藏靈菇發酵乳對人工致衰老小鼠胸腺、脾臟指數的影響

岳麗紅 程廣東 羅志文 朱德全 周清波 徐 岳

(佳木斯大學生命科學學院動物教研室，黑龍江 佳木斯 154007)

近年來，傳統民間飲品藏靈菇發酵乳調節腸道菌群平衡、降低膽固醇、抑制腫瘤、延緩衰老等方面的保健作用得到了臨床實驗證明〔1，2〕。研究者已開展了對其延緩衰老機制相關研究，研究證實其有顯著提高心、肝、腎器官指數，增強組織中的抗氧化酶活性、清除自由基能力〔3，4〕，薄芯等〔5～7〕進行了其對實驗動物消化系統保健作用、免疫器官功能和抗衰老作用的影響等方面研究，得到了正相關結論，然而，關于藏靈菇發酵乳對免疫器官的抗氧化作用研究鮮有報道。為此，本實驗研究其對胸腺、脾臟指數及組織自由基代謝方面的影響，以進一步探討其延緩免疫器官衰老的作用，探討藏靈菇發酵乳的抗衰老機制。

1 材料與方法

1.1實驗動物 昆明種健康小鼠24只，體重(20±2)g，2～3月齡，雌雄各半，由佳木斯大學實驗動物中心提供。

1.2藥品與試劑 藏靈菇：佳木斯大學生命科學學院微生物實驗室保存。藏靈菇發酵乳制備：每日將用冷開水洗凈的靈菇按1%接種量接入伊利純牛奶中，室溫培養24 h后，取發酵牛乳備用。D-半乳糖(D-gal，恒信化學試劑有限公司，批號20100227)；考馬斯亮藍蛋白、總超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)測定試劑盒(均為南京建成生物工程研究所產品，批號20101215)。

1.3儀器 722PC分光光度計(上海棱光技術有限公司)，旋渦混勻器，高靈敏度pH計(上海精密科學儀器有限公司)，離心機(長沙湘儀離心機儀器有限公司)，電子天平(北京賽多利斯天平有限公司，d=0.1 mg)等。

1.4動物建模與分組 將供試小鼠雌、雄分開后再分別隨機分成青年對照組、衰老模型組和靈菇發酵乳組，雌、雄分籠飼養，對每只小鼠進行標記。飼養溫度18～20℃，相對濕度50%～60%，給予專用飼料飼喂。每日8∶00進行給藥處理：青年組腹腔注射生理鹽水100 mg/kg，溫開水灌胃0.5 ml/只；衰老組按100 mg/kg劑量腹腔注射D-gal，溫開水灌胃0.5 ml/只；靈菇發酵乳組注射同樣劑量D-gal，同時靈菇發酵乳灌胃0.5 ml/只。每2天給藥前稱重記錄。

1.5測定項目與方法 連續處理30 d后，斷頸處死，迅速取出胸腺、脾臟，用濾紙吸干殘血，稱質量，計算胸腺、脾臟指數。按試劑盒說明書的要求采用機器勻漿方式制備10%組織勻漿。測定蛋白質含量、T-SOD活力、GSH-Px活力和NO、MDA含量。蛋白質含量測定采用考馬斯亮藍法，T-SOD活性測定采用黃嘌呤氧化酶法，GSH-Px活性測定采用DTNB法，MDA含量測定采用TBA反應比色法，NO濃度檢測采用硝酸還原酶法，試劑配制、操作、計算按測試盒說明書進行。

1.6統計學方法 應用SPSS11.7軟件進行t檢驗。

2 結 果

2.1靈菇發酵乳對體質量與胸腺、脾臟指數的影響 與青年對照組相比，衰老模型組體質量顯著降低(P<0.05)，脾臟、胸腺指數極顯著降低(P<0.01)；與衰老模型組相比，靈菇發酵乳灌胃組體質量顯著增加(P<0.05)，脾臟、胸腺指數顯著增加(P<0.05)，見表1。

2.2靈菇發酵乳對小鼠胸腺組織T-SOD、GSH-Px活力和NO、MDA含量的影響 與青年對照組相比，衰老模型組胸腺組織NO、MDA含量極顯著增加(P<0.01)，T-SOD、GSH-Px 活力極顯著降低(P<0.01)；與衰老模型組相比，靈菇發酵乳組胸腺組織GSH-Px 活力顯著增加(P<0.05)，T-SOD活力極顯著增加(P<0.01)， MDA含量顯著降低(P<0.05)，NO含量極顯著降低(P<0.01)，見表2。

表1 對小鼠體質量、脾臟、胸腺指數的影響±s,n=8)

表2 對小鼠胸腺組織T-SOD、GSH-Px、MDA的影響±s,n=8)

2.3靈菇發酵乳對小鼠脾組織T-SOD、GSH-Px活力和NO、MDA含量的影響 與青年對照組相比，衰老模型組脾組織MDA含量顯著增加(P<0.05)，NO含量極顯著增加(P<0.01)，T-SOD、GSH-Px 活力極顯著降低(P<0.01)；與衰老模型組相比，靈菇發酵乳組脾組織T-SOD、GSH-Px 活力顯著增加(P<0.05)，NO、MDA含量顯著降低(P<0.05)，見表3。

表3 對小鼠脾組織T-SOD、GSH-Px、MDA的影響±s,n=8)

3 討 論

自由基學說是半個世紀以來最具有說服力的衰老學說之一。氧自由基在衰老進程中的作用至關重要。因此減少自由基生成、增強機體抗自由基能力并維持二者之間的動態平衡，將有利于延緩衰老、促進健康〔8〕。動物機體中的抗氧化酶類以及非酶的抗氧化物質，能夠及時地清除自由基，保護組織細胞免受其破壞。人體的抗氧化酶SOD、CAT和抗氧化物質GSH可有效清除自由基，其活性的變化可反映機體抗氧化能力的強弱，超量的機體強氧化劑NO和脂質過氧化產物MDA對細胞有毒性，其含量可間接反映組織細胞的損傷程度。

胸腺是生物體最重要的中樞免疫器官，隨著鼠齡增加，小鼠胸腺結構呈退化趨勢，衰老小鼠表現出胸腺實質部分明顯減少，被充滿脂肪細胞的間質所取代，胸腺綿軟形態不規則，胸腺指數下降的特征。由于胸腺皮質內胸腺細胞的大量死亡，微環境改變阻礙了T細胞成熟，成熟T細胞數量減少，老年鼠胸腺樹突狀細胞數量減少，造成APC抗原提呈作用的減弱〔9〕，導致免疫功能下降。脾臟是人體最大的外周免疫器官，脾臟的重量及功能的變化是反映生物體衰老的重要指標。脾萎縮將全面影響機體的體液免疫和細胞免疫功能，降低動物機體的免疫防御、免疫監視、免疫自穩能力，進而加速衰老進程。

西藏靈菇菌粒是以微生物胞外多糖為基質棲息有大量乳酸菌、酵母菌和醋酸菌的微生物共生體。所含微生物多為益生菌，其發酵乳對大腸桿菌等病原菌有一定的抑菌活性，因此能有效維持動物體腸道平衡，清除自由基；另外，根據孟利的研究，西藏靈菇胞外多糖具有調節免疫作用功能〔10〕，此應為藏靈菇發酵乳延緩衰老的分子基礎。胸腺、脾是機體重要的免疫器官，胸腺、脾的器官指數及其組織中自由基代謝變化可以反映機體衰老程度。本實驗表明，藏靈菇發酵乳能顯著增加D-gal所致衰老模型小鼠的胸腺、脾臟指數，增強機體免疫功能；極顯著增強衰老小鼠的胸腺組織中SOD活性、脾組織中SOD、GSH-Px活性，顯著增強衰老小鼠的胸腺組織中GSH-Px活性；極顯著降低衰老小鼠的胸腺組織中NO含量，顯著降低衰老小鼠的胸腺組織中的MDA含量、脾組織中NO、MDA含量，從而提高胸腺、脾組織對自由基的清除能力，抑制和修復由于D-gal代謝產生的自由基造成的胸腺、脾組織細胞的氧化損傷，減緩免疫器官胸腺、脾臟的衰老，延緩機體衰老。

4 參考文獻

1馮鑠涵.藏靈菇發酵乳的營養功能及發酵特性研究現狀〔J〕.中國奶牛，2012；2:35-8.

2吳莉莉,白術杰,宗希明,等.西藏靈菇酸奶保健作用的研究〔J〕.黑龍江醫藥科學，2011；34(6):21-2.

3岳麗紅,程廣東,王長平,等.西藏靈菇酸奶對衰老小鼠抗氧化作用的研究〔J〕.佳木斯大學學報,2008；26(3):430-2.

4岳麗紅,程廣東,朱德全,等.西藏靈菇酸奶對人工致衰老小鼠肝腎指數的影響〔J〕.中國老年學雜志,2009；29(19):2767-9.

5薄 芯,李京霞.西藏靈菇發酵奶對小鼠消化系統的保健作用探索〔J〕.中國乳品工業,2010；38(7):29-31.

6薄 芯,李京霞.西藏靈菇發酵奶對小鼠免疫功能的影響初探〔J〕.中國乳品工業,2011；39(6):19-21.

7薄 芯,李京霞,葉 磊,等.再探西藏靈菇發酵奶的抗衰老作用〔J〕.中國乳品工業,2012；40(12):22-5.

8李素云,王立芹,鄭稼琳,等.自由基與衰老的研究進展〔J〕.中國老年學雜志，2007；27(20):2046-8.

9劉仰斌,李啟華.小鼠胸腺形態結構的增齡性變化〔J〕.中國組織工程研究與臨床康復,2010；14(31):5805-8.

10孟 利.西藏靈菇〔M〕.哈爾濱:黑龍江大學出版社,2010:88-109.