氧化苦參堿對大鼠心肌缺血的保護作用

李 闖 王 震

(解放軍205醫院，遼寧 錦州 121000)

冠心病是以冠狀動脈粥樣硬化為基礎，以心肌供血不足為表現的病理形態學改變〔1〕。氧化苦參堿(OMT)是苦參中的主要成分，是一種喹諾西啶類生物堿〔2〕，氧化苦參堿有抗炎、抗病毒、抗心律失常等廣泛的生物活性〔3〕，但對心肌的缺血損傷的保護作用研究比較少見。本文擬采用大鼠心肌缺血再灌注模型，觀察OMT對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用，并探討其抗缺血保護的可能機制。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1動物 Wistar大鼠40只(SPF級)，200～250 g，雌雄各半，購于中國醫科大學動物實驗中心。

1.1.2藥品和試劑 OMT由沈陽藥科大學藥學院提供；乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒、肌酸磷酸激酶(CPK)試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)試劑盒等均購于南京建成生物工程研究所。

1.1.3儀器 BL-420生理記錄儀，成都泰盟有限公司；DW-2000型動物呼吸機，上海嘉鵬科技有限公司；低溫離心機，德國Heraeus公司；生物顯微鏡，日本Olympus公司；自動生化分析儀，日本Olympus公司；-80℃低溫冰箱，日本Sanyo公司。

1.2方法

1.2.1分組及給藥 將40只Wistar大鼠隨機分為假手術組、缺血再灌注組、OMT高劑量組(100 mg/kg)、OMT低劑量組(50 mg/kg)各10只。各給藥組大鼠按異丙腎上腺素(Iso)5 ml/kg灌胃給藥，假手術組、缺血再灌注組灌胃等體積生理鹽水，1次/d，連續15 d。

1.2.2心肌缺血再灌注模型的制備 與實驗第15天給藥后1 h，大鼠乙醚麻醉，氣管插管后連接小動物呼吸機，連接BL-420E生物系統，記錄標準Ⅱ導聯心電圖，分離右頸總動脈，并向左心室內插心室插管，注入肝素1.5 ml。大鼠左3～4肋間開胸，暴露心臟，左冠狀動脈前降支下穿0號線，除假手術組外，其余各組均結扎冠脈，結扎時兩端結扎線穿過乳膠管，收緊線將乳膠管用止血鉗夾緊，將心臟送入體內，迅速關閉胸腔。結扎30 min后松開止血鉗進行再灌注180 min。

1.2.3心肌電生理指標 記錄各組缺血前、缺血后和再灌注后的左室收縮壓(LVSP)和左室舒張末壓(LVEDP)的心肌電生理指標。

1.2.4血清中生化指標 頸總動脈取血1.5 ml，3 000 r/min離心10 min，取上清，-80℃凍存。按試劑盒說明書操作，測定血清中LDH、CPK活性，SOD、MDA的含量。

1.2.5常規蘇木素-伊紅(HE)染色 取心臟，固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色。

2 結 果

2.1OMT對大鼠心肌缺血再灌注模型心肌的保護作用 假手術組心肌細胞呈柱狀，胞核、胞質結構正常。缺血再灌注組與假手術組比較可見，心肌細胞界限模糊，胞質部分溶解，呈空泡或網狀形態。OMT組心肌細胞呈柱狀，胞核呈橢圓形位于中央，細胞結構基本正常。見圖1。

2.2GS對大鼠心肌缺血再灌注模型心肌電生理的影響 各組大鼠心肌缺血前心肌電生理無統計學差異(P>0.05)。除假手術組外，其余各組LVSP在缺血30 min及再灌注180 min后，與假手術組比較明顯降低(P<0.01)，LVEDP明顯升高(P<0.01)。OMT高劑量組(100 mg/kg)、OMT低劑量組(50 mg/kg)與缺血再灌注組比較，LVSP升高、LVEDP降低(P<0.05)。見表1。

2.3GS對大鼠心肌缺血再灌注模型血清中生化指標活性影響 缺血再灌注組與假手術組比較，LDH、CPK活性明顯升高，SOD活性降低，MDA含量升高(P<0.01)。與缺血再灌注組比較，OMT高劑量組均可以使LDH、CPK活性水平降低，SOD活性升高，MDA含量下降(P<0.05或P<0.01)。OMT低劑量組可以使SOD活性水平降低，CPK、MDA含量升高(P<0.05或P<0.01)。見表2。

與假手術組比較：1)P<0.01；與缺血再灌注組比較：2)P<0.05，3)P<0.01；下表同

表2 OMT對大鼠心肌缺血再灌注模型血清生化指標的影響

3 討 論

在心血管疾病中，經常發生缺血再灌注損傷，根據缺血再灌注時間不同，對心肌的影響也不盡相同，短時間的缺血再灌注，尚不足以引起心肌功能及形態的改變，但是長時間的心肌缺血，會造成心肌細胞不可逆性損傷、壞死〔4〕。缺血時間越長，可逆性損傷的細胞數越少，再灌注后可能恢復正常功能的組織越少。心肌細胞內氧自由基的產生，線粒體能量合成障礙，Ca2+超載是發生缺血再灌注損傷的重要環節〔5〕。當心肌出現缺血再灌注損傷時，氧自由基及其介導的脂質過氧化反應，產生大量過氧化物，破壞心肌細胞結構、損傷細胞膜。

OMT是一種很強的自由基清除劑，對缺血再灌注心肌具有明顯的保護作用。HE染色顯示，OMT能明顯減小大鼠心肌缺血再灌注損傷的程度，維持心肌細胞結構的正常。血清中LDH、CPK的活性與在心肌損傷或缺血缺氧的時候可以顯著增加。作為心肌組織中重要的抗氧化酶SOD、GSH-Px，對心肌細胞的結構和功能具有保護作用。氧自由基的堆積可以在體內引起過氧化反應，其最終代謝產物為MDA，其含量的多少可以反映出自由基水平和脂質過氧化反應程度。實驗結果顯示，OMT能夠降低血清中LDH、CPK的活性，可以提高心肌組織中SOD的含量，降低MDA含量。本文結果提示，OMT可能是通過提高抗氧化酶活性，同時抑制脂質過氧化酶，阻斷脂質過氧化過程，減輕氧自由基對心肌的損傷。

4 參考文獻

1曲紹春，睢 誠，于曉風，等.人參Rb組皂苷對大鼠實驗性心肌缺血再灌注損傷的保護作用〔J〕.吉林大學學報：醫學版，2007；33(5)：849.

2王亞紅，秦建國，郭維琴，等.人參皂苷抗高脂血癥及動脈粥樣硬化的實驗研究〔J〕.中醫藥學刊，2006；24(3)：429-30.

3尹永英，張善鋒.氧化苦參堿對大鼠缺血再灌注心肌損傷生化指標的影響〔J〕.鄭州大學學報：醫學版，2006；41(4)：752.

4Heusch G，Boengler K，Schulz R.Cardioprotection:nitric oxide,protein kinases and mitochondria〔J〕.Circulation，2008；118(19)：1915-9.

5Shao Y，Wu QN，Tang YP，etal.Simultaneous quantitative determination of seven polyphenols constituents from herba lophatheri by high performance liquid chromatography〔J〕.Instrumentation Sci Technol，2011；39(5)：419-31.