染色體12p13上的rs12425791多態性與缺血性腦卒中患者血脂的相關性

古 聯 宋旭津 謝娟娟 陳 清 嚴 雁 蘇 莉

(廣西中醫藥大學第一附屬醫院，廣西 南寧 530023)

腦卒中是一種嚴重致殘和致死的常見神經系統疾病,且約85%～90%的腦卒中為缺血性腦卒中(IS)〔1〕。近年一項全基因組關聯研究(GWAS)〔2〕發現高加索人染色體12p13上NINJ2基因附近的rs12425791多態性與IS之間的關聯達到了全基因組關聯顯著性水準，因此，rs12425791被認為是很有可能的IS的易感遺傳變異。本研究分析IS患者rs12425791多態性與血脂水平的相關性。

1 對象與方法

1.1研究對象 2009年7月至2011年6月在廣西中醫藥大學第一附屬醫院神經內科住院治療的IS患者，每名患者均經2名主治醫師以上職稱的神經內科醫師，根據1995年中華醫學會第四次全國腦血管病學術會議《各類腦血管疾病診斷要點》〔3〕進行診斷，且所有患者均經CT和(或)MRI檢查確診為IS。共納入166例IS患者，男104例，女62例，平均年齡(68.23±8.46)歲。采用自行設計的統一調查問卷，對病例或其家屬進行詢問，內容包括研究對象的一般情況、高血壓病史和糖尿病病史等既往病史以及吸煙、飲酒等行為生活方式狀況。166例病例均自我報告為廣西漢族人，并知情同意，而且所有病例之間均無親緣關系。

1.2標本采集及血脂檢測 患者住院次日清晨空腹抽取外周血液標本5 ml，分為抗凝血和非抗凝血。將抗凝血置于-4℃保存，于3 d內提取血液基因組DNA。非抗凝管血用于進行血脂檢測，采用日立 7600全自動生化分析儀檢測總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)。血脂異常：根據中國成人血脂異常診斷標準〔3〕，TC≥6.22 mmol/L為升高，TG≥2.26 mmol/L為升高，LDL-C≥4.14 mmol/L為升高，HDL-C<1.04 mmol/L為降低。

1.3DNA提取及基因分型 本研究采用天根科技(北京)有限公司生產的血液基因組DNA提取試劑盒〔TIANamp Blood DNA Kit(離心柱形),目錄號DP318DNA〕，按照產品說明書所述步驟提取血液基因組DNA。將提取后的DNA分裝為3管，于-20℃保存以備用。使用美國應用生物系統(ABI) 公司生產的ABI7500 Fast 實時熒光定量PCR儀以及TaqMan SNP基因分型試劑盒〔試劑盒包括2×通用PCR預混試劑Universal PCR Master mix (無AmpErase UNG酶)，40×SNP 基因分型試劑Genotyping Assay Mix〕，采用TaqMan MGB探針等位基因分型技術來對rs12425791進行基因分型。PCR反應體系的總體積為10 μl，包含：2×TaqMan Universal PCR Mix，5.00 μl；Assay-on-Demand SNP Genotyping Assay Mix(40×)，0.25 μl；無核酸H2O，3.75 μl；基因組DNA，1.00 μl。PCR的反應條件：預變性95℃10 min，變性92℃ 15 s、退火60℃ 1 min，變性以及退火程序循環43次。對基因分型實驗操作采取以下措施進行質量控制：對實驗的操作者施盲，使其在進行基因分型時不知道標本的病例/對照狀態；每次96孔PCR反應板均要設置2個空白對照并設置3個隨機重復樣本作為陽性對照；而且，隨機抽取5%的檢測樣本做盲法重復測定，檢測結果一致率達100%。

1.4統計學方法 采用SPSS16.0軟件進行χ2及t檢驗。

2 結 果

2.1HarDY-Weinberg Equilibrium(HWE)檢驗 rs12425791基因型在166例IS患者中的頻數觀察值分別為103，54，9；期望值分別為102，56，8。頻數觀察值和期望值差異無顯著性(χ2=0.297,P=0.586)，符合HarDY-Weinberg平衡定律(P>0.05)，說明本研究應用的抽樣群體適合于遺傳分析。

2.2不同rs12425791基因型IS患者的血脂水平比較 由于G/G基因型患者例數較少，為便于比較，將G/G基因型與A/A基因型患者合并為(G/A+A/A)基因型組。不同rs12425791基因型IS患者的血脂水平相比較，G/G基因型患者與(G/A+A/A)基因型患者在TC、TG、LDL、HDL水平上的差異均無統計學意義(P>0.05)；不同rs12425791等位基因IS患者的血脂水平相比較，G等位基因患者與A等位基因患者在TC、TG、LDL、HDL水平上的差異也均無統計學意義(P>0.05)。見表1。

2.3不同rs12425791等位基因型IS患者血脂比較 不同rs12425791基因型IS患者的血脂異常率比較，G/G基因型患者與(G/A+A/A)基因型患者在TC、TG、LDL、HDL異常率上的差異均無統計學意義(P>0.05)；不同rs12425791等位基因IS患者的血脂異常率相比較，G等位基因患者與A等位基因患者在TC、TG、LDL、HDL異常率上的差異也均無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表1 不同rs12425791基因型、等位基因IS患者血脂比較

表2 不同rs12425791基因型、等位基因IS患者血脂異常比較〔n(%)〕

3 討 論

rs12425791是Ikram等〔2〕的GWAS所發現與IS的關聯性達到GWAS顯著性水準的SNP。rs12425791是鄰近NINJ2基因一個位點。NINJ2基因編碼ninjurin2蛋白，ninjurin2是一種嗜同種的與基質金屬蛋白酶相互作用的細胞-細胞黏附分子〔4〕，在人類骨髓、外周白細胞、肺和淋巴結中高表達。目前，NINJ2基因對IS的功能作用在很大程度上仍是不清楚的。

據報道，IS可控制的危險因素主要包括高血壓、糖尿病、高脂血癥等，而年齡、性別及種族則是不可控制的危險因素。高脂血癥〔5〕可能是一種致炎狀態，當發生局灶性循環障礙時可以介導免疫炎癥反應而加重組織損傷,而調脂治療能改善腦血管病患者的預后〔6〕。既往國內外有關易感基因遺傳多態性與IS患者血脂代謝的相關性研究結果并不一致：例如，有研究報道APOE基因與腦梗死血脂異常相關聯〔7，8〕，還有研究報道CD14基因多態性可能通過影響血脂水平而影響IS的發生〔9〕。但是，也有文獻報道易感基因遺傳多態性與IS血脂水平無關聯，例如，Járomi 等〔10〕在對459例高加索卒中患者進行rs16996148，rs17321515、rs12130333基因分型和血脂測定的研究中發現，不同等位基因的腦卒中患者的TG及TC水平無統計學差異。目前，易感基因遺傳多態性在IS患者血脂代謝中的作用機制目前仍是不甚清楚的。本研究顯示，不同rs12425791基因型或等位基因IS患者在TC、TG、LDL、HDL水平及異常率上的差異均無統計學意義，與Járomi等〔10〕的研究結果相類似。本研究提示，rs12425791多態性可能與IS血脂代謝無關聯。但是，目前有關于rs12425791多態性與IS患者血脂代謝的相關性研究還很少，有待于更多更大樣本量的同類研究來豐富研究證據。

4 參考文獻

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10Járomi L，Cs?ngei V，Polgár N，etal.Triglyceride level influencing functional variants of the ANGPTL3，CILP2，and TRIB1 loci in ischemic stroke〔J〕.Neuromol Med，2011;13(3):179-86.