抑癌基因PTEN在三陰性乳腺癌中的表達及其判斷預后的價值

陳 亮 戴殿祿 崔國忠 丁明劍

(滄州市中心醫院腫瘤外二科，河北 滄州 061001)

三陰性乳腺癌(TNBC)是一種特殊類型的乳腺癌，其雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和人表皮生長因子受體2(Her-2)表達均為陰性，內分泌治療和Her-2的靶向治療對于TNBC治療無效，因此極易出現復發轉移，惡性度高，預后很差。目前影響TNBC預后的分子指標逐漸成為研究的焦點。新發現的抑癌基因PTEN是繼P53基因之后在人類腫瘤細胞中缺失和突變率最高的抑癌基因。乳腺癌中存在抑癌基因PTEN突變或缺失〔1〕，PTEN不但可抑制腫瘤細胞生長，而且能促進腫瘤細胞凋亡。本研究探討PTEN蛋白在TNBC這一特殊類型乳腺癌中的表達，并分析其與TNBC預后的關系。

1 材料與方法

1.1臨床材料 收集2000年8月至2005年7月滄州市中心醫院住院治療的130例TNBC患者的蠟塊及隨訪材料，乳腺癌患者均為女性；年齡21～75歲，平均46.3歲；臨床分期：Ⅰ期34例，Ⅱ期56例，Ⅲ期40例；組織學分級：Ⅰ級36例,Ⅱ級50例，Ⅲ級44例；腋下淋巴結轉移患者72例；乳腺癌家族史45例。并選取48例癌旁乳腺組織作為對照。所有患者均接受手術治療并根據患者情況給以放化療等綜合治療。

1.2隨訪 所有乳腺癌患者均進行了隨訪。隨訪起始時間為抗癌治療開始日，觀察終止時間為2010年7月。隨訪采用門診定期復查和電話相結合的方式。預后評價指標為患者的5年無病生存時間(DFS)及總生存時間(OS)。

1.3免疫組化 采用免疫組化SP法。以SP免疫組化試劑盒說明書為依據操作。PTEN單克隆抗體購于美國UCL公司。以PBS代替一抗作陰性對照，用已知PTEN陽性結腸癌組織作為陽性對照。

1.4結果判定 PTEN的判斷：PTEN蛋白主要表達于細胞質，以棕黃色顆粒為特征。采取以每一切片中隨機選取10個高倍鏡視野及每個高倍鏡視野計數100個細胞的方法判定。染色強度等級：淺黃染為1分，中度黃染為2分，強度黃染為3分；陽性細胞的百分率：陽性細胞<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，>50%為3分；將兩者的結果綜合分析：0分計為陰性(-)，1～2計為弱陽性(+)，3～4計為中度陽性()，5～6計為強陽性()；將PTEN蛋白的(-)、(+)組計為低表達組，將PTEN蛋白的()、()組計為高表達組。

1.5統計學方法 采用SPSS16.0軟件。計數資料應用χ2檢驗，用Kaplan-Meier法描述生存曲線，組間比較采用Log-rank法進行，用Cox模型進行多因素分析。

2 結 果

2.1PTEN蛋白在癌旁組織及癌組織中的表達 PTEN蛋白在TNBC和癌旁乳腺組織中的表達率差異顯著(χ2=34.8,P=0.000)。見圖1，表1。

圖1 乳腺癌中PTEN的陽性表達(SP,×200)

表1 PTEN蛋白在乳腺不同組織中的表達〔n(%)〕

2.2PTEN蛋白表達與TNBC臨床病理特征之間的關系 在TNBC中，PTEN的表達與臨床分期及腋下淋巴結轉移均顯著相關(P<0.05)，而與年齡、腫瘤大小、乳腺癌家族史及組織學分級無顯著相關(P>0.05)。見表2。

表2 PTEN蛋白在TNBC中的表達與臨床病理特征的關系〔n(%)〕

2.3各臨床因素對TNBC患者預后的影響 影響DFS的單因素分析顯示，年齡、臨床分期、腋下淋巴結轉移及PTEN的蛋白表達與TNBC預后有關(P<0.05)。影響OS的單因素分析顯示，臨床分期、腋下淋巴結轉移及PTEN的蛋白表達與TNBC預后有關(P<0.05)。見表3。

表3 影響TNBC患者預后的單因素分析(%)

2.4影響生存期的Cox模型多因素分析 把Log-rank檢驗篩選到的對TNBC生存有影響的各個因素再進行多因素Cox模型分析，入選條件為P<0.1。結果顯示：年齡、臨床分期、PTEN的蛋白表達及腋淋巴結轉移情況四項指標是影響患者DFS的獨立危險因素。臨床分期及腋淋巴結轉移情況兩項指標是影響患者OS的獨立危險因素。見表4，表5。

表4 影響TNBC患者DFS的多因素分析

2.5PTEN蛋白表達與生存期的關系 Kaplan-Meier法繪制的生存曲線可以看到PTEN蛋白高表達組患者的DFS及OS明顯優于PTEN蛋白低表達組患者。見圖2，圖3。

表5 影響TNBC患者OS的多因素分析

圖2 PTEN高表達組與低表達組DFS曲線的比較

圖3 PTEN高表達組與低表達組OS曲線的比較

3 討 論

TNBC在乳腺癌中屬于特殊類型，其缺乏內分泌治療及針對HER-2基因的分子靶向治療，同時具有侵襲性強，復發早，進展快，生存時間短及易于侵襲轉移等臨床生物學行為。目前，化學治療雖然是其主要治療手段，但與其他類型乳腺癌相比預后更差。因此針對TNBC的基礎研究、新治療的探尋及臨床預后等方面的研究引起越來越多的重視。PTEN基因是迄今為止發現的第一個具有磷酸酶活性的抑癌基因，其不但可抑制腫瘤細胞生長，也能促進腫瘤細胞凋亡。在許多腫瘤中PTEN基因區域有雜合性丟失和突變，抑制腫瘤作用減弱或消失，從而促進腫瘤的發生，發展及轉移。同樣，乳腺癌中也存在PTEN基因的缺失和突變，并且可以作為判斷預后的指標，本研究探討PTEN基因在TNBC這一特殊類型乳腺癌中的表達及其對預后的影響。

PTEN基因對于乳腺細胞正常功能的維持具有重要作用，其在正常乳腺組織中高表達，本研究說明癌旁組織中可能開始存在PTEN基因的丟失，從而影響了乳腺細胞的正常功能，其潛在的癌變的可能性增大；而PTEN蛋白表達在TNBC組織中進一步減弱，可能是由于抑癌基因PTEN出現了更多缺失和突變的結果。趙云霞等〔2〕應用免疫組織化學S-P法檢測得出150例乳腺癌、20例不典型增生和30例良性增生性病變組織中PTEN蛋白在乳腺癌中失表達率分別為65.2%，50.0%和13.3%(P<0.05)。本研究結果還顯示：PTEN蛋白表達水平與臨床分期及腋下淋巴結轉移呈負相關，提示隨著腫瘤嚴重程度進展及侵襲能力的加強，PTEN蛋白丟失程度隨之增加，而相關研究報道也發現，PTEN蛋白的丟失率隨臨床分期〔3〕增加及腋下淋巴結的陽性轉移〔4，5〕而增加，說明PTEN表達的水平越低，腫瘤惡性度越高，越容易出現浸潤和轉移。

本研究中PTEN蛋白表達的單因素生存率分析顯示，PTEN高表達組患者的5年的DFS及OS顯著高于PTEN低表達組的患者，提示PTEN蛋白表達可能同樣與TNBC的預后有關。李志雄等〔6〕通過免疫組化法檢測食管鱗癌中PTEN的表達并行COX回歸分析：PTEN的陽性患者的5年生存率明顯高于PTEN陰性表達者，成為不良的預后因素。PTEN的表達在卵巢漿液性腺癌〔7〕、結直腸癌〔8〕、非小細胞肺癌〔9〕、胃癌〔10〕及肝內膽管細胞癌〔11〕中同樣成為不良的預后因素，而Hager等〔12〕對腎細胞癌的預后分析顯示，PTEN表達減少似乎是在腎細胞癌的早期步驟，PTEN基因的表達不能成為生存預后的指標。同樣在膀胱癌〔13〕的預后研究中未能得出不良預后的結果。本研究通過影響三陰性乳腺癌患者DFS和OS的多因素分析顯示，年齡、臨床分期、PTEN的蛋白表達及腋淋巴結轉移情況四項指標是影響患者DFS的獨立危險因素，而僅有臨床分期及腋淋巴結轉移情況兩項指標是影響患者OS的獨立危險因素，說明PTEN的表達可能是影響三陰性乳腺癌預后的因素，但不是最為重要的預后因素。多因素分析：PTEN的回歸系數為負數，表示隨著PTEN表達的增加，患者死亡的危險度相對減少，而PTEN表達下調，則患者死亡的危險度相對增加。

綜上，PTEN的缺失可能與TNBC的發生及發展有一定相關性，PTEN可能是影響TNBC預后的因素，檢測PTEN蛋白在TNBC組織中的表達可以作為判斷患者預后的分子標志。

4 參考文獻

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