多藥耐藥相關(guān)蛋白及乳腺癌耐藥蛋白在食管鱗癌中的表達(dá)及意義

劉 亮 左連富 郭建文

(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院腫瘤研究所流式細(xì)胞室，河北 石家莊 050011)

食管癌臨床治療主要是以放化療為主，尤其是化療作為癌癥晚期主要的治療方法，已經(jīng)被廣大醫(yī)務(wù)人員及患者所認(rèn)可，但是食管癌化療效果往往不佳，主要原因是多藥耐藥的產(chǎn)生，使化療療效降低。目前食管癌多藥耐藥機(jī)制仍未闡明，研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞跨膜蛋白與多藥耐藥產(chǎn)生密切相關(guān)，這類跨膜蛋白多為三磷酸腺苷結(jié)合(ABC)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白〔1～3〕。ABCC1〔又稱多藥耐藥相關(guān)蛋白1(MRP1)〕和ABCG2〔又稱乳腺癌耐藥蛋白(BCRP)〕屬ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族〔4，5〕，已有大量文獻(xiàn)報(bào)道其與腫瘤多藥耐藥有關(guān)〔6～8〕，但在食管癌中的研究報(bào)道少見。本文主要研究食管癌中MRP1和BCRP表達(dá)水平，探討其與食管癌多藥耐藥的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來源及一般資料 收集我院2008年1月至2009年11月食管鱗狀細(xì)胞癌手術(shù)切除標(biāo)本150例，所有患者術(shù)前未接受過化療和放療。每例標(biāo)本分別取癌組織、癌旁組織(距癌邊緣2～5 cm)及手術(shù)切緣正常食管黏膜(距癌邊緣5 cm以上)，固定于4%多聚甲醛溶液用于免疫組織化學(xué)(IHC)檢測(cè)，所有標(biāo)本臨床病理資料完整，全部經(jīng)病理檢查確診，實(shí)驗(yàn)選用與HE染色一致的典型蠟塊作4 μm厚的連續(xù)切片，供IHC染色備用。從中選出80例食管鱗狀細(xì)胞癌、不典型增生和正常食管黏膜組織，用于IHC的檢測(cè)，其中男55例，女25例，年齡38～83歲，平均(58.38±6.70)歲，中位年齡58.5歲。80例食管鱗狀細(xì)胞癌，59例為高中分化鱗癌，21例為低分化鱗癌，54例侵及纖維膜，26例未達(dá)到纖維膜，27例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，53例未轉(zhuǎn)移。

1.2主要實(shí)驗(yàn)儀器及試劑 BMⅡ型病理組織包埋機(jī)，安徽電子科學(xué)研究所；RM2135型石蠟切片機(jī)，德國LEICA公司；BCRP(5D3)抗體(sc-18841)，購自美國Santa Cruz公司；MRP1抗體、 DAB試劑盒、免疫組化二抗試劑盒均由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.3免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)不同食管組織中MRP1和BCRP蛋白表達(dá) SP法：所用載玻片均經(jīng)APES處理，連續(xù)切片厚4 μm，一抗分別為小鼠抗人BCRP單克隆抗體(1∶100稀釋)、小鼠抗人MRP1單克隆抗體(1∶100稀釋)，二抗為生物素化羊抗小鼠IgG，以0.01 mol/L PBS代替一抗作陰性對(duì)照。MRP1、BCRP蛋白表達(dá)結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：以細(xì)胞膜和(或)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。雙盲法由兩位病理醫(yī)師對(duì)免疫組化染色標(biāo)本共同評(píng)估。先在低倍鏡下隨機(jī)選取10個(gè)視野，然后在高倍鏡下每一視野中連續(xù)計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，記錄其中陽性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)并取平均值。根據(jù)腫瘤細(xì)胞染色程度以及陽性細(xì)胞所占百分比進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)〔9，10〕，①陽性(+)：陽性細(xì)胞數(shù)>10%；②陰性(-)：無陽性細(xì)胞或陽性細(xì)胞數(shù)≤10%。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS11.5軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1食管不同病變組織MRP1 蛋白的表達(dá) MRP1陽性產(chǎn)物定位于細(xì)胞膜和胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒狀，彌漫或散在分布(圖1)。食管鱗癌、不典型增生及正常組織中MRP1蛋白表達(dá)陽性率分別為：70.00%、33.75%、7.50%。食管癌組織中MRP1蛋白表達(dá)陽性率顯著高于不典型增生及正常組織(P<0.05)。

2.2食管不同病變組織BCRP 蛋白的表達(dá) BCRP陽性產(chǎn)物定位于細(xì)胞膜和胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒狀，彌漫或散在分布(圖2)。食管正常黏膜表達(dá)陽性率為3.75%；非典型增生組織為26.25%食管癌組織BCRP蛋白表達(dá)陽性率為86.25%。食管癌組織中BCRP蛋白表達(dá)陽性率顯著高于食管不典型增生及正常黏膜(P<0.05)。

2.3食管癌組織中MRP1、BCRP表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 MRP1、BCRP蛋白表達(dá)量在低分化、浸潤深度達(dá)到纖維膜及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者中均顯著高于中高分化、浸潤深度未達(dá)到纖維膜及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)，見表1。

表1 食管鱗癌中MRP1及BCRP蛋白陽性表達(dá)與不同臨床病理特征之間的關(guān)系(n)

正常組織

不典型增生

鱗癌

正常組織

不典型增生

鱗癌

3 討 論

腫瘤耐藥是臨床上化療的一重大障礙，甚至?xí)?dǎo)致化療的失敗，研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤耐藥的產(chǎn)生主要有三方面的機(jī)制，細(xì)胞跨膜蛋白起到藥物外排泵的作用、抗凋亡作用增強(qiáng)以及一些酶解毒機(jī)制。目前藥物外排泵機(jī)制與腫瘤多藥耐藥作用研究較多，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白可以利用ATP釋放的能量將細(xì)胞內(nèi)化療藥物泵出細(xì)胞外，從而降低細(xì)胞內(nèi)化療藥物的有效濃度，從而產(chǎn)生耐藥〔11〕。MRP1是與腫瘤多藥耐藥有關(guān)的ABC蛋白，參與多種腫瘤的多藥耐藥的產(chǎn)生，與多藥耐藥的關(guān)系十分密切，但在食管癌中的研究較少見。BCRP是近年來發(fā)現(xiàn)的與腫瘤多藥耐藥有關(guān)的ABC蛋白〔12〕，本研究結(jié)果提示MRP1及BCRP可能參與了食管癌多藥耐藥的產(chǎn)生以及與食管癌的惡性度有關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)BCRP與腫瘤干細(xì)胞關(guān)系密切〔13～15〕，是腫瘤干細(xì)胞的標(biāo)記物。“腫瘤干細(xì)胞學(xué)說”認(rèn)為腫瘤干細(xì)胞可以逃逸化療藥物及機(jī)體免疫的殺傷，從而存活下來成為腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的根源。本研究的結(jié)果與此學(xué)說觀點(diǎn)相一致，實(shí)驗(yàn)中觀察到有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌組織中BCRP蛋白表達(dá)水平顯著增高，可以作為判斷食管癌惡性度及預(yù)后的指標(biāo)從而指導(dǎo)臨床。

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