以根據其表達判斷胃癌組織分化程度，兩者起到協同作用。

4 參考文獻

1Ravindran J,Prasad S,Aggarwal BB.Curcumin and cancer cells:how many ways can curry kill tumor cells selectively〔J〕. AAPS J,2009；11(3):495-510.

2Hussain AR,Ahmed M,Al-Jomah NA,etal.Curcumin suppresses constitutive activation of nuclear factor-kappa B and requires functional Bax to induce apoptosis in Burkitt's lymphoma cell lines〔J〕.Mol Cancer Ther,2008；7(10):3318-29.

3Elrod HA,Sun SY.Modulation of death receptors by cancer therapeutic agents〔J〕. Cancer Biol Ther,2008;7(2):163-73.

4朱亞平.凋亡相關蛋白DR5、c-FLIP在胃組織中的表達及意義〔D〕.南華大學碩士論文,2011.

5高艷紅,趙治國.采用組織芯片技術研究c-FLIP在胃癌中的表達及其意義〔J〕.臨床消化病雜志,2008;20(2):108-9,12.

6牛 輝,夏鳳國,王廣義.抗人DR5單克隆抗體誘導肝癌細胞株SMMC-7721凋亡實驗研究〔J〕.中國老年學雜志,2007;27(4):318-20.

7Ozoren N,El-Deiry WS.Cell surface death receptor signaling in normal and cancer cells〔J〕.Semin Cancer Biol,2003;13(2):135-47.

8Liu LG,Tanaka H,Ito K,etal.Absence of gene mutation in TRAIL receptor 1 (TRAIL-R1) and TRAIL receptor 2 (TRAIL-R2) in chronic myelogenous leukemia and myelodysplastic syndrome,and analysis of mRNA Expressions of TRAIL and TRAIL-related genes in chronic myelogenous leukemia〔J〕.Acta Haematol,2005;113(2):113-23.

9徐 玲,劉 靜,劉云鵬,等.奧沙利鉑通過上調死亡受體表達增強TRAIL誘導的胃癌細胞凋亡的實驗研究〔J〕.現代腫瘤醫學,2010;18(11):2085-8.

10Cheong HJ,Lee KS,Woo IS,etal.Up-regulation of the DR5 expression by proteasome inhibitor MG132 augments tRAIL-induced apoptosis in soft tissue sarcoma cell lines〔J〕.Cancer Res Treat,2011;43(2):124-30.

11冷 雪.c-FLIP(L)在乳腺癌細胞系中的表達及對TRAIL誘導凋亡敏感性的影響〔D〕.天津醫科大學碩士論文,2012.

12劉曉慶,涂亞庭.c-FLIP在人非黑素細胞性皮膚腫瘤組織中的表達及其臨床意義〔J〕.中國癌癥雜志,2011;21(3):167-70.

13臧鳳琳,魏熙胤,孫蕾娜,等.c-FLIP(L)在乳腺癌中表達的意義及對凋亡的調節〔J〕.中國腫瘤臨床,2010;37(15):841-5.

14Yoshida T,Horinaka M,Sakai T.Combination-oriented molecular-targeting prevention of cancer:a model involving the combination of TRAIL and a DR5 inducer〔J〕.Environ Health Prev Med,2010;15(4):203-10.

15Sakai T."Molecular-targeting prevention" of cancer〔J〕.Nihon Eiseigaku Zasshi,2011;66(1):3-12.