老年骨肉瘤術后組織中Beclin1、微管相關蛋白3和磷酸酯酶與張力蛋白同源物的表達及意義

蔡南川

(重慶市第七人民醫院骨科,重慶 巴南 400054)

老年骨肉瘤患者相對少見，但是由于老年人骨組織常伴有骨質疏松和退行性改變，因此相關基因和蛋白表達異常是形成腫瘤的重要影響因素。Beclin1是自噬特異性基因，在自噬的溶酶體降解過程中起腫瘤抑制作用，是準腫瘤抑制基因〔1，2〕。微管相關蛋白3(MAPLC3)定位于前自噬泡和自噬泡膜表面，參與自噬體的形成，研究認為MAPLC3 對腫瘤的形成有重要影響〔3,4〕。磷酸酯酶與張力蛋白同源物(PTEN)是人類發現的第一個具有磷酸酯酶活性的抑癌基因，其能通過脫磷酸化作用調節細胞內信號傳導通路，從而調節細胞的生長、發育及抑制腫瘤細胞增殖、黏附和轉移〔5,6〕。本文探討老年骨肉瘤術后組織中Beclin1、MAPLC3和PTEN的表達特征及其臨床意義。

1 材料和方法

1.1臨床資料 近5年在我院行骨肉瘤切除術的老年患者62例為觀察組，年齡60～87歲，平均65.8歲。其中男32例，女30例。納入均經病理醫師再次確診，并符合WHO的診斷標準。同時選取同期在我院確診為骨樣骨瘤的術后組織52例作為對照組，其中男26例，女26例，60～86歲，平均66.9歲。兩組一般臨床資料無明顯差別(P>0.05)。

1.2免疫組化檢測Beclin1、MAPLC3和PTEN蛋白的表達 Beclin1、MAPLC3和PTEN蛋白均購自武漢博士德生物工程公司，Beclin1、MAPLC3和PTEN的檢測均應用免疫組化SP法。操作均由同一主管技師進行，嚴格按實驗步驟進行操作，嚴格質量控制。

1.3Beclin1、MAPLC3和PTEN蛋白檢測結果的判定方法 Beclin1、MAPLC3和PTEN均以細胞質內出現棕黃色顆粒為陽性細胞。每張切片選擇5個400倍的高倍視野，取其平均值，以陽性細胞≥25%定為陽性，以陽性細胞<25%定為陰性。

1.4統計學方法 采用SAS6.12軟件進行χ2檢驗、相關分析。

2 結 果

2.1兩組Beclin1、MAPLC3和PTEN陽性表達的比較 觀察組Beclin1、MAPLC3和PTEN表達的陽性率明顯低于對照組(P<0.000 1)。見表1。

2.2Beclin1、MAPLC3和PTEN在觀察組不同臨床特征中的表達比較 觀察組Beclin1、MAPLC3和PTEN陽性表達與腫瘤的最大徑、TNM分期、分級及Ki67指數相關(P<0.05)。見表2。

2.3觀察組Beclin1、MAPLC3和PTEN表達的線性相關性分析 觀察組Beclin1和MAPLC3(r=0.46，P=0.011 2)、MAPLC3和PTEN(r=0.45，P=0.010 0)的表達均具有正相關性。

表1 兩組Beclin1、MAPLC3和PTEN陽性表達的比較〔n(%)〕

表2 Beclin1、MAPLC3和PTEN在觀察組不同臨床特征中陽性表達比較〔n(%)〕

3 討 論

老年骨肉瘤患者50%發生在四肢，骨盆和頭面部各占20%。本病與性別和種族無關聯性。近年人們關注多種蛋白的異常表達對骨肉瘤的促進作用〔7〕。當細胞或組織缺氧時，細胞內可形成雙層或多層褶皺，此時包裹受損的細胞器和大分子物質，形成完整的自噬小體，溶酶體可以和自噬小體結合，對內容物進行清除，并使其消失，這個過程稱為自噬。也有研究認為自噬是依賴自身溶酶體的特征性結構形成的〔8,9〕。自噬對腫瘤的形成也具有影響，有研究認為自噬相關蛋白可以抑制腫瘤形成〔10〕，也有研究認為其可以促進腫瘤的進展〔11〕。有學者則提出了自噬在腫瘤中的動態機制觀點，即腫瘤發生時，自噬以抑制腫瘤作用為主，而在腫瘤形成或急速進展期，自噬以促腫瘤作用為主〔12,13〕。Beclin1是酵母ATG6/VPS30基因在哺乳動物的同源類似物，位于人類染色體17q21上，是誘導自噬的重要因子。多種研究認為Beclin1可以有效促進腫瘤的發生和進展〔14〕。MAPLC3是哺乳動物細胞中酵母ATG8基因的同源產物，可以分為Ⅰ型和Ⅱ型。如果自噬發生，Ⅰ型MAPLC3經過修復和加工，同自噬膜表面的磷脂酰乙醇胺融合，形成Ⅱ型MAPLC3〔15〕。MAPLC3常定位在自噬體的表面。也有學者認為MAPLC3是自噬起始階段的一種有效和特殊的分子標記物〔16〕。MAPLC3的表達下調是腫瘤發生的重要因素，同時加速腫瘤的進展。PTEN在正常組織中高表達，可以有效抑制腫瘤的失控性增生，抑制腫瘤細胞浸潤，加速細胞的凋亡，減少細胞的增殖，有效發揮抑癌作用〔17,18〕。也有學者認為PTEN與血管內皮生長因子(VEGF)介導的血管形成密切相關，認為PTEN在一定程度上反映腫瘤的分化和侵襲性的強弱，且PTEN表達缺失可能引起VEGF表達增強，從而在腫瘤侵襲、轉移中發揮一定作用〔19,20〕。

本研究結果提示三種蛋白表達下降或丟失可以促進骨肉瘤的發生，尤其是老年人；Beclin1、MAPLC3和PTEN是抑制老年骨肉瘤發生的重要蛋白。Beclin1、MAPLC3和PTEN參與腫瘤的生長、骨組織和細胞的惡性變和失控性增殖的全過程。Beclin1、MAPLC3和PTEN低表達時可以有效促進腫瘤的生長及周圍鄰近組織的浸潤，使腫瘤對周圍器官和組織的破壞能力增強，同時使腫瘤的成熟過程發生明顯改變，腫瘤細胞呈低分化或未分化狀態，腫瘤生長加速，預后差。也有學者認為Beclin1和PTEN低表達時可以有效促進腫瘤細胞進入脈管〔21～23〕，使腫瘤細胞的遷移能力增強，并在遠隔部位易于種植形成轉移灶，此時腫瘤手術切除不易干凈〔24〕。Beclin1、MAPLC3和PTEN可能在一定程度上具有協同正向作用，但其調控作用需要更多基礎實驗研究。

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